一种降低多粘菌素B发酵液中杂质Z1含量的方法与流程

本发明涉及微生物制药，尤其是一种一种降低多粘菌素b发酵液中杂质z1含量的方法。

背景技术：

1、多粘菌素b(多黏菌素b、硫酸多粘菌素b)是由多种氨基酸和脂肪酸组成的环多肽类抗生素，由多粘芽孢杆菌发酵产生，发酵产物主要由已知的4个主要组分b1、b2、b3、b1-i，以及许多结构未知的杂质构成。药典中对原料药硫酸多粘菌素b含量要求：按干品计，多粘菌素b1、b2、b3、b1-i总质量分数≥80％，b3质量分数≤6.0％，b1-i质量分数≤15.0％；有关物质要求：杂质峰按照面积归一化方法计算，总杂质量分数≤17.0％，最大单杂≤3.0％。

2、硫酸多粘菌素b在发酵生产过程中，发酵配方不同、控制参数不同，发酵液中的各组分与杂质的含量会发生较大变化。杂质控制是硫酸多粘菌素b生产过程中的难点，为保证产品质量，提取阶段需要不断增加提取步骤，将会大大降低产品收率。

3、现有发酵技术中，发酵液使用中国药典高效液相色谱仪检测有关物质，b1-i峰前的杂质峰，现有提取技术可有效去除，而b1-i峰后方紧邻一杂质峰，命名为z1，其结构未知，提取不能有效去除，z1含量超过3.0％会影响产品质量，造硫酸多粘菌素b成品质量不能达到药典要求。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种z1去除效果好的降低多粘菌素b发酵液中杂质z1含量的方法。

2、为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案包括以下步骤：s1、在种子培养基中接入多粘芽孢杆菌，培养至种子成熟；

3、s2、培养成熟后的种子移入发酵培养基中进行发酵培养；

4、s3、发酵培养过程中，发酵培养12～16小时开始至发酵培养结束补加乙酸钠补料，每小时补入0.0003～0.0005发酵液体积的乙酸钠溶液。

5、进一步的，所述步骤s1，种子培养基的主要原料配比为：每100ml培养基中含有小麦面粉3g～4g、淀粉酶0.01g～0.02g、葡萄糖0.4g～0.6g、低温豆粉0.4g～0.6g、玉米浆0.2g～0.4g、硫酸铵0.4g～0.6g、磷酸二氢钾0.02g～0.03g、碳酸钙0.3～0.5g，以及水。

6、进一步的，所述步骤s2，发酵培养基的主要原料配比为：每100ml培养基中含有小麦面粉8.0g～9.0g、淀粉酶0.1g～0.2g、葡萄糖0.4g～0.6g、低温豆粉0.4g～0.6g、玉米浆0.2g～0.4g、硫酸铵0.4g～0.6g、磷酸二氢钾0.02g～0.03g、碳酸钙0.3～0.5g，以及水。

7、进一步的，所述步骤s3，乙酸钠溶液w/v浓度为3～7％。

8、采用上述技术方案所产生的有益效果在于：多粘菌素b的有效组分b1、b2、b3、b1-i是由氨基酸和脂肪链组成的多肽类抗生素，乙酰辅酶a在代谢过程中会促进氨基酸和脂肪链的合成，而乙酸根在代谢过程中被菌体吸收后，可以被直接用于乙酰辅酶a的合成；本发明通过乙酸钠的补加可以保证发酵液ph的相对稳定，从而促进目的产物的合成，提高有效产物含量，降低杂质含量；最终杂质z1含量可降低到2.81％以下，最低可降低至2.05％，降低至原含量的65％，有效提升了硫酸多粘菌素b成品质量。

技术特征：

1.一种降低多粘菌素b发酵液中杂质z1含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、在种子培养基中接入多粘芽孢杆菌，培养至种子成熟；

2.根据权利要求1所述的一种降低多粘菌素b发酵液中杂质z1含量的方法，其特征在于：所述步骤s1，种子培养基的主要原料配比为：每100ml培养基中含有小麦面粉3g～4g、淀粉酶0.01g～0.02g、葡萄糖0.4g～0.6g、低温豆粉0.4g～0.6g、玉米浆0.2g～0.4g、硫酸铵0.4g～0.6g、磷酸二氢钾0.02g～0.03g、碳酸钙0.3～0.5g，以及水。

3.根据权利要求1所述的一种降低多粘菌素b发酵液中杂质z1含量的方法，其特征在于：所述步骤s2，发酵培养基的主要原料配比为：每100ml培养基中含有小麦面粉8.0g～9.0g、淀粉酶0.1g～0.2g、葡萄糖0.4g～0.6g、低温豆粉0.4g～0.6g、玉米浆0.2g～0.4g、硫酸铵0.4g～0.6g、磷酸二氢钾0.02g～0.03g、碳酸钙0.3～0.5g，以及水。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种降低多粘菌素b发酵液中杂质z1含量的方法，其特征在于：所述步骤s3，乙酸钠溶液w/v浓度为3～7%。

技术总结
本发明公开了一种降低多粘菌素B发酵液中杂质Z1含量的方法，包括以下步骤：S1、在种子培养基中接入多粘芽孢杆菌，培养至种子成熟；S2、培养成熟后的种子移入发酵培养基中进行发酵培养；S3、发酵培养过程中，发酵培养12～16小时开始至发酵培养结束补加乙酸钠补料，每小时补入0.0003～0.0005发酵液体积的乙酸钠溶液。本方法通过乙酸钠的补加可以保证发酵液pH的相对稳定，从而促进目的产物的合成，提高有效产物含量，降低杂质含量；最终杂质Z1含量可降低到2.81%以下，最低可降低至2.05%，降低至原含量的65%，有效提升了硫酸多粘菌素B成品质量。

技术研发人员：于立超,徐珍,王绘砖,李贤哲
受保护的技术使用者：河北圣雪大成制药有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22