一种用于测定FGF14基因GAA和GAAGCA重复单元的引物组及其应用的制作方法

本发明涉及临床分子检测，尤其涉及一种用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的引物组及其应用。

背景技术：

1、成纤维细胞生长因子14(fgf14)是成纤维细胞生长因子中的一员，基因包含5个外显子，4个内含子，有两个不同的剪切本形式。这一家族成员具有广泛的有丝分裂和细胞存活活性，参与胚胎发育、细胞生长、形态发生、组织修复、肿瘤生长和侵袭等多种生物学过程。

2、目前研究表明脊髓小脑共济失调有30多种类型，其中fgf14基因与脊髓小脑共济失调27型(sca27)密切相关。研究发现fgf14基因的点突变、插入缺失、移码突变均会引起sca27。研究显示患者的发病年龄差异很大，一些患者在婴儿期就出现眼球震颤或运动发育迟缓，而另一些患者则在成年时出现震颤或步态困难。疾病进展缓慢，共济失调可能非常轻微，甚至不存在共济失调表型。

3、2023年b.brais在128位迟发性小脑共济失调病人的基因组中发现fgf14 gaa≥250重复扩增。且患者基因组出现这一重复扩增的概率要远远高于健康人。对于法裔加拿大人和德国人，罹患迟发性小脑共济失调的概率与fgf14 gaa≥250具有强相关性。而大脑样本以及诱导型多能干细胞来源的运动神经元细胞系显示，与健康人相比，迟发性小脑共济失调病人fgf14的rna水平以及蛋白质水平表达量均明显降低。

4、通过基因组研究表明fgf14发生gaa重复区域的重复单元较为多样，除了gaa重复外，gaagca重复单元在东亚人群中也较为常见。

5、针对fgf14基因的点突变、插入缺失、移码突变可以使用较为常规的pcr扩增后进行sanger测序、外显子捕获测序或全基因组测序进行相关检测分析。

6、然后对于fgf14 gaa≥250重复扩增使用sanger测序、外显子捕获测序或全基因组测序等常规检测手段较难对其进行检测。通常需要使用longrange-pcr等方法进行pcr扩增后，电泳检测。时间周期长，且无法精确计算重复数。虽然三代测序也可以解决此类问题，但是实验成本显著提高。本方法使用重复引物pcr技术，在检测fgf14 gaa重复扩增的同时可以检测gaagca重复，并有效控制检测成本。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的引物组，使用重复引物pcr技术，在检测fgf14 gaa重复扩增的同时可以检测gaagca重复，解决了现有技术检测周期长，且无法精确计算重复数，检测成本高的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的引物组，所述引物组包括fgf14-f、fgf14-gaa、fgf14-gaagca和fgf14-anchor；

4、所述fgf14-f的核苷酸序列如seq id no.1所示；

5、所述fgf14-gaa的核苷酸序列如seq id no.2所示；

6、所述fgf14-gaagca的核苷酸序列如seq id no.3所示；

7、所述fgf14-anchor的核苷酸序列如seq id no.4所示。

8、作为优选，所述引物组用于测定fgf14基因gaa重复单元时，采用fgf14-f、fgf14-gaa和fgf14-anchor；

9、所述引物组用于测定fgf14基因gaagca重复单元时，采用fgf14-f、fgf14-gaagca和fgf14-anchor。

10、本发明还提供了所述引物组在制备用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的试剂盒中的应用。

11、本发明还提供了一种含有引物组的试剂盒。

12、作为优选，所述试剂盒还包括酶kod fx、2mm dntp和2×pcrbuffer。

13、本发明提供了一种用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的引物组及其应用，所述引物组包括fgf14-f、fgf14-gaa、fgf14-gaagca和fgf14-anchor。本发明针对fgf14基因的gaa和gaagca重复设计引物，通过进行普通pcr扩增及重复引物pcr扩增，而后使用毛细管电泳检测。毛细管电泳检测灵敏度高、分辨率高，并且可以有效控制检测成本，能够实现定量检测重复数。可以判断fgf14基因是否为纯的gaa或gaagca重复。

技术特征：

1.一种用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的引物组，其特征在于，所述引物组包括fgf14-f、fgf14-gaa、fgf14-gaagca和fgf14-anchor；

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组用于测定fgf14基因gaa重复单元时，采用fgf14-f、fgf14-gaa和fgf14-anchor；

3.权利要求1所述的引物组在制备用于测定fgf14基因gaa和gaagca重复单元的试剂盒中的应用。

4.一种含有权利要求1或2所述引物组的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶kod fx、2mm dntp和2×pcrbuffer。

技术总结
本发明涉及分子检测技术领域，本发明提供了一种用于测定FGF14基因GAA和GAAGCA重复单元的引物组及其应用，所述引物组包括FGF14‑F、FGF14‑GAA、FGF14‑GAAGCA和FGF14‑Anchor。本发明针对FGF14基因的GAA和GAAGCA重复设计引物，通过进行普通PCR扩增及重复引物PCR扩增，而后使用毛细管电泳检测。毛细管电泳检测灵敏度高、分辨率高，并且可以有效控制检测成本，能够实现定量检测重复数。可以判断FGF14基因是否为纯的GAA或GAAGCA重复。

技术研发人员：范嘉庚,詹兴,李兴盛,吴志强,马赛勇,沈奇
受保护的技术使用者：杭州祥音医学检验实验室有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15