一种鳄蜥雌性特异引物及其性别鉴定方法

本发明属于性别鉴定领域，具体涉及一种鳄蜥雌性特异引物及其性别鉴定方法。

背景技术：

1、鳄蜥(shinisaurus crocodilurus)是我国一级重点保护动物，它的分类地位隶属于爬行纲、有鳞目、鳄蜥科、鳄蜥属，被誉为爬行类的“活化石”。目前人工繁育后放归野外是鳄蜥保护的一个重要措施，在深入研究鳄蜥的繁殖生物学时，首先要能对鳄蜥的雌雄个体加以准确鉴别，在人工繁育过程中也需要尽早鉴别雌雄个体，从而合理搭配雌雄比例。

2、目前对于鳄蜥的性别决定机制了解很少，鳄蜥的染色体核型显示，鳄蜥并不存在异形染色体。鳄蜥第二性征不明显。对于成体鳄蜥，在统计数据上存在体色和头部、躯干等局部特征的两性异形，如成年雄性鳄蜥头胸腹面是浅蓝色或鲜红色，而雌性是浅黄色或淡红色。实际上，鳄蜥的体色变异比已有报道更丰富，而且相同个体的色斑类型也可随着年龄发生变化。在个体的性别鉴定中，依靠外观分辨鳄蜥的性别可靠性低、依赖养殖人员的长期观察经验。对于幼体鳄蜥，雌雄外观一致，无法通过观察其外部形态进行性别鉴定。因此，该领域需要一种准确、便捷的性别鉴定方法。

技术实现思路

1、针对目前没有一种可靠、便捷的鳄蜥雌雄鉴别方法，本发明的目的是提供一种准确的、可重复的、便捷的鳄蜥性别鉴定方法，通过无损伤采集唾液或皮屑的dna，应用雌雄特异引物可在pcr和琼脂糖凝胶电泳的条件下快速判断鳄蜥的性别，不依赖于鳄蜥养殖人员的养殖经验。

2、本发明的第一个目的是提供一种不管是成体还是幼体鳄蜥均可准确判断其性别的鳄蜥雌性特异引物，具体为：

3、exw-f1：5’-attcacttcgagggagaatga-3’

4、exw-r1：5’-gcatcggtaatcgcattgaca-3’。

5、本发明的第二个目的是提供一种鳄蜥性别鉴定方法，包括以下步骤：

6、提取待测鳄蜥的基因组dna，然后用上述特异引物进行扩增，琼脂糖凝胶电泳检测后，若在557bp处有特异条带，则说明该样本对应的是雌性鳄蜥，若无条带，则是雄性鳄蜥。

7、优选，所述的反应体系：2×taq pcr mix 12.5μl，dna模板1.0μl，模板使用量可以根据dna的浓度进行调整，浓度为10μmol/l的正、反向引物各0.5μl，用无菌去离子水补齐至25μl。

8、优选，所述的pcr反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s,57～63℃退火30s,72℃延伸30s,循环35次；72℃终延伸8min。

9、由于鳄蜥没有明显的第二性征，现有技术缺乏一种可靠的雌雄鉴定方法，尤其是幼体鳄蜥更是无法判断性别。本发明采用的是基于基因组信息的分子生物学方法，通过pcr方法进行检测，具有重复性高、可靠性强、通量高、不依赖养殖人员的经验等优点，不管是成体还是幼体鳄蜥均可准确判断其性别。

技术特征：

1.一种鳄蜥雌雄性特异引物，其特征在于，具体为：

2.一种鳄蜥性别鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述的反应体系：2×taq pcrmix12.5μl，dna模板1.0μl，模板使用量可以根据dna的浓度进行调整，浓度为10μmol/l的正、反向引物各0.5μl，用无菌去离子水补齐至25μl。

4.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述的pcr反应程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s,57～63℃退火30s,72℃延伸30s,循环35次；72℃终延伸8min。

技术总结
本发明公开了一种鳄蜥雌性特异引物及其性别鉴定方法。提取待测鳄蜥的基因组DNA，然后用上述特异引物进行扩增，琼脂糖凝胶电泳检测后，若在557bp处有特异条带，则说明该样本对应的是雌性鳄蜥，若无条带，则是雄性鳄蜥。由于鳄蜥没有明显的第二性征，现有技术缺乏一种可靠的鳄蜥雌雄鉴定方法，尤其是幼体鳄蜥更是无法判断性别。本发明采用的是基于基因组信息的分子生物学方法，通过PCR方法进行检测，具有重复性高、可靠性强、通量高、不依赖养殖人员的经验等优点，不管是成体还是幼体鳄蜥均可准确判断其性别。

技术研发人员：江海英,陈金平,谢鸿鑫,罗树毅,周佳滨,赵志文,谢木娇,张秀娟,李林妙
受保护的技术使用者：广东省科学院动物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12