一种以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法

本发明涉及生物菌体发酵培养，具体涉及一种以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法。

背景技术：

1、球孢白僵菌(beauveria bassiana)是广泛应用于害虫生物防治的一种昆虫病原真菌，国内外已有多种商品制剂注册生产。近年来由于化学农药的滥用，不仅造成环境污染，还对人畜健康产生危害，昆虫病原真菌具有防治效果好、无残留、昆虫不易产生抗性等一系列优点。白僵菌寄主范围广，具有致病力强、持效长、无毒无污染等优点，有广阔应用前景。球孢白僵菌的发酵技术较为成熟，发酵受影响因素较多，最主要因素有培养基成分组成、含水量、发酵周期等。目前球孢白僵菌发酵工艺原料常采用大米、大豆粉、玉米粉、麦麸、谷壳、米糠等。利用粮食类农产品为原料不仅成本较高，原料利用率问题也会导致粮食大量浪费。

2、秸秆是成熟农作物茎叶的总称，作为重要的生物质能源，用途很多，如燃料、肥料、家畜饲料等，但目前作物秸秆主要直接还田，但由于降解慢，还是带来了不少耕作方面的问题，需要有新的秸秆综合利用和深度利用技术出现。作物秸秆种类繁多，有纤维素、半纤维素、蛋白、酯类和微量元素等丰富营养成分，可以作为蘑菇等大型真菌培养基质使用，也具有微生物发酵基质的潜力。如果能利用秸秆作为重要昆虫病原真菌球孢白僵菌的固体发酵主基质，则不仅有效降低了白僵菌的工业化生产成本，还为秸秆的综合利用提供了新的科学应用途径。

3、公布号为cn115316490a的中国专利申请文献，一种利用小麦秸秆发酵凝结芽孢杆菌饲料的制备方法，该方法包括菌种活化、液态种子培养基制备、扩培接种、固态发酵基制备、发酵接种、预处理和饲料制备等步骤，发酵过程采用固态发酵，操作起来更加简单，发酵所得的饲料仅需简单的干燥和破碎后既能够投入使用；采用麦秆进行固态发酵工作，保证了发酵饲料中凝结芽孢杆菌的芽孢率和细胞数，同时，该发酵饲料中仅添加一种凝结芽孢杆菌，所得发酵饲料中凝结芽孢杆菌的芽孢率和细胞数均较高，一方面做到了麦秆的有效利用，另一方面在使用该发酵饲料使能够为动物提供充足的凝结芽孢杆菌，来对动物的肠道环境进行调节，切实做到了秸秆的有效利用。使得小麦秸秆到了有效的利用。但该专利并未用小麦秸秆培养球孢白僵菌。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于如何解决以小麦为主要基质的球孢白僵菌的发酵产孢量较低的问题。

2、本发明通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：

3、一种以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，包括以下步骤：

4、(1)小麦秸秆预处理：先将小麦秸秆切割，然后进行高压蒸汽灭菌处理；所述小麦秸秆切割的长度大于等于20mm；

5、(2)将复合培养基与球孢白僵菌种子发酵液，搅拌均匀，铺平，12l﹕12d光照条件下24-26℃恒温发酵培养，即得；所述复合培养基的厚度小于等于3cm；所述复合培养基由经步骤(1)处理获得的小麦秸秆和氮源添加物组成。

6、有益效果：本发明通过以小麦秸秆为主要基质，通过控制秸秆切割长度、添加氮源以及调整培养基初始含水率的方法，显著提高了球孢白僵菌的产孢量。

7、优选的，所述步骤(2)中球孢白僵菌种子发酵液的接种量为15-25％。

8、优选的，所述步骤(2)中发酵的温度为25℃。

9、优选的，所述步骤(2)中复合培养基的初始含水率为55-75％。

10、优选的，所述步骤(2)中复合培养基的初始含水率为65％。

11、优选的，所述步骤(2)中氮源添加物选自麦麸、大豆粉、玉米粉中的一种或多种。

12、优选的，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由80％的小麦秸秆和20％的大豆粉组成。

13、优选的，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由70％的小麦秸秆、10％的麦麸和20％大豆粉组成。

14、优选的，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由70％的小麦秸秆和30％玉米粉组成。

15、优选的，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由60％的小麦秸秆和40％的氮源添加物组成。

16、本发明的优点在于：

17、1、本发明通过以小麦秸秆为主要基质，通过控制秸秆切割长度、添加氮源以及调整培养基初始含水率的方法，显著提高了球孢白僵菌的产孢量。

18、2、本发明通过对氮源添加物的选择和配比的筛选，发现当复合培养基为60％的小麦秸秆、10％的大豆粉和30％的玉米粉时，球孢白僵菌的产孢量最高，达到1.13×1010孢子/g。

19、3、本发明研究发现，当以小麦为主要基质的复合培养基的初始含水率控制在55-75％时，有利于白僵菌在固体培养基上的产孢量的提升。

技术特征：

1.一种以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中球孢白僵菌种子发酵液的接种量为15-25％。

3.根据权利要求1所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中发酵的温度为25℃。

4.根据权利要求1所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合培养基的初始含水率为55-75％。

5.根据权利要求4所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合培养基的初始含水率为65％。

6.根据权利要求1所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中氮源添加物选自麦麸、大豆粉、玉米粉中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由80％的小麦秸秆和20％的大豆粉组成。

8.根据权利要求6所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由70％的小麦秸秆、10％的麦麸和20％大豆粉组成。

9.根据权利要求6所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由70％的小麦秸秆和30％玉米粉组成。

10.根据权利要求1或6所述的以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中复合培养基按质量百分数计，由60％的小麦秸秆和40％的氮源添加物组成。

技术总结
本发明公开了一种以小麦秸秆为主要基质的球孢白僵菌发酵培养方法，属于生物菌体发酵培养技术领域。方法包括以下步骤：(1)先将小麦秸秆切割，然后进行高压蒸汽灭菌处理；所述小麦秸秆切割的长度大于等于20mm；(2)将复合培养基与球孢白僵菌种子发酵液，搅拌均匀，铺平，12L﹕12D光照条件下24‑26℃恒温发酵培养，即得；所述复合培养基的厚度小于等于3cm；所述复合培养基由经步骤(1)处理获得的小麦秸秆和氮源添加物组成。有益效果：本发明通过以小麦秸秆为主要基质，通过控制秸秆切割长度、添加氮源以及调整培养基初始含水率的方法，显著提高了球孢白僵菌的产孢量。

技术研发人员：王滨,吴航天,李照坤
受保护的技术使用者：安徽农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15