天赐霉素类似物及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种天赐霉素类似物、制备方法及其抗肿瘤应用。

背景技术：

1、天赐霉素(tiancimycins，英文简字tnm)是2016年从菌株streptomycessp.cb03234的发酵产物中分离发现的一类十元环烯二炔类抗肿瘤抗生素。烯二炔类化合物具有独特的分子结构和极强的的细胞毒性。自从新制癌菌素(ncs)发色团结构在1985年首次亮相之后，烯二炔类化合物数量稳步增长，但数量依然很少，只有15个结构特征化合物和4个以其芳构化形式的化合物被发现。根据烯二炔核心结构的大小分为两个子类别，分别为九元环烯二炔和十元环烯二炔。烯二炔核心结构发生伯格曼环化，形成活性中间体苯环双自由基并且定位于dna的小沟，通过亲核攻击捕获dna磷酸脱氧核糖核酸链上的氢原子，从而使dna单链或双链的断裂；这一dna损伤机制是烯二炔类抗生素用于肿瘤化疗的分子基础。

2、1994年，新制癌菌素上市用于治疗肝癌。基于烯二炔卡里奇霉素的抗体偶联药物mylotarg和besponsa，通过靶向cd33或cd22，用于治疗急性骨髓性白血病或成人复发难治性b细胞白血病。此外，针对特定肿瘤的单克隆抗体(mab)与其它烯二炔c-1027、shishijimicins或uncialamycin等的抗体偶联物正在进行临床或临床前研究。自从1989年，第一个蒽醌骈合烯二炔dynemicin a(dyn a)被发现以来，先后有uncialamycin(ucm),tiancimycin a(tnm a)，yangpumicin a(ypm a)和sealutomicin被发现(如图1)。目前发现的蒽醌骈合烯二炔一般包含一个环氧官能团(epoxide)(图1蓝色)，参与激活蒽醌骈合烯二炔进行芳构化反应。但是该环氧官能团的存在导致蒽醌骈合烯二炔不稳定，因此使得蒽醌骈合烯二炔化合物的应用非常有限。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种新的结构稳定的天赐霉类似物。

2、为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

3、一种天赐霉素类似物，其结构式如下：

4、

5、以下将其命名为tnm w。

6、本发明还要求保护所述天赐霉素类似物的制备方法，包括以下步骤：

7、s1、发酵：将10vol％的streptomyces sp.cb03234-s的种子培养物接种至发酵培养基中发酵2-8d，得到发酵产物；

8、s2、分离：将发酵产物过滤、etoh洗脱、浓缩、乙酸乙酯溶液萃取，得到乙酸乙酯可溶部分；将乙酸乙酯可溶部分进一步浓缩、纯化，得到天赐霉素类似物tnm w。

9、优选的，所述步骤s1中发酵培养基(每升)中为：可溶性淀粉15g/l，酵母浸粉15g/l，cuso4 0.05g/l，nai 5mg/l，caco3 2g/l，1％大孔树脂hp20。

10、优选的，步骤s1中streptomyces sp.cb03234-s预先培养在含有500ml胰蛋白酶大豆肉汤的烧瓶中24-48h。

11、优选的，步骤s1中10vol％的streptomyces sp.cb03234-s的种子培养物的发酵条件为：30℃,220rpm下培养4-8d。

12、优选的，步骤s2中，发酵产物通过离心分离或通过金属筛(60目)过滤富集，用h2o洗涤并在室温下在空气中干燥。

13、优选的，步骤s2中，步骤b中过滤后的发酵产物用etoh洗脱并在真空下浓缩，再用etoac：h2o(1:1)溶液萃取三次，得到乙酸乙酯可溶部分。

14、优选的，步骤s2中，粗提物用combiflash 200中压制备色谱仪进行纯化纯化工艺为：用flash column c-18柱以10ml/min的流速洗脱，洗脱溶剂为质量比为1:1到1:9的h2o:meoh，得到组分fr.1-fr.9；再将fr.9通过半制备hplc在aq-c18柱上使用60％的mecn水溶液的溶剂系统纯化，得到粗产物，粗产物经lh20凝胶纯化，得到纯度大于95％的天赐霉素类似物tnm w。

15、其中，streptomyces sp.cb03234-s为已有的高产菌株，其保藏编号为cctcc m2017538。

16、所述步骤s2后还包括检测，所述检测包括圆二色谱、高分辨质谱、核磁共振、高效液相色谱分析。

17、本发明进一步地提供所述天赐霉素类似物在制备抗肿瘤药物中的应用。

18、优选的，所述肿瘤包括治疗鳞状上皮细胞癌，包括鳞状上皮细胞癌、皮肤癌、头颈部癌、食管癌、肺癌、宫颈癌、阴道癌、阴茎癌、恶性淋巴瘤、脑瘤、甲状腺癌、生殖细胞瘤、恶性黑色素瘤、神经胶质瘤、霍奇金淋巴瘤、睾丸癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、肺癌、结肠癌及消化道肿瘤。

19、优选的，所述肿瘤包括肺癌细胞系a549、乳腺肿瘤细胞系kpl-4和。

20、下面对本发明做进一步的解释：

21、本发明提供了一种天赐霉素类似物，具体是通过对streptomyces sp.cb03234-s微生物发酵所得次级代谢产物中，分离得到这种新的天赐霉素类似物；同时发现tnm w使肿瘤细胞的生存能力大大降低，具有有效的杀死多种类型的肿瘤细胞系的能力。

22、由于目前发现的蒽醌骈合烯二炔一般都具有环氧官能团的核心结构，而环氧官能团的酸敏感性导致在强酸条件下容易开环，从而导致烯二炔环的伯格曼环化，最终失去生物活性。而本发明中tnm w无环氧官能团存在，取而代之的是碳碳双键，这有利于其在强酸ph 3.0的环境下保持稳定，有利于其作为抗肿瘤的口服药物来应用。

23、上述技术方案，本发明的天赐霉素类似物tnm w与现有的含有蒽醌骈合烯二炔结构的化合物相比具有如下明显的优势：

24、(1)本发明中的天赐霉素类似物tnm w针对正常细胞与两种肿瘤细胞a549，kpl-4选择性提高，与tnm a相比具有更大的治疗窗口；

25、(2)本发明中的天赐霉素类似物tnm w在强酸及ph 3.0下结构保持稳定，这有利于后期对其结构改造和药物的应用。

技术特征：

1.一种天赐霉素类似物，其特征在于，其结构式如下：

2.如权利要求1所述的所述天赐霉素类似物的制备方法，，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，每升发酵培养基中为：可溶性淀粉15g/l，酵母浸粉15g/l，cuso4 0.05g/l，nai 5mg/l，caco3 2g/l，1％大孔树脂hp20。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s1中10vol％的streptomycessp.cb03234-s的种子培养物的发酵条件为：30℃,220rpm下培养4-8d。

5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s2中，步骤b中过滤后的发酵产物用etoh洗脱并在真空下浓缩，再用etoac﹕h2o为1:1的溶液萃取三次，得到乙酸乙酯可溶部分。

6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤s2中，粗提物用combiflash 200中压制备色谱仪进行纯化，纯化工艺为：用flash column c-18柱以10ml/min的流速洗脱，洗脱溶剂为质量比为1:1到1:9的h2o:meoh，得到组分fr.1-fr.9；再将fr.9通过半制备hplc在aq-c18柱上使用60％的mecn水溶液的溶剂系统纯化，得到粗产物，粗产物经lh20凝胶纯化，得到纯度大于95％的天赐霉素类似物tnm w。

7.如权利要求1所述的天赐霉素类似物在制备抗肿瘤药物中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌和乳腺肿瘤。

技术总结
本发明公开了一种天赐霉素类似物，其特征在于，其结构式如下：本发明中天赐霉素类似物含有一种全新的十元环烯二炔核心结构，环氧官能团缺失，取而代之的是碳碳双键结构。TNM W针对正常细胞与两种肿瘤细胞A549，KPL‑4选择性提高，与TNM A相比具有更大的治疗窗口，且在强酸及pH 3.0下结构保持稳定，这有利于后期对其结构改造和药物的应用。因此，该化合物作为有效的抗肿瘤化合物更有应用前景。

技术研发人员：段燕文,黄勇,朱湘成,文仲庆,庄周康
受保护的技术使用者：长沙天赐生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19