抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体及其应用

本发明涉及辣椒轻斑驳病毒生物防治，特别涉及抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、辣椒轻斑驳病毒(pmmov)属于帚状病毒科(virgaviridae)烟草花叶病毒属(tobamovirus)的无包膜正单链rna病毒。在电镜下，辣椒轻斑驳病毒呈现为直杆状，长度约为310±10nm，直径约为18nm。自然条件下，辣椒轻斑驳病毒主要侵染辣椒，未见其自然侵染其他植物的报道；人工接种可侵染茄科部分寄主，不能侵染番茄。辣椒轻斑驳病毒病主要为害叶片和果实。侵染后叶片症状不明显或呈现轻度褪绿、皱缩，严重时会出现斑驳或黄绿相间的花叶症状；植株生长明显缓慢，发病越早矮化越严重。果实发病症状比较明显，病果往往扁平、变小、畸形，呈现浅褐色至深褐色的坏死斑点、条纹或浅黄色斑驳，有时产生凹陷的坏死部，果实失去商品性和食用价值，给我国辣椒生产造成了重大的经济损失。因此，针对辣椒轻斑驳病毒的生物防治技术的研究，成为了辣椒产业的重点难题。

技术实现思路

1、本发明提供了抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体及其应用，将制备获得的单克隆抗体37-c2-g8、38-b3-d9-b3单独使用，或联合使用时，能够精确测定农作物的辣椒轻斑驳病毒，具有较高的特异性和灵敏性，具体通过以下技术实现。

2、抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体为抗体37-c2-g8或抗体38-b3-d9-b3；所述抗体37-c2-g8的重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.1-3所示，轻链可变区的互补决定区cdr1和cdr3的氨基酸序列依次如seq idno.4和seq id no.5所示，轻链可变区的互补决定区cdr2的氨基酸序列为aas；所述抗体38-b3-d9-b3的重链可变区的互补决定区cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别如seq id no.6-8所示；轻链可变区的互补决定区cdr1和cdr3的氨基酸序列依次如seq id no.9和seq idno.10所示，轻链可变区的互补决定区cdr2的氨基酸序列为yts。

3、优选地，所述抗体37-c2-g8的重链可变区的框架区fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列如seq id no.11-14所示；所述抗体37-c2-g8的轻链可变区的框架区fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列如seq id no.15-18所示；

4、所述抗体38-b3-d9-b3的重链可变区的框架区fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列如seq id no.19-22所示；所述抗体38-b3-d9-b3的轻链可变区的框架区fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列如seq id no.23-25和seq id no.18所示。

5、优选地，所述抗体37-c2-g8的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.26所示，所述抗体37-c2-g8的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.27所示；

6、所述抗体38-b3-d9-b3的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.28所示，所述抗体38-b3-d9-b3的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.29所示。

7、更优选地，所述抗体37-c2-g8的重链的氨基酸序列如seq id no.30所示，所述抗体37-c2-g8的轻链的氨基酸序列如seq id no.31所示；

8、所述抗体38-b3-d9-b3的重链的氨基酸序列如seq id no.32所示，所述抗体38-b3-d9-b3的轻链的氨基酸序列如seq id no.33所示。

9、进一步优选地，表达所述抗体37-c2-g8的重链的核苷酸序列如seq id no.34所示，表达所述抗体37-c2-g8的轻链的核苷酸序列如seq id no.35所示；

10、表达所述抗体38-b3-d9-b3的重链的核苷酸序列如seq id no.36所示，表达所述抗体38-b3-d9-b3的轻链的核苷酸序列如seq id no.37所示。

11、本发明提供了上述的单克隆抗体在检测辣椒轻斑驳病毒，或者制备检测辣椒轻斑驳病毒的产品中的应用。

12、本发明还提供了一种检测辣椒轻斑驳病毒的方法，采用上述的单克隆抗体，进行elisa检测、蛋白质免疫印迹检测、胶体金检测、化学发光免疫检测、免疫组织化学法检测。

13、优选地，使用elisa法检测辣椒轻斑驳病毒时，所述单克隆抗体的稀释度为1:(10000-20000)；使用蛋白质免疫印迹法检测辣椒轻斑驳病毒时，所述单克隆抗体的稀释度为1:(1000-4000)；使用免疫组织化学法或化学发光免疫法检测辣椒轻斑驳病毒时，所述单克隆抗体的稀释度为1:(50-200)。

14、本发明还提供了一种检测检测辣椒轻斑驳病毒的elisa试剂盒，所述elisa试剂盒为间接elisa试剂盒时，含有上述单克隆抗体37-c2-g8或38-b3-d9-b3；所述elisa试剂盒为双抗夹心elisa试剂盒时，含有上述单克隆抗体，并且所述抗体38-b3-d9-b3为检测抗体/包被抗体，相应地所述抗体37-c2-g8为包被抗体/检测抗体。

15、需要说明的是，本发明提供的两种单克隆抗体，可以应用的检测辣椒轻斑驳病毒的产品包括但不限于elisa检测试剂盒、western blot检测试剂盒、胶体金检测试剂盒和化学发光免疫分析试剂盒，以及相应的检测技术方法。

16、与现有技术相比，本发明的有益之处在于：本发明提供了一种抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体37-c2-g8或单克隆抗体38-b3-d9-b3，对辣椒轻斑驳病毒具有非常高的亲和力和良好的热稳定性，灵敏度高，特异性好；可以广泛应用于elisa检测、western blot(wb)检测、胶体金检测、化学发光免疫检测(if，即免疫荧光法)和免疫组化检测(ihc)等检测技术中。

技术特征：

1.抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为抗体37-c2-g8或抗体38-b3-d9-b3；

2.根据权利要求1所述的抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体37-c2-g8的重链可变区的框架区fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列如seq id no.11-14所示；所述抗体37-c2-g8的轻链可变区的框架区fr1、fr2、fr3、fr4的氨基酸序列如seq id no.15-18所示；

3.根据权利要求1所述的抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体37-c2-g8的重链可变区的氨基酸序列如seq id no.26所示，所述抗体37-c2-g8的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.27所示；

4.根据权利要求3所述的抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体37-c2-g8的重链的氨基酸序列如seq id no.30所示，所述抗体37-c2-g8的轻链的氨基酸序列如seq id no.31所示；

5.根据权利要求4所述的抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体，其特征在于，表达所述抗体37-c2-g8的重链的核苷酸序列如seq id no.34所示，表达所述抗体37-c2-g8的轻链的核苷酸序列如seq id no.35所示；

6.权利要求1-5任一项所述的单克隆抗体在检测辣椒轻斑驳病毒，或者制备检测辣椒轻斑驳病毒的产品中的应用。

7.一种检测辣椒轻斑驳病毒的方法，其特征在于，采用权利要求1-5任一项所述的单克隆抗体，进行elisa检测、蛋白质免疫印迹检测、胶体金检测、化学发光免疫检测、免疫组织化学法检测。

8.根据权利要求7所述的检测辣椒轻斑驳病毒的方法，其特征在于，使用elisa法检测辣椒轻斑驳病毒时，所述单克隆抗体的稀释度为1:(10000-20000)；使用蛋白质免疫印迹法检测辣椒轻斑驳病毒时，所述单克隆抗体的稀释度为1:(1000-4000)；使用免疫组织化学法或化学发光免疫法检测辣椒轻斑驳病毒时，所述单克隆抗体的稀释度为1:(50-200)。

9.一种检测检测辣椒轻斑驳病毒的elisa试剂盒，其特征在于，所述elisa试剂盒为间接elisa试剂盒时，含有权利要求1-5任一项所述的单克隆抗体；

10.根据权利要求9所述的elisa试剂盒，其特征在于，所述elisa试剂盒为双抗夹心elisa试剂盒时，所述抗体38-b3-d9-b3为包被抗体，相应地所述抗体37-c2-g8为检测抗体。

技术总结
本发明公开了一种抗辣椒轻斑驳病毒的单克隆抗体及其应用，涉及辣椒轻斑驳病毒生物防治技术领域，所述单克隆抗体为抗体37‑C2‑G8或抗体38‑B3‑D9‑B3；抗体37‑C2‑G8的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑3所示，轻链可变区CDR1和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，轻链可变区CDR2的氨基酸序列为AAS。抗体38‑B3‑D9‑B3的重链可变区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6‑8所示；轻链可变区CDR1和CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示，CDR2的氨基酸序列为YTS。本发明提供了的单克隆抗体对辣椒轻斑驳病毒具有非常高的亲和力和良好的热稳定性，灵敏度高，特异性好，应用广泛。

技术研发人员：严丹侃,王芳,韩科雷,马超,陈莹,李婷
受保护的技术使用者：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15