一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccP及其制备方法和在水貂饲料中的应用

本发明属于饲料研究，尤其涉及一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp及其制备方法和在水貂饲料中的应用。

背景技术：

1、自20世纪40年代，gorham首次报道感染沙门菌导致水貂流产以来，相继在其它国家发现水貂感染沙门菌；1957年在丹麦水貂中首次报道了都柏林沙门菌(salmonelladublin)的感染，后来在挪威和瑞典也有相关报道。

2、getahun等人(2021年)在对美国部分养殖水貂中沙门菌的流行病学研究中分离到包括海德堡沙门菌(salmonellaheidelberg)、里丁沙门菌(salmonellareading)，乌干达沙门菌(salmonella uganda)，俄赖翁沙门氏菌(salmonella orion)和塞罗沙门氏菌(salmonella cerro)五个血清型，同时揭示了沙门菌感染对水貂养殖造成了重要影响。

3、水貂养殖中使用抗生素预防和治疗沙门菌感染是最普遍采用的方法。随着抗生素在水貂中广泛使用，抗生素耐药细菌随之出现，限制了临床抗生素的应用。agga等人在美国养殖水貂粪便和饲料中对分离的沙门菌耐药性分析发现，沙门菌均携带特异性多种耐药基因，对氨苄青霉素、硫酸链霉素以及四环素有耐药性；进一步对分离的沙门菌系统发育学研究发现，乌干达沙门菌、海德堡沙门菌和里丁沙门菌大多与历史上的人类、家禽和猪源分离株有关；这项研究表明，养殖水貂可能是食源性病原体的传染源。王海龙等通过在水貂脏器中分离的沙门菌，并对其药物敏感性进行了分析，研究显示，分离的沙门菌对卡那霉素、氨苄青霉素和硫酸庆大霉素有耐药性；并指出，水貂脏器中分离的沙门菌的耐药性与水貂所在养殖场用药习惯有关系。孙娜等对山东省某养殖场的水貂感染沙门菌的研究显示，从7只水貂中分离出7株沙门菌；对其耐药性基因分析发现，共检测出8种耐药基因，主要对氨苄青霉素、氟苯尼考等药物有耐药性，提示沙门菌出现多重耐药现象。水貂感染沙门菌不仅对水貂养殖造成影响，同时也是食源性沙门菌潜在的重要传染源，对人类食品安全造成威胁，随着耐药菌株的出现，限制了抗生素在预防和治疗沙门菌感染中的应用。因此，迫切需要寻求有效的抗生素替代品。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提出了一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp及其制备方法和在水貂饲料中的应用。本发明所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp能够有效预防和治疗沙门菌感染，能够有效替代抗生素。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp，所述抗菌肽rccp的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3、本发明提供了一种重组真核表达载体，所述真核表达载体含有编码上述技术方案所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的基因；所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的氨基酸序列如seq id no.1所示。

4、本发明提供了一种重组菌，所述重组菌含有上述技术方案所述重组真核表达载体；所述重组菌的基础菌为毕赤酵母。

5、本发明提供了上述技术方案所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的制备方法，包括：

6、对上述技术方案所述重组菌进行发酵培养，发酵培养结束后，得到含有低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的发酵液。

7、优选的，所述发酵培养采用lbsm发酵培养基，所述lbsm发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：1.3wt.％磷酸、0.047wt.％硫酸钙、0.91wt.％硫酸钾、0.745wt.％硫酸镁、0.207wt.％氢氧化钾、2wt.％甘油和余量的水；

8、所述发酵培养时，重组菌的接种量为lbsm发酵培养基体积的10％；所述发酵培养的温度为30±0.1℃，时间为78h，ph值为5.0±0.1，转速为100～450rpm，通气量为1～1.5vvm。

9、优选的，所述发酵培养结束后，还包括将发酵培养所得含有低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的发酵液进行分离后，利用脱盐柱和离子交换亲和层析柱依次纯化分离所得发酵上清液，得到纯化后的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽。

10、本发明提供了一种饲料添加剂，所述饲料添加剂的有效成分包括上述技术方案所述的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp。

11、本发明提供了上述技术方案所述的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp或上述技术方案所述的饲料添加剂在抑制致病菌中的应用，所述致病菌包括沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的一种或几种。

12、本发明提供了上述技术方案所述的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp或上述技术方案所述的饲料添加剂在增强水貂抗菌感染能力中的应用。

13、本发明提供了一种增强水貂抗菌感染能力的方法，包括：饲喂水貂上述技术方案所述的饲料添加剂；

14、所述饲料添加剂的饲喂量为1ml/只，饲喂的次数为1次/日。

15、与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：

16、本发明提供了一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp，所述抗菌肽rccp的氨基酸序列如seq id no.1所示。本发明所述抗菌肽rccp是一种嵌合肽，能够有效预防水貂细菌性疾病的发生，保障水貂健康生长。而且根据本发明具体实施例记载的可知，本发明所述抗菌肽rccp能够有效抑制大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌；在抗水貂沙门菌感染过程中，该抗菌肽表现出良好的抗菌优势，能够提高水貂抗沙门菌感染的能力，同时还具有提高水貂免疫功能等作用。由此可见，本发明所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp是一种潜在的能够替代抗生素的产品，在饲料替抗领域中有望能够广泛应用。

技术特征：

1.一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp，其特征在于，所述抗菌肽rccp的氨基酸序列如seq id no.1所示。

2.一种重组真核表达载体，其特征在于，所述真核表达载体含有编码权利要求1所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的基因。

3.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌含有权利要求3所述重组真核表达载体；所述重组菌的基础菌为毕赤酵母。

4.权利要求1所述低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的制备方法，其特征在于，包括：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养采用lbsm发酵培养基，所述lbsm发酵培养基包括以下质量百分含量的组分：1.3wt.％磷酸、0.047wt.％硫酸钙、0.91wt.％硫酸钾、0.745wt.％硫酸镁、0.207wt.％氢氧化钾、2wt.％甘油和余量的水；

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在，所述发酵培养结束后，还包括对所述含有低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp的发酵液进行纯化。

7.一种饲料添加剂，其特征在于，所述饲料添加剂的有效成分包括权利要求1所述的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp。

8.权利要求1所述的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp或权利要求7所述的饲料添加剂在抑制致病菌中的应用，其特征在于，所述致病菌包括沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的一种或几种。

9.权利要求1所述的低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccp或权利要求7所述的饲料添加剂在增强水貂抗沙门菌感染能力中的应用。

10.一种增强水貂抗菌感染能力的方法，其特征在于，包括：饲喂水貂权利要求7所述的饲料添加剂；

技术总结
本发明属于饲料研究技术领域，尤其涉及一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccP及其制备方法和在水貂饲料中的应用。本发明公开了一种低分子量骆驼乳源重组抗菌肽rccP，所述的抗菌肽rccP的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述的抗菌肽rccP是一种嵌合肽，能够有效抑制沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。而且根据本发明具体实施例记载的可知，在抗水貂沙门菌感染过程中，该抗菌肽表现出良好的抗菌优势，以及提高水貂免疫功能等作用，是一种潜在的能够替代抗生素的产品，在饲料替抗领域中有望能够广泛应用。

技术研发人员：李海涛
受保护的技术使用者：中国农业科学院特产研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15