本发明涉及免疫细胞培养，具体为多种不同免疫细胞共同培养的方法。
背景技术：
1、免疫细胞治疗作为癌症治疗方面继手术、放化疗后又一治疗手段，有着治疗方便无创伤的优点。现行临床治疗方案中大多为单一免疫细胞疗法，由于单一免疫细胞的杀伤肿瘤活性的局限性，未达到最佳的治疗效果。多细胞生物免疫疗法是生物科技上的极大提升，在破坏力恶性肿瘤的体细胞活力更高、靶向治疗性更强。多种免疫细胞之间协同医治，互利互惠，提高肿瘤细胞的杀伤破坏力，合理抑止恶性肿瘤的生长发育、迁移、发作的医治技术性。因此有必要提供一种可以有效保证多种不同免疫细胞快速扩增，且保证多种不同免疫细胞具有一致生命周期的多种不同免疫细胞共同培养的方法。
技术实现思路
1、针对上述情况，为弥补上述现有缺陷，本发明提供了一种多种不同免疫细胞共同培养的方法，通过将多种不同免疫细胞预先分开培养，在各种免疫细胞扩增到一定数量之后再共同培养，有效保证了各种免疫细胞的扩增速度以及各种免疫细胞的生命周期一致性。
2、本发明提供如下的技术方案：本发明提出的多种不同免疫细胞共同培养的方法，具体包括下列步骤：
3、步骤1：采取新鲜外周血，采用流式细胞仪分选出所需多种免疫细胞，多种所述免疫细胞分别为cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞；
4、步骤2：采用不同诱导试剂体外分开培养7天，完成各个免疫细胞的初步扩增；
5、步骤3：将多种免疫细胞按照下述数量比例一起在复合培养基上培养3～4天：cd8+t淋巴细胞占比5％～75％、cd4+t淋巴细胞占比1％～50％、nk细胞占比5％～50％、dc细胞占比1％～50％、b淋巴细胞占比1％～50％和巨噬细胞占比1％～50％。
6、进一步地，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞和b淋巴细胞的诱导试剂包括下列组分：anti-cd3抗体、pbs缓冲液、淋巴细胞分离液和treg诱导培养基。
7、进一步地，所述dc细胞的诱导试剂包括下列组分：gm-csf溶液、il-4溶液、il-1β溶液和8种角蛋白的混合溶液。
8、进一步地，所述巨噬细胞的诱导试剂包括下列组分：胎牛血清、脂多糖、gm-csf溶液和il-4溶液。
9、进一步地，步骤3中所述复合培养基中基础培养基、gm-csf、tnf-α、il-4、il-2、ifn-γ、il-1α、pha-m和mdp。
10、进一步地，所述复合培养基中的基础培养基、gm-csf、tnf-α、il-4、il-2、ifn-γ、il-1α、pha-m和mdp用量比为500ml：1×105iu：5×104iu：5×103iu：3×104iu：1×105iu：1×104iu：5mg：0.01mg。
11、优选地，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞的数量比为50：20：15：5：5：5。
12、优选地，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞的数量比为30：20：20：10：10：10。
13、优选地，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞的数量比为20：15：20：15：15：15。
14、采用上述结构本发明取得的有益效果如下：本发明提出的多种不同免疫细胞共同培养的方法，通过将多种不同免疫细胞预先分开培养，在各种免疫细胞扩增到一定数量之后再共同培养，有效保证了各种免疫细胞的扩增速度以及各种免疫细胞的生命周期一致性。
1.多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，具体包括下列步骤：
2.根据权利要求1所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞和b淋巴细胞的诱导试剂包括下列组分：anti-cd3抗体、pbs缓冲液、淋巴细胞分离液和treg诱导培养基。
3.根据权利要求2所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，所述dc细胞的诱导试剂包括下列组分：gm-csf溶液、il-4溶液、il-1β溶液和8种角蛋白的混合溶液。
4.根据权利要求3所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，所述巨噬细胞的诱导试剂包括下列组分：胎牛血清、脂多糖、gm-csf溶液和il-4溶液。
5.根据权利要求4所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，步骤3中所述复合培养基中基础培养基、gm-csf、tnf-α、il-4、il-2、ifn-γ、il-1α、pha-m和mdp。
6.根据权利要求5所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，所述复合培养基中的基础培养基、gm-csf、tnf-α、il-4、il-2、ifn-γ、il-1α、pha-m和mdp用量比为500ml：1×105iu：5×104iu：5×103iu：3×104iu：1×105iu：1×104iu：5mg：0.01mg。
7.根据权利要求1所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞的数量比为50：20：15：5：5：5。
8.根据权利要求1所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞的数量比为30：20：20：10：10：10。
9.根据权利要求1所述的多种不同免疫细胞共同培养的方法，其特征在于，所述cd8+t淋巴细胞、cd4+t淋巴细胞、nk细胞、dc细胞、b淋巴细胞和巨噬细胞的数量比为20：15：20：15：15：15。