一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂的制作方法

本发明属于微生物菌剂，具体是指一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂。

背景技术：

1、西红柿是重要的蔬菜作物，目前日光室温栽培已成为西红柿栽培的主要方式，却也使西红柿植株易受病虫害侵扰；西红柿病虫害出现后，表现出较强的蔓延性，因此，对大棚内的西红柿造成大面积的损害，从而导致西红柿产量的降低。

2、西红柿的根腐病和溃疡病可以导致西红柿植株的茎基部和根部发生褐变和腐烂，大大影响了西红柿产量，目前，针对根腐病和溃疡病主要采取的防治手段为物理防治、化学防治及生物防治；物理防治主要是采用栽培抗病育种及土壤治理的方式，抗病育种及土壤治理周期较长、起效慢，且操作技术繁琐，尚未培育出抗根腐病溃疡病的西红柿品种；化学防治起效快、针对性强，但化学药剂对人类的健康、环境及食品安全都造成了负面影响，且易引起病原真菌耐药性的产生，生物防治在其使用范围内具有稳定、持久、安全性，因此具有广阔的应用前景；芽孢杆菌是一类可以产芽孢的杆状细菌，属于好氧或兼性厌氧细菌、革兰氏染色呈阳性，许多生防芽孢杆菌菌株的抑菌谱较为广阔，抑菌能力较强，且其芽孢有较强的抵抗紫外辐射和干燥等恶劣外界环境压力的能力，对人畜无致病性且不会造成环境污染，因此，植物病害的防治工作会将生防芽孢杆菌作为防治方案之一，生防芽孢杆菌可以通过营养与空间生态位竞争作用、产生抑菌物质等多种方式来达到生物防治的目的。

3、目前西红柿根腐病和溃疡病生物防治方法大都处于试验阶段，进入实际生产的很少，前人筛选出来的拮抗菌株在室内的盆栽试验当中效果明显，但在田间条件下出现防治效果不理想的现象，如防治时间短、生防菌定殖力低、受环境影响因素大等，因此开发一种能高效地作用于西红柿根腐病溃疡病并且稳定的微生物菌剂极为重要。

技术实现思路

1、针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，本发明使用改性硅藻土可以增大与菌液的相容性增强颗粒稳定性从而达到成粒率高，提高颗粒硬度的目的；本发明使用天然物质提取物作为液体培养基的重要成分，可以提高解淀粉芽孢杆菌对西红柿尖孢镰刀菌和溃疡病菌的抑制活性；本发明使用的液体培养基中各组分及其比例经过筛选，有效提高解淀粉芽孢杆菌培养发酵液中的菌体量和抗菌活性物质含量，从而提高生防效果。

2、为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：本发明提出了一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，所述微生物菌剂包括如下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌50-80份；改性硅藻土10-50份；聚丙烯酰胺1-10份；羧甲基纤维素钠1-5份；无菌水2-15份。

3、优选地，所述微生物菌剂包括如下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌50-60份；改性硅藻土10-30份；聚丙烯酰胺1-5份；羧甲基纤维素钠2-5份；无菌水3-8份。

4、本发明还提供了一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，所述微生物菌剂的制备方法包括如下步骤：

5、(1)将菌株解淀粉芽孢杆菌接种于液体培养基中，置于30℃恒温培养箱中，160r/min震荡培养，得到发酵液1；

6、(2)将所述发酵液1以1％的接种量转接种至新鲜的液体培养基中，继续以相同条件恒温震荡培养，得到解淀粉芽孢杆菌菌液；

7、(3)将硅藻土置入硝酸溶液中，经加热搅拌、冷却、抽滤洗涤、干燥、焙烧等得到预改性硅藻土，之后置入硝酸铁和硝酸钼的混合溶液中，再向其中加入表面活性剂后进行搅拌、干燥及煅烧后得到改性硅藻土；

8、(4)将所述解淀粉芽孢杆菌菌液与灭菌后的改性硅藻土和聚丙烯酰胺、羧甲基纤维素钠、无菌水混合后搅拌均匀，造粒筛分后即得所述微生物菌剂颗粒。

9、进一步，所述步骤(1)中的液体培养基包括如下重量份的组分：葡萄糖10-15份；酵母粉5-8份；七水硫酸镁10-15份；硫酸铵3-10份；河白草提取物0.5-1份；桃树脂提取物0.05-0.1份；寻骨风提取物0.1-1份。

10、优选地，所述桃树脂提取液、河白草提取物及寻骨风提取液的制备方法为：将桃树脂、河白草及寻骨风研磨至粉末，分别按重量比为1:5浸泡于纯净水中，35-40℃下预提取1小时，转速80-100r/min，然后加入体积比为3-8的浓度为1.8mol/l 1-丁基-3-甲基咪唑溴盐溶液继续提取，提取温度为60℃，微波功率为600w，取提取液离心5000r/min离心5min，使用乙醇反萃取分离并回收离子溶液，乙醇的用量为1-丁基-3-甲基咪唑溴盐溶液的100-120wt％，然后去除乙醇，干燥后得到粉末，得到所述桃树脂提取物、河白草提取物及寻骨风提取物。

11、进一步地，所述步骤(1)中振荡培养的时间为12-16小时。

12、进一步地，所述步骤(3)中的表面活性剂为柠檬酸铵、草酸铵、氟化铵或偏磷酸铵中的一种或多种。

13、进一步地，所述步骤(3)中的干燥温度为50-130℃，干燥时间为10-35h，煅烧温度为350-700℃，煅烧时间为10-20h。

14、采用上述结构本发明取得的有益效果如下：

15、(1)本发明使用改性硅藻土可以增大与菌液的相容性增强颗粒稳定性从而达到成粒率高，提高颗粒硬度的目的；

16、(2)本发明在液体培养基加入河白草提取物、桃树脂提取物、寻骨风提取物，中药能提供微生物生长的必需营养条件和生理调节因子，可以提高解淀粉芽孢杆菌对西红柿尖孢镰刀菌和溃疡病菌的抑制活性；

17、(3)河白草、桃树脂、寻骨风中富含植物成分物质，如黄酮、生物碱等，对解淀粉芽孢杆菌产生抑菌活性成分有诱导作用，且通过发酵后，可能与微生物分解的化学物质存在协同作用，可以显著降低西红柿病菌的发生率及提高西红柿产量；

18、(4)同时，河白草、桃树脂、寻骨风与解淀粉芽孢杆菌的组配性能极佳，不会对解淀粉芽孢杆菌的生长发育产生影响的同时，有利于解淀粉芽孢杆菌发挥对西红柿病原菌的生防功效；

19、(4)本发明采用了液体离子提取的方法，保留了更多的天然成分，离子液体是一种高效率、无污染的萃取溶剂，可以反复使用；

20、(5)本发明使用的液体培养基中各组分及其比例经过筛选，有效提高解淀粉芽孢杆菌培养发酵液中的菌体量和抗菌活性物质含量，从而提高生防效果。

技术特征：

1.一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂的制备方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述步骤(1)中的液体培养基包括如下重量份的组分：葡萄糖10-15份；酵母粉5-8份；七水硫酸镁10-15份；硫酸铵3-10份；河白草提取物0.5-1份；桃树脂提取物0.05-0.1份；寻骨风提取物0.1-1份。

3.根据权利要求2所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述桃树脂提取液、河白草提取物及寻骨风提取液的制备方法为：将桃树脂、河白草及寻骨风研磨至粉末，分别按重量比为1:5浸泡于纯净水中，35-40℃下预提取1小时，转速80-100r/min，然后加入体积比为3-8的浓度为1.8mol/l 1-丁基-3-甲基咪唑溴盐溶液继续提取，提取温度为60℃，微波功率为600w，取提取液离心5000r/min离心5min，使用乙醇反萃取分离并回收离子溶液，乙醇的用量为1-丁基-3-甲基咪唑溴盐溶液的100-120wt％，然后去除乙醇，干燥后得到粉末，得到所述桃树脂提取物、河白草提取物及寻骨风提取物。

4.根据权利要求3所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述步骤(1)中振荡培养的时间为12-16小时。

5.根据权利要求4所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述步骤(3)中的表面活性剂为柠檬酸铵、草酸铵、氟化铵或偏磷酸铵中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述步骤(3)中的干燥温度为50-130℃，干燥时间为10-35h。

7.根据权利要求6所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述步骤(3)中的煅烧温度为350-700℃，煅烧时间为10-20h。

8.根据权利要求7所述的用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂包括如下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌50-80份；改性硅藻土10-50份；聚丙烯酰胺1-10份；羧甲基纤维素钠1-5份；无菌水2-15份。

9.根据权利要求8所述的一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂包括如下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌50-60份；改性硅藻土10-30份；聚丙烯酰胺1-5份；羧甲基纤维素钠2-5份；无菌水3-8份。

10.根据权利要求9所述的一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，其特征在于：所述微生物菌剂型为固体颗粒。

技术总结
本发明公开了一种用于西红柿根腐病溃疡病微生物菌剂，属于微生物菌剂技术领域，所述微生物菌剂包括如下重量份的组分：解淀粉芽孢杆菌50‑80份；改性硅藻土10‑50份；聚丙烯酰胺1‑10份；羧甲基纤维素钠1‑5份；无菌水2‑15份。本发明使用改性硅藻土可以增大与菌液的相容性，增强颗粒稳定性从而达到成粒率高，提高颗粒硬度的目的；本发明使用天然物质提取物作为液体培养基的重要成分，可以提高解淀粉芽孢杆菌对西红柿尖孢镰刀菌和溃疡病菌的抑制活性；本发明使用的液体培养基中各组分及其比例经过筛选，有效提高解淀粉芽孢杆菌培养发酵液中的菌体量和抗菌活性物质含量，从而提高生防效果。

技术研发人员：李刚
受保护的技术使用者：唐山市耀威科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22