用于检测EGFR基因突变的引物组及方法与流程

本发明涉及生物，具体涉及一种用于检测egfr基因突变的引物组及方法。

背景技术：

1、非小细胞肺癌是一种常见的肺癌类型，约占所有肺癌的85％。因此通过分子生物学诊断对非小细胞肺癌进行提早确诊，做到早发现早诊断早治疗，有助于提高患者生存率。。因此对egfr基因突变检测成为了非小细胞肺癌分子诊断的重要环节。

2、肺癌是我国发病率和致死率最高的恶性肿瘤，其中最常见发病的为非小细胞肺癌，占比85％以上，主要包括鳞状细胞癌、大细胞癌、腺癌等类型。与小细胞肺癌相比，非小细胞肺癌的生长和扩散速度相对较慢，但发现时往往已是中晚期，治疗选择有限，所以个体化诊断和治疗对于肺癌患者十分重要，早期诊断和个体化治疗可以明显提高肺癌治愈率。其中，egfr基因作为非小细胞肺癌的最常见的突变致病基因，其突变比例在非小细胞肺癌患者中高达60％，95％的突变发生在外显子18、19、21。因此，egfr基因突变的检测对患者选择治疗方案具有重要的参考价值。

3、目前用于检测egfr基因突变的方法主要有arms-pcr、数字pcr、荧光pcr分辨熔点曲线分析法、变性高效液相色谱技术、二代测序等，但是这些方法操作较为复杂，对实验室条件及人员资质要求都很高，且需要特殊的检测设备，检测费用高，使得egfr基因突变检测难以在医疗条件较差地区和经济负担能力不高的人群中普及。临床亟需准确且经济的检测平台与技术，使更多的非小细胞肺癌患者受益于靶向治疗。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种用于检测egfr基因突变的引物组。

2、本发明的再一目的是提供上述引物组的应用。

3、本发明的再一目的是提供用于检测egfr基因突变的方法。

4、根据本发明具体实施方式的用于检测egfr基因突变的引物组，包括分别针对egfr基因外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变、外显子21的l858r突变、以及外显子21的l861q突变的引物组；

5、针对egfr基因外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变、外显子21的l858r突变、以及外显子21的l861q突变设计的引物组中分别有4条特异性引物，包括正向和后外引物(f3和b3)，正向和后内引物(fip和bip)，对靶基因上6个区域进行识别，保证了lamp反应的高度扩增性和特异性，以及针对外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变的引物组中还设计有1条环引物(lb)，针对外显子21的l858r突变和外显子21的l861q突变的引物组中还设计有两条环引物(lb和lf)，可以减少核酸扩增反应时间，

6、其中，针对外显子18的g719a/s/c突变的引物组的核苷酸序列如seq id no.1～seq id no.5；

7、针对外显子19的746-752del突变的引物组的核苷酸序列如seq id no.6～seq idno.10；

8、针对外显子19的746-752del突变的引物组的核苷酸序列如seq id no.11～seqid no.16；以及

9、针对外显子19的746-752del突变的引物组的核苷酸序列如seq id no.17～seqid no.22。

10、又一方面，本发明提供用于检测egfr基因突变的引物组的应用，具体的，在检测egfr基因突变的试剂盒中的应用，或者，在检测egfr基因突变的方法中的应用，在检测egfr基因突变的微流控芯片中的应用，尤其是利用环介导等温扩增-光谱传感器-人工智能技术平台检测egfr基因突变。

11、又一方面，本发明还提供了一种用于检测egfr基因突变的方法，包括：利用lamp检测技术结合上述的引物组中针对egfr基因外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变、外显子21的l858r突变、以及外显子21的l861q突变的引物组分别对待测样本进行环介导等温扩增；分析扩增产物的结果。

12、进一步的，所述环介导等温扩增的反应温度为65～70℃，反应时间为25～30分钟。

13、进一步的，所述环介导等温扩增的程序在包含至少四个反应腔的微流控芯片中进行。

14、具体的，先将四份2×lamp预混液分别和针对egfr基因外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变、外显子21的l858r突变、以及外显子21的l861q突变的引物组的混合液分别注入微流控芯片的其中四个不同反应腔内，将待测样本用灭菌无酶水稀释后分别注入两个反应腔中形成lamp反应体系，在65～70℃条件下进行lamp扩增，25～30分钟后扩增结束。

15、进一步的，所述分析扩增产物的结果的方法包括对lamp反应结果进行光谱分析和/或显色分析。

16、本发明的有益效果是，本发明分别针对egfr基因外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变、外显子21的l858r突变、以及外显子21的l861q突变，均设计了4条特异性引物，对靶基因上6个区域进行识别，保证了lamp反应的高度扩增性和特异性，特异性可达100％，同时各引物组分别设计一条或两条环引物，将lamp扩增时间大幅度降低，控制在30分钟左右，通过对egfr基因突变的四个突变位点进行独立检测，并根据四位点突变的lamp反应结果更加快速准确地对egfr基因的突变型和野生型进行判断，提高egfr基因突变检测的效率。

17、本发明的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。

技术特征：

1.一种用于检测egfr基因突变的引物组，其特征在于，所述引物组包括分别针对egfr基因外显子18的g719a/s/c突变、外显子19的746-752del突变、外显子21的l858r突变、以及外显子21的l861q突变的引物组；其中

2.根据权利要求1所述的引物组在制备检测egfr基因突变的试剂盒中的应用。

3.根据权利要求1所述的引物组在检测个体egfr基因突变的方法中的应用。

4.根据权利要求1所述的引物组在检测egfr基因突变的微流控芯片中的应用。

5.一种用于检测egfr基因突变的方法，其特征在于，包括：

6.根据权利要求5所述的用于检测egfr基因突变的方法，其特征在于，

7.根据权利要求6所述的用于检测egfr基因突变的方法，其特征在于，

8.根据权利要求5所述的用于检测egfr基因突变的方法，其特征在于，

技术总结
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于检测EGFR基因突变的引物组及方法，本发明的用于检测EGFR基因突变的引物组包括分别针对EGFR基因外显子18的G719A/S/C突变、外显子19的746‑752DEL突变、外显子21的L858R突变、以及外显子21的L861Q突变的引物组分别如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6～SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17～SEQ ID NO.22所示；本发明保证了LAMP反应的高度扩增性和特异性，特异性可达100％，同时将LAMP扩增时间大幅度降低，控制在30分钟左右，通过对EGFR基因突变的四个突变位点进行独立检测，并根据四位点突变的LAMP反应结果更加快速准确地对EGFR基因的突变型和野生型进行判断，提高EGFR基因突变检测的效率。

技术研发人员：关国良,陈巧玲,彭迪
受保护的技术使用者：常州先趋医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19