本申请涉及生物化学,尤其涉及一种植物中γ-氨基丁酸的提取方法。
背景技术:
1、γ-氨基丁酸(gaba)是一种广泛存在于植物、动物及微生物的四碳非蛋白质氨基酸。gaba作为一种哺乳动物神经系统的神经递质,在维持心理健康方面发挥着重要作。临床研究表明,gaba具有降压、降脂、降血糖、抗癌、利尿、镇定等功能。gaba同时可以改善应激反应,减少高脂饮食肥胖的概率。由于gaba的功能多样性,而gaba产品如发芽糙米等种类较为单一,难以满足消费者需求。
2、gaba在植物中具有多种功效,可调节植物机体ph,促进代谢生长发育,提供三羧酸循环旁路的代谢产物,当植物体收到外界如热刺激、冷冻、盐胁迫、缺氧、浸泡和酸化等或植物激素作用时,植物体内gad酶激活而引起酶活力的增强,导致gaba富集。不同的植物中,gaba含量各不相同,为2-700nmol/g,通过植物提取gaba的工艺则需进一步优化。
技术实现思路
1、(一)发明目的
2、鉴于上述问题,针对植物中γ-氨基丁酸的提取工艺进行优化,本公开提供了以下技术方案。
3、(二)技术方案
4、一种植物中γ-氨基丁酸的提取方法,包括:
5、s1、将鲜红枣和/或鲜食用菌清洗晒干至水分低于60%;
6、s2、置于-10℃-20℃下冷处理8-16小时;
7、s3、在真空干燥箱中厌氧处理1-5小时;
8、s4、在空气环境下摊放0.5-2小时;
9、s5、循环所述s2-s4的过程2-4次;
10、s6、烘干至水分低于5%;
11、s7、进行粉碎得植物粉,将植物粉置于水中进行超声,得植物提取液;
12、s8、采用阳离子交换树脂对所述植物提取液进行吸附,采用nh3·h2o溶液进行洗脱,得γ-氨基丁酸溶液。
13、作为一种可实施方式,所述超声的温度为50℃,超声的功率为220w,超声的时间为30min。
14、作为一种可实施方式,在所述采用阳离子交换树脂对所述植物提取液进行吸附前,包括对阳离子交换树脂进行预处理,包括:将阳离子交换树脂加入95%乙醇浸泡24h,用水洗至无絮状物且无乙醇味,然后用4% naoh浸泡5h,用水洗至中性,再用5% hcl浸泡8h,用水洗至中性,备用。
15、作为一种可实施方式,所述采用阳离子交换树脂对所述植物提取液进行吸附中,所述植物提取液的上样流速为3±0.5ml/min。
16、作为一种可实施方式,所述nh3·h2o溶液的ph为9,洗脱流速为2ml/min。
17、作为一种可实施方式,还包括采用异硫氰酸苯酯柱前衍生hplc法对所述γ-氨基丁酸溶液进行检测;其中异硫氰酸苯酯柱前衍生hplc法的色谱柱为welchxb-c18,流动相a为含0.5%三乙胺的0.1mol/l乙酸钠水溶液,流动相b为甲醇;流速为0.7ml/min,柱温30℃,检测波长为252nm,洗脱程序为梯度洗脱。
18、作为一种可实施方式,所述洗脱程序为:
19、0-14min,40%-60%流动相a;15-16min,60-100%流动相a;17-19min,100%流动相a;20-21min,100-40%流动相a;22-30min,40%流动相a。
20、作为一种可实施方式,所述异硫氰酸苯酯柱衍生hplc法中衍生反应包括:移取所述植物提取液至试管中,加入三乙胺-乙腈溶液和异硫氰酸苯酯-乙腈溶液,避光静止30min后加入正己烷混匀后静置再除去上层正己烷,再加入正己烷混匀后静置再除去上层正己烷,取下层溶液过滤得检测液,所述植物提取液、三乙胺-乙腈溶液、异硫氰酸苯酯-乙腈溶液和正己烷的加入体积比为1:1:0.5:4。
21、作为一种可实施方式,还包括在所述进行粉碎得植物粉,将植物粉置于水中进行超声后,过滤得植物渣,对所述植物渣进行蛋白质提取;所述对所述植物渣进行蛋白质提取包括:将所述植物渣干燥后粉碎、过筛,以植物渣:0.13mol/l naoh为1:24ml/g混合,在-18℃下冷冻处理1-3h后融化,重复冷冻和融化过程1-3次后进行超声浸提,离心后上清液为蛋白质提取液。
22、作为一种可实施方式,所述超声浸提温度为60℃-70℃,功率为220w,时间为40-60min。
23、(三)有益效果
24、本公开实施例与现有技术相比存在的有益效果是:本发明方法通过采用多种植物进行γ-氨基丁酸提取,且保证提取效率;冷冻处理也使得鲜红枣和/或鲜食用菌中gaba浓度有显著提高;并提供γ-氨基丁酸的检测方法,检测快速且无干扰。
1.一种植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,包括:
2.根据权利要求1所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,所述超声的温度为50℃,超声的功率为220w,超声的时间为30min。
3.根据权利要求1所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,在所述采用阳离子交换树脂对所述植物提取液进行吸附前,包括对阳离子交换树脂进行预处理,包括:将阳离子交换树脂加入95%乙醇浸泡24h,用水洗至无絮状物且无乙醇味,然后用4%naoh浸泡5h,用水洗至中性,再用5%hcl浸泡8h,用水洗至中性,备用。
4.根据权利要求1所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,所述采用阳离子交换树脂对所述植物提取液进行吸附中,所述植物提取液的上样流速为3±0.5ml/min。
5.根据权利要求1所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,所述nh3·h2o溶液的ph为9,洗脱流速为2ml/min。
6.根据权利要求1所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,还包括采用异硫氰酸苯酯柱前衍生hplc法对所述γ-氨基丁酸溶液进行检测;其中异硫氰酸苯酯柱前衍生hplc法的色谱柱为welch xb-c18,流动相a为含0.5%三乙胺的0.1mol/l乙酸钠水溶液,流动相b为甲醇;流速为0.7ml/min,柱温30℃,检测波长为252nm,洗脱程序为梯度洗脱。
7.根据权利要求6所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,所述洗脱程序为:
8.根据权利要求6所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,所述异硫氰酸苯酯柱衍生hplc法中衍生反应包括:移取所述植物提取液至试管中,加入三乙胺-乙腈溶液和异硫氰酸苯酯-乙腈溶液,避光静止30min后加入正己烷混匀后静置再除去上层正己烷,再加入正己烷混匀后静置再除去上层正己烷,取下层溶液过滤得检测液,所述植物提取液、三乙胺-乙腈溶液、异硫氰酸苯酯-乙腈溶液和正己烷的加入体积比为1:1:0.5:4。
9.根据权利要求1所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,还包括在所述进行粉碎得植物粉,将植物粉置于水中进行超声后,过滤得植物渣,对所述植物渣进行蛋白质提取;所述对所述植物渣进行蛋白质提取包括:将所述植物渣干燥后粉碎、过筛,以植物渣:0.13mol/l naoh为1:24ml/g混合,在-18℃下冷冻处理1-3h后融化,重复冷冻和融化过程1-3次后进行超声浸提,离心后上清液为蛋白质提取液。
10.根据权利要求9所述的植物中γ-氨基丁酸的提取方法,其特征在于,所述超声浸提温度为60℃-70℃,功率为220w,时间为40-60min。