重楼地上部分中五种新化合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及中药化学及医药，具体涉及从重楼地上部分中分离鉴定的新化合物、其制备方法及应用。

背景技术：

1、重楼为百合科重楼属植物的总称，《中国药典》2020年版收载了滇重楼 parispolyphylla smith var. yunnanensis （franch.） hand -mazz. 和七叶一枝花 p.polyphylla smith var. chinensis （franch.） hara的干燥根茎，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊等功效[1]。重楼的传统药用部位为地下根茎，但目前重楼资源濒危，产量不能满足生产需要。本发明以重楼的非传统药用部位重楼地上部分为研究对象，从中发现新的活性化合物，对于充分挖掘利用濒危重楼资源，促进重楼产业可持续和快速健康发展具有重大意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供从重楼地上部分中五种新化合物及其制备方法和应用。为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

2、五个新化合物，其结构为12α,23α,27-trihydroxyyamogenin-3β-yl-o-α-l-rhamnopyranosyl-(1→4)[-α-l-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-d-glucopyranoside (1),12α,23α,27-trihydroxyyamogenin-3β-yl-o-α-l-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-l-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-d-glucopyranoside (2), 12α,23α,27-trihydroxyyamogenin -3β-yl-o-α-l-rhamnopyranosyl-(1→4)-β-d-glucopyranoside(3), (25s)-17α,23α, 27-trihydroxyspirost-5-en-3β-yl-β-d-glucopyranoside (4),(25s)-3β,17α,27- trihydroxyspirost-5-en-23-α-yl-β-d-glucopyranoside (5)

3、

4、所述的五种新化合物均由重楼地上部分中分离得到。

5、本发明所述的五种新化合物的制备方法，其步骤如下：

6、步骤一：取自然干燥的重楼地上部分，切制为6-10cm长的小段。置于多功能提取罐中，加入10倍量（溶剂的体积/药材质量）的70%乙醇浸泡过夜，回流提取三次，每次加入10倍量（溶剂的体积/药材质量）的70%乙醇提取2 h，滤液合并后置于双效浓缩器（60~70 ℃）中浓缩至无醇味，得提取浓缩液。

7、步骤二：取步骤一中的提取浓缩液离心，离心液用hpd-100大孔吸附树脂进行分离，分别用5倍水、30%乙醇、80%乙醇进行洗脱，分别浓缩后置于真空干燥箱中干燥。

8、步骤三：30%乙醇段浸膏，使用硅胶柱进行粗分离，洗脱剂为（乙酸乙酯：95%乙醇=10:1→ 5:3）得到8个流分，分别命名为a-h段。取步骤二中的e段流分经ods（etoh:h2o，8%→28%）分离，得到5个流分（e1-e5）。e2流分经硅胶（ch2cl2:meoh:h2o，7:2:1→7:3:1，萃取后取下层）得到流分e2.1-e2.5。e2.2用半制备液相分离，色谱条件：色谱柱：ymc-pack c18 （10×250 mm, 5 μm），流动相a：14%乙腈、流动相b：86%水 检测波长：203 nm，流速：3 ml/min进样量：100-200 µml，得到化合物1、2和3。取步骤二中的c段流分经ods（etoh:h2o，15%→25%）分离，得到4个组分（c1-c4）。c3流分经硅胶柱层析（ch2cl2:meoh:h2o，7:1.5:1→7:2.5:1，萃取后取下层）、重结晶分离纯化后得到化合物4。c4流分经sephadex lh-20（甲醇）分离，并重结晶分离纯化后得到化合物5。

9、本发明通过1h-nmr，13c-nmr，hmbc，hsqc，dept和hr-esi-ms谱图对步骤三中的化合物1-5的结构进行了鉴定。

10、本发明实施例提供了所述的五种新化合物的体外止血、活血活性。

11、本发明所述的五种新化合物，结构、制备方法及药理活性未见文献报道。化合物1-3，为首次发现12位羟基取代的薯蓣皂苷。体外凝血活性研究表明，本发明提供的重楼皂苷化合物1、2具有止血作用，化合物3-5具有活血作用，可开发成为新的止血/活血的药物。另外，本发明所述的新化合物的制备均来自于重楼的非传统药用部位重楼地上部分，对于重楼这种濒危药材的综合利用有重要的意义。

技术特征：

1.重楼地上部分中五种新化合物，其结构如式ⅰ、式ⅱ所示：

2.根据权利要求1所述的重楼地上部分中五种新化合物，其特征在于该五种新化合物的制备方法按以下步骤依次进行：

3.根据权利要求1所述的重楼地上部分中五种新化合物，其特征在于该五种新化合物的结构通过核磁谱图和质谱数据进行鉴定。

4.根据权利要求2所述五种新化合物的制备方法，其特征在于所述步骤a中的提取方式为回流提取，提取溶剂为乙醇溶液，提取溶剂用量为10倍（溶剂的体积/药材质量），提取次数为3次，每次2h，合并提取液，减压回收至无醇味。

5.根据权利要求2所述五种新化合物的制备方法，其特征在于所述步骤b中的大孔吸附树脂为hpd-100，依次用水、低浓度乙醇、高浓度乙醇溶液进行洗脱，分别回收溶剂。

6.根据权利要求2所述五种新化合物的制备方法，其特征在于所述步骤c中的色谱柱为正相、反相、凝胶柱色谱或高效液相色谱。

7.根据权利要求3所述重楼地上部分中五种新化合物，其特征在于所述核磁谱是1h-nmr，13c-nmr，hmbc，hsqc，dept，所述的质谱为hr-esi-ms。

8. 根据权利要求6所述五种新化合物的制备方法，其特征在于所述正向色谱柱为硅胶柱色谱，反向色谱柱为ods柱色谱，凝胶柱为sephadex lh-20，制备高效液相色谱的色谱柱为c18柱。

9.根据权利要求1-2任一项所述的重楼地上部分中五种新化合物，其特征在于该五种新化合物在制备治疗止血、活血药物中的应用。

技术总结
本发明公开了五种重楼地上部分中的新成分，其结构式通式如式Ⅰ、式Ⅱ所示：本发明还提供了上述五种新成分的制备方法以及用途。由重楼地上部分经乙醇粗提、大孔树脂、正相和反相以及制备液相色谱层析分离得到，并利用核磁谱图和质谱等技术鉴定其结构，化学名为12α,23α,27‑trihydroxyyamogenin‑3β‑yl‑O‑α‑L‑rhamnopyranosyl‑(1→4)[‑α‑L‑rhamnopyranosyl‑(1→2)]‑β‑D‑glucopyranoside (1),12α,23α,27‑trihydroxyyamogenin‑3β‑yl‑O‑α‑L‑rhamnopyranosyl‑(1→4)‑α‑L‑rhamnopyranosyl‑(1→4)‑β‑D‑glucopyranoside (2),12α,23α,27‑trihydroxyyamogenin‑3β‑yl‑O‑α‑L‑rhamnopyranosyl‑(1→4)‑β‑D‑glucopyranoside (3),(25S)‑17α,23α,27‑trihydroxyspirost‑5‑en‑3β‑yl‑β‑D‑glucopyranoside (4),(25S)‑3β,17α,27‑trihydroxyspirost‑5‑en‑23‑α‑yl‑β‑D‑glucopyranoside (5)。化合物1、2可以缩短血浆复钙时间具有止血作用，化合物3‑5可以延长血浆复钙时间具有活血作用，可开发成为新的止血/活血的药物。

技术研发人员：李倩,冯莉萍,万近福,聂伟,郭从亮,段有志,张英杰,崔涛,张天财,李奥
受保护的技术使用者：云南省药物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17