本发明涉及化学成分限定培养基领域。具体而言,本发明涉及昆虫细胞化学成分限定培养基。
背景技术:
1、到目前为止,全世界建立的昆虫细胞系有800株以上,使用最广泛的是草地贪夜蛾细胞系sf-9及粉纹夜蛾h5(highfive)细胞系。昆虫细胞被广泛用于科学研究、动物疫苗、基因治疗等领域。
2、中国每年昆虫培养基的需求量超过100万l,主要用于猪圆环疫苗的生产。公开配方的昆虫培养基(比如grace昆虫培养基)使用时通常要加10%的牛血清和4g/l酵母浸出液才能正常培养。但血清的添加增加了感染的风险和生产成本。酵母浸出液的添加降低了培养基批间稳定性,同时也提高了生产成本。牛血清和水解物的添加对下游纯化也造成一定的影响。
3、目前国内已经有几家公司开发出用于培养昆虫细胞的无血清培养基,例如jp20060185008专利中所述的无血清昆虫培养基。但这些培养基由于含有重组蛋白,使得生产成本比较高昂。再比如cn1498267a专利中所述的昆虫培养基培养基含有高浓度酵母提取物,提高了成本,并且由于水解物的存在导致产品批次间差异较大。
4、因此对化学成分限定的昆虫培养基的需求是越来越强烈。但该技术主要被美国赛默飞世尔及默克公司掌握,国内企业目前还没有化学成分限定的昆虫培养基。且由于中国没有相应的产品竞争,这些外企的化学成分限定昆虫培养基价格非常昂贵,达到几百元/l,疫苗企业完全无法承担这样的费用。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的问题,本发明提供了一种化学成分限定的昆虫培养基,为昆虫细胞培养的研究和大规模生产提供支撑。该目的可通过下文所述的技术方案实现。
2、在实施例1中,本发明提供了一种用于培养昆虫细胞的无血清培养基,所述无血清培养基包含16g/l碳水化合物、15g/l氨基酸、8g/l无机盐、0.13g/l维生素、1.16g/l的有机酸以及0.025g/l的化学限定脂质混合物。
3、在实施例2中,本发明提供了一种用于培养昆虫细胞的无血清培养基,所述无血清培养基包含10g/l碳水化合物、20.8g/l氨基酸、8g/l无机盐、0.13g/l维生素、1.16g/l的有机酸以及0.025g/l的化学限定脂质混合物。
4、在实施例3中,本发明提供了一种用于培养昆虫细胞的无血清培养基,所述无血清培养基包含20g/l碳水化合物、15g/l氨基酸、10g/l无机盐、0.13g/l维生素、1.16g/l的有机酸以及0.025g/l的化学限定脂质混合物。
5、在实施例4中,本发明提供了一种用于培养昆虫细胞的无血清培养基,所述无血清培养基包含20g/l碳水化合物、20.8g/l氨基酸、6.5g/l无机盐、0.13g/l维生素、1.16g/l的有机酸以及0.025g/l的化学限定脂质混合物。
6、在实施例5中,本发明提供了一种用于培养昆虫细胞的无血清培养基,所述无血清培养基包含16g/l碳水化合物、15g/l氨基酸、8g/l无机盐、0.2g/l维生素、2g/l的有机酸以及0.025g/l的化学限定脂质混合物。
1.所述化学成分限定的昆虫培养基包含10~20g/l碳水化合物、5~25g/l氨基酸、6~10g/l无机盐、0.01~0.1g/l维生素、0.1-1g/l的有机酸以及0.005-0.05g/l的化学限定脂质混合物。其中,所述的培养基不含水解物。
2.根据权利要求1所述的化学限定培养基,其特征在于:所述10~20g/l的碳水化合物由葡萄糖、蔗糖、果糖三种糖组成。
3.根据权利要求1所述的化学限定培养基,其特征在于:所述葡萄糖含量为5~10g/l,蔗糖含量为3~8g/l,果糖含量为2~5g/l。
4.根据权利要求1所述的化学限定培养基,其特征在于:所述氨基酸含量如表1所示。
5.根据权利要求1所述的化学限定培养基,其特征在于:所述无机盐含量如表2所示。