一种冻干保护剂及其制备方法和在制备假病毒冻干产品中的应用与流程

本发明属于生物制品，具体涉及一种冻干保护剂及其制备方法和在制备假病毒冻干产品中的应用。

背景技术：

1、宫颈癌严重危害女性健康，是全世界女性中第四大常见恶性肿瘤。宫颈癌的预防手段包括接种人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,hpv)预防性疫苗和早期筛查。自2006年全球首个hpv预防性疫苗问世以来，宫颈癌的预防进入一个新的时代，许多国家将hpv预防性疫苗列入国家免疫计划。

2、hpv疫苗研发的一个最终目标是使开发的疫苗诱导人体产生高滴度的中和抗体，所以中和抗体检测是hpv疫苗研发过程中一个必不可少、非常关键的环节。目前，hpv预防性疫苗临床试验中用于抗体滴度检测的方法主要有elisa法，luminex法和假病毒法。假病毒法是模拟抗体阻断病毒进入细胞的生物过程，最能直接反映抗体的保护效果，是国际公认的hpv中和抗体检测的金标准。

3、现有技术一般采取自行制备假病毒的形式开展实验(下文简称液体型假病毒或液体型)。受多种因素影响，不同批次假病毒的滴度批间差大，试验人员在进行正式中和抗体检测前，需要进行多次试验验证，试验操作复杂，制备出的假病毒滴度不稳定。另外，液体剂型假病毒必须冻存于-80℃，物流运输采用干冰形式，在-20℃的条件下假病毒易失活，在较大程度上限制了假病毒法的产业化应用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种冻干保护剂及其制备方法和在制备假病毒冻干产品中的应用，提高假病毒冻干产品的稳定性和耐储性。

2、本发明提供了一种冻干保护剂，所述冻干保护剂包括如下浓度的组分：

3、甘露醇8～12wt％，海藻糖1～5wt％、牛血清白蛋白0.5～1.5wt％和余量的溶剂。

4、优选的，所述溶剂包括dmem完全培养基。

5、本发明还提供了上述技术方案所述的冻干保护剂的制备方法，包括如下步骤：

6、将甘露醇、海藻糖和牛血清白蛋白溶于溶剂中，除菌，得到所述冻干保护剂。

7、本发明还提供了上述技术方案所述的冻干保护剂或上述技术方案所述的方法制备得到的冻干保护剂在制备假病毒冻干产品中的应用。

8、优选的，所述假病毒包括hpv假病毒；

9、所述hpv假病毒的亚型包括hpv6，hpv11，hpv16，hpv18，hpv31，hpv33，hpv45，hpv52和hpv58中的一种或多种。

10、本发明还提供了一种hpv冻干假病毒，包括hpv假病毒和上述技术方案所述的冻干保护剂。

11、优选的，所述hpv假病毒为hpv液体型假病毒，所述hpv液体型假病毒与所述冻干保护剂的体积比为0.1～10：100；所述hpv液体型假病毒的滴度为6.88×102～3.75×105tcid50/μl。

12、本发明还提供了上述技术方案所述的hpv冻干假病毒的制备方法，包括如下步骤：

13、将hpv液体型假病毒与上述技术方案所述的冻干保护剂混合，进行真空冷冻干燥。

14、优选的，所述真空冷冻干燥包括以下步骤：降温至-50～-40℃，在-50～-40℃升华干燥2～3h；由-50～-40℃升温至-32～-28℃，在-32～-28℃升华干燥10～12h；由-32～-28℃升温至-22～-18℃，在-22～-18℃升华干燥4～6h；由-22～-18℃升温至-7～-3℃，在-7～-3℃升华干燥4～6h；由-7～-3℃升温至-2～2℃，在-2～2℃解析干燥2～3h；由-2～2℃升温至8～12℃，在8～12℃解析干燥2～3h；由8～12℃升温至18～22℃，在18～22℃解析干燥7～9h。

15、所述真空冷冻干燥的压强≤20pa。

16、优选的，进行真空冷冻干燥前，在-50～-40℃下对hpv液体型假病毒与冻干保护剂的混合物预冻2～3h。

17、有益效果

18、本发明提供了一种冻干保护剂，包括甘露醇8～12wt％、海藻糖1～5wt％、牛血清白蛋白0.5～1.5wt％和余量的溶剂。本发明提供的冻干保护剂能确保假病毒冻干产品的外观良好，使其保持较高的存活率。

19、hpv液体型假病毒滴度波动情况很大，不同亚型、不同批次均会存在较大的变化，经实施例验证，本发明通过调整保护剂与hpv液体型假病毒配比，可将滴度变化较大的hpv液体型假病毒，制备成0.5～3.0×105tcid 50/支的hpv冻干假病毒，为实验人员提供便捷、稳定、均一的hpv假病毒产品，使hpv假病毒产品标准化，有利于促进hpv假病毒产品产业化。

技术特征：

1.一种冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂包括如下浓度的组分：

2.根据权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述溶剂包括dmem完全培养基。

3.权利要求1或2所述的冻干保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.权利要求1或2所述的冻干保护剂或权利要求3所述制备方法制备得到的冻干保护剂在制备假病毒冻干产品中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述假病毒包括hpv假病毒；

6.一种hpv冻干假病毒，其特征在于，包括hpv假病毒和权利要求1或2所述的冻干保护剂。

7.根据权利要求6所述的hpv冻干假病毒，其特征在于，所述hpv假病毒为hpv液体型假病毒，所述hpv液体型假病毒与所述冻干保护剂的体积比为0.1～10：100；所述hpv液体型假病毒的滴度为6.88×102～3.75×105tcid50/μl。

8.权利要求6或7所述的冻干hpv假病毒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥包括以下步骤：降温至-50～-40℃，在-50～-40℃升华干燥2～3h；由-50～-40℃升温至-32～-28℃，在-32～-28℃升华干燥10～12h；由-32～-28℃升温至-22～-18℃，在-22～-18℃升华干燥4～6h；由-22～-18℃升温至-7～-3℃，在-7～-3℃升华干燥4～6h；由-7～-3℃升温至-2～2℃，在-2～2℃解析干燥2～3h；由-2～2℃升温至8～12℃，在8～12℃解析干燥2～3h；由8～12℃升温至18～22℃，在18～22℃解析干燥7～9h；

10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，进行真空冷冻干燥前，在-50～-40℃下对hpv假病毒与冻干保护剂的混合物预冻2～3h。

技术总结
本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种冻干保护剂及其制备方法和在制备假病毒冻干产品中的应用。本发明提供的冻干保护剂包括甘露醇8～12wt％，海藻糖1～5wt％，牛血清白蛋白0.5～1.5wt％和余量的溶剂。本发明提供的冻干保护剂能确保假病毒冻干产品的外观良好，使假病毒保持较高的存活率。本发明所提供的冻干保护剂能够使制备得到的假病毒滴度均一，性质稳定，尤其有利于促进HPV假病毒产品产业化。

技术研发人员：任河山,王金恒,吴佳静,何建珍,刘玉,夏鹏伟,林玉洁,王杨柳,崔圆圆
受保护的技术使用者：北京云菱生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4