一种针对HSPA8的shRNA及其在治疗结直肠癌中的应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种针对hspa8基因的shrna及其在治疗结直肠癌中的应用。

背景技术：

1、结直肠癌是全球第三大癌症，也是最常见的消化道恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居常见癌症的前列。目前，结直肠癌的治疗手段主要包括手术治疗、化疗、靶向治疗和免疫治疗。其中靶向治疗具有靶点明确、特异性强、安全性高、毒副作用小等特点，成为晚期结直肠癌综合治疗的研究热点，也是结直肠癌精准治疗的典范。然而，现阶段可用的靶向治疗靶点有限，可用的靶向药匮乏，只有极少部分患者可以从靶向治疗中受益，因此提供一种新型的肿瘤治疗靶点是目前亟需解决的问题。

2、分子伴侣是一类广泛分布于原核细胞和真核细胞中的蛋白，可以协助其他大分子结构折叠/退褶、组装/解体。通常，维持正常细胞生长的蛋白质依赖于分子伴侣进行正确折叠，而癌细胞分裂迅速，比正常细胞更依赖于分子伴侣。因此，通过调控分子伴侣的表达水平以阻断蛋白质的正确折叠可达到抑制癌细胞生长的目的。

3、热休克蛋白家族a（hsp70）成员8（hspa8）是一种分子伴侣，在蛋白质的质量控制系统中发挥重要作用。它作为蛋白质的折叠催化剂，能帮助错误折叠的构象重新折叠为正确构象，并作为靶蛋白质随后降解的控制器。hspa8通过与其他分子伴侣互作或合作，构成了复杂的蛋白质折叠网络，参与细胞多种生命活动，如细胞周期、自噬、病毒的复制等。在多种癌细胞中，hspa8的表达水平较高，如乳腺癌、肝癌等。研究表明，当hspa8缺失后，实体瘤细胞的生长抑制，诱导细胞凋亡，细胞周期停滞。

4、近年来，rna干扰技术经历着高速发展，也为癌症治疗带来了新的曙光和革命性的转变。rna干扰技术作为一种新兴的癌症治疗方法，具有巨大的潜力和发展前景。短发夹rna（short hairpin rna，shrna）是一类人工合成的具有紧密的发夹转弯结构的rna，它通过rna干扰技术原理沉默靶基因的表达。因此，为了研究某个治疗靶点在肿瘤治疗中的重要性，通常利用shrna干扰技术进行评估。设计针对某个靶点的shrna序列，利用所述shrna干扰靶点的表达，从而影响靶点的功能，然后通过考察所述shrna对细胞增殖速率的影响，评估该序列是否具有潜在的肿瘤治疗效应。

5、因此，如何利用rna干扰技术，设计一种针对hspa8基因并能够抑制恶性肿瘤细胞的shrna序列，即shhspa8，为结直肠癌等相关癌症的治疗提供一条有益的途径成为一种研究方向。

技术实现思路

1、本发明针对现有技术中抑制肿瘤细胞药物的不足，提供一种针对hspa8基因的shrna，即shhspa8，及其在治疗结直肠癌中的应用，以胞质伴侣蛋白hspa8为靶标，设计特异性shrna，实现抑制恶性肿瘤细胞生长的目的。

2、本发明首先提供了一种shhspa8序列，以胞质伴侣蛋白hspa8为靶标，设计特异性shrna，该序列能够显著降低结直肠癌细胞中hspa8的mrna和蛋白质的表达水平，以抑制了结直肠癌细胞的生长速率，shhspa8的序列如seq id no:1所述。

3、本发明的shhspa8用于沉默hspa8基因。

4、进一步地，所述hspa8的靶点序列为ggaggtgtcttctatggttct。

5、再一进步地，克隆所述shhspa8序列的寡核苷酸序列包括正义链和反义链，所述正义链的寡核苷酸序列为：

6、5’-ccggggaggtgtcttctatggttctctcgagagaaccatagaagacacctcctttttg-3’；

7、所述反义链的寡核苷酸序列为：

8、5’-aattcaaaaaggaggtgtcttctatggttctctcgagagaaccatagaagacacctcc-3’。

9、本发明还提供一种上述shhspa8在治疗结直肠癌中针对hspa8作为治疗靶点的应用。

10、本发明设计的shhspa8序列，能显著降低结直肠癌细胞中hspa8的mrna和蛋白质的表达水平，从而显著抑制结直肠癌细胞的生长速率，对于治疗结直肠癌具有十分重要的意义。如果将该shrna序列进一步开发成为临床治疗药物，将具有广泛的市场应用前景，潜在的社会和经济效益将十分巨大。

技术特征：

1.一种针对hspa8基因的shrna，即shhspa8，其特征在于，其序列如seq id no:1。

2.根据权利要求1所述的shhspa8，其特征在于，所述shhspa8用于沉默hspa8基因。

3.根据权利要求2所述的shhspa8，其特征在于，所述shhspa8的靶点序列为ggaggtgtcttctatggttct。

4.根据权利要求3所述的shhspa8，其特征在于，所述shhspa8序列包括寡核苷酸序列包括正义链和反义链，所述正义链的寡核苷酸序列为：

5.如权利要求1至4任一项所述的shhspa8在治疗结直肠癌中针对hspa8作为治疗靶点的应用。

技术总结
本发明涉及生物医药技术领域内一种针对HSPA8基因的shRNA序列及其在治疗结直肠癌中的应用，具体设计了一种shHSPA8序列，用于沉默HSPA8基因，将shHSPA8序列克隆至慢病毒表达载体pLKO.1，包装慢病毒，感染人结直肠癌细胞，成功降低了HSPA8在人结直肠癌细胞中的mRNA和蛋白质表达水平，从而显著抑制了结直肠癌细胞的生长速率，对于治疗结直肠癌具有十分重要的意义。本发明设计的shHSPA8序列便于开发成为治疗结直肠癌的临床治疗药物，具有广泛的市场应用前景，潜在的社会和经济效益。

技术研发人员：张新跃,梅馨予,张智萍,丁笠,廖凯,陈玥柔,徐玉洁,徐林,李婧雯,王准,睨伟
受保护的技术使用者：扬州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1