肌红蛋白突变体、试剂盒及其应用的制作方法

本发明涉及肌红蛋白改造领域，具体而言，涉及一种肌红蛋白突变体、试剂盒及其应用。

背景技术：

1、肌红蛋白是一种氧结合血红蛋白，存在于心肌及骨骼肌细胞质中，该血红蛋白协助氧气进入细胞，并供部分氧气贮存。在急性心肌梗塞(ami)病人中，肌红蛋白水平在两小时内便会变得异常，6-9小时达到峰值，然后在梗塞后的24-36小时回到正常水平。根据ifcc及nacb标准，肌红蛋白能够作为心肌损伤的早期标志物。现有技术中通常是直接通过天然提取肌红蛋白，或是通过重组表达的方式获取肌红蛋白，但当野生型的肌红蛋白应用于临床中进行检测作为标志物时，稳定性较差，易导致最终的检测结果不准确。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种肌红蛋白突变体、试剂盒及其应用，以解决现有技术中肌红蛋白稳定性差的问题。

2、为了实现上述目的，根据本发明的第一个方面，提供了一种肌红蛋白突变体，该突变体包括(a)以seq id no：1所示的野生型肌红蛋白为基础发生突变的蛋白，突变包括g75位点发生的突变；(b)与(a)中限定的氨基酸序列具有70％以上同源性且具有肌红蛋白活性的蛋白质。

3、进一步地，(a)中，g75位点取代的氨基酸的类型包括g75c；其中，数字前字母代表原始氨基酸，数字后字母代表突变氨基酸。

4、进一步地，肌红蛋白突变包括如下任意一种氨基酸突变组合：g75c+e86c或g74c+g75c；其中，g75c+e86c为seq id no：2所示的蛋白，g74c+g75c为seq id no：3所示的蛋白；肌红蛋白突变体包括seq id no：2或seq id no：3所示的蛋白具有70％以上同源性且具有肌红蛋白活性的蛋白质。

5、进一步地，肌红蛋白突变体包括与(a)中限定的氨基酸序列具有80％以上、85％以上，更优选95％以上，进一步优选99％以上同源性且具有肌红蛋白活性的蛋白质。

6、为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种dna分子，该dna分子编码上述任一种的肌红蛋白突变体。

7、为了实现上述目的，根据本发明的第三个方面，提供了一种重组质粒，该重组质粒连接有上述的dna分子。

8、为了实现上述目的，根据本发明的第四个方面，提供了一种宿主细胞，该宿主细胞内含有上述的dna分子或上述的重组质粒。

9、进一步地，上述宿主细胞包括原核细胞或真核细胞；优选地，原核细胞包括大肠杆菌；优选地，大肠杆菌包括rosetta菌株。

10、为了实现上述目的，根据本发明的第五个方面，提供了一种肌红蛋白测定试剂盒，该肌红蛋白测定试剂盒包括定标品，定标品包括上述任一种肌红蛋白突变体；该肌红蛋白测定试剂盒还包括如下至少一种：微球、标记物和缓冲液；微球包括肌红蛋白抗体包被微球；标记物包括肌红蛋白抗体标记物，优选为如下任意一种标记物标记肌红蛋白抗体：发光标记物、亲和标记物、荧光染料或标记酶；优选地，发光标记物包括abei；其中，包被微球的肌红蛋白抗体与带有标记物的肌红蛋白抗体不同。

11、为了实现上述目的，根据本发明的第六个方面，提供了一种上述任一种肌红蛋白突变体、dna分子、重组质粒或宿主细胞在制备检测心肌损伤的检测产品中的应用。

12、应用本发明的技术方案，对野生型肌红蛋白的g75位点进行定点突变，获得肌红蛋白突变体，相较于野生型肌红蛋白稳定性更高，能够作为定标品应用于肌红蛋白测定试剂盒中进行检测，提高检测结果的准确性。

技术特征：

1.一种肌红蛋白突变体，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的肌红蛋白突变体，其特征在于，所述(a)中，g75位点取代的氨基酸的类型包括g75c；其中，数字前字母代表原始氨基酸，数字后字母代表突变氨基酸。

3.根据权利要求2所述的肌红蛋白突变体，其特征在于，所述肌红蛋白突变包括如下任意一种氨基酸突变组合：g75c+e86c或g74c+g75c；其中，g75c+e86c为seq id no：2所示的蛋白，g74c+g75c为seq id no：3所示的蛋白；所述肌红蛋白突变体包括seqid no：2或seq idno：3所示的蛋白具有70％以上同源性且具有肌红蛋白活性的蛋白质。

4.根据权利要求1中所述的肌红蛋白突变体，其特征在于，所述肌红蛋白突变体包括与(a)中限定的氨基酸序列具有80％以上、85％以上，更优选95％以上，进一步优选99％以上同源性且具有肌红蛋白活性的蛋白质。

5.一种dna分子，其特征在于，所述dna分子编码权利要求1至4中任一项所述的肌红蛋白突变体。

6.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒连接有权利要求5所述的dna分子。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞内含有权利要求5所述的dna分子或权利要求6所述的重组质粒。

8.根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括原核细胞或真核细胞；

9.一种肌红蛋白测定试剂盒，其特征在于，所述肌红蛋白测定试剂盒包括定标品，所述定标品包括权利要求1至4中任一项所述的肌红蛋白突变体；

10.权利要求1至4中任一项所述的肌红蛋白突变体、权利要求5所述的dna分子、权利要求6所述的重组质粒或权利要求7或8所述的宿主细胞在制备检测心肌损伤的检测产品中的应用。

技术总结
本发明提供了一种肌红蛋白突变体、试剂盒及其应用。该肌红蛋白突变体包括：(a)以SEQ ID NO：1所示的野生型肌红蛋白为基础发生突变的蛋白，该突变包括G75位点发生的突变；(b)与(a)中限定的氨基酸序列具有70％以上同源性且具有肌红蛋白活性的蛋白质。能够解决现有技术中肌红蛋白稳定性差的问题，适用于肌红蛋白改造领域。

技术研发人员：李康,陈清浦,何海华,熊厅,张琳,张妍,吕漫
受保护的技术使用者：深圳市新产业生物医学工程股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24