一种抗原多肽及其应用的制作方法

本发明涉及免疫生物学，具体为涉及一种抗原多肽及其应用。

背景技术：

1、包虫病(cystic echinococcosis；ce)又称棘球蚴病，是细粒棘球绦虫(echinococcus granulosus；eg)的幼虫寄生于人体及某些动物的肝、肺、脑等组织器官所致的一种严重的人畜共患寄生虫病，严重危害人们健康和畜牧业的发展。

2、影像学检测是比较常见的包虫病诊断方法，但是由于包虫病潜伏期较长，并且只有在包虫病形成的包囊大到一定程度时才能通过影像学检测到，所以需要血清学检测作为影像学检测的重要补充手段。目前，商品化包虫抗原是天然纯化抗原，分离纯化自细粒棘球蚴破碎后的可溶性抗原片段，是一种包含多种包虫蛋白的混合物，混合的蛋白越多越容易在血清检测时产生更多假阳性或假阴性结果。

3、获取单一抗原，以用于包虫病检测，减少假阳性或假阴性结果，成为目前亟待解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供一种纯度较高的抗原多肽，可用于血清学检测包虫病，扩大了抗原多肽的选择范围；为此，本发明还提供了一种上述抗原多肽在制备诊断、治疗或预防包虫病的产品中的应用。

2、为了解决上述技术问题，本发明的第一方面，提供一种抗原多肽，所述抗原多肽包含如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3所示的氨基酸序列的一种或多种。

3、作为优选的实施例，所述抗原多肽来自细粒棘球绦虫。

4、本发明的第二方面，提供上述抗原多肽的制备方法，包括如下步骤：

5、s1、向包虫病患者肝脏包囊组织裂解样品中加入hla-i抗体或hla-ii抗体，将hla-多肽免疫共沉淀下来；

6、s2、将抗体-hla蛋白和多肽分离，筛选，获得上述的抗原多肽。

7、作为优选的实施例，所述步骤s2中的筛选包括普适性筛选和免疫原性测定。

8、通过免疫共沉淀技术，利用hla-i、hla-ii抗体将hla-多肽从细胞裂解液中免疫共沉淀下来，接着将抗体-hla蛋白和多肽分离，获得纯化的多肽，通过该方法可获得179条多肽，hla i结合肽段中有105条肽段来源于棘球绦虫，hla ii结合肽段中有74条肽段来源于棘球绦虫。并非获得的所有多肽均可用于疫苗和包虫病诊断，进一步通过普适性和免疫原性研究，最终获得上述三条抗原多肽。

9、通过该方法制备的抗原多肽，与hla-i、hla-ii分子具有高结合力和优异的免疫原性，且纯度高，可用于疫苗的制备和包虫病的诊断。

10、本发明的第三方面，提供一种分离的核酸，所述分离的核酸编码上述的抗原多肽。

11、本发明的第四方面，提供一种重组表达载体，包含上述的核酸。

12、本发明的第五方面，提供一种包含上述的抗原多肽、上述的核酸或上述重组表达载体的细胞。

13、本发明的第六方面，提供一种上述的抗原多肽、上述的核酸、上述的重组表达载体或上述的细胞在制备诊断、治疗或预防包虫病的产品中的应用。

14、本发明的第七方面，提供一种用于检测包虫病的试剂盒，所述试剂盒包括上述的抗原多肽。

15、本发明的第八方面，提供一种包虫病的疫苗，所述的疫苗包括上述的抗原多肽、上述的核酸、上述的重组表达载体或上述的细胞。

16、作为优选的实施例，所述疫苗还包括免疫学上可接受的载体。

17、作为优选的实施例，所述免疫学上可接受的载体包括佐剂、稀释剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、转染促进剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、促进吸收剂和/或增效剂。

18、本发明的第九方面，提供一种疫苗的制备方法，所述的制备方法包括将上述的抗原多肽与免疫学上可接受的载体混合。

19、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

20、(1)本发明的抗原多肽，其纯度高达99％，丰富了包虫病单一抗原数据库，为实验室诊断包虫病的特异性和灵敏性提升提供了空间。

21、(2)本发明的抗原多肽与hla-i\ii类分子具有高结合力和稳定性，可应用于细粒棘球绦虫病的预防、诊断及治疗。

22、(3)本发明的抗原多肽可通过化学方式大量合成，为大规模筛选人源包虫病提供了可能。

23、以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

技术特征：

1.一种抗原多肽，其特征在于，所述抗原多肽包含如seq id no:1、seq id no:2、seqid no:3所示的氨基酸序列的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的抗原多肽，其特征在于，所述抗原多肽来自细粒棘球绦虫。

3.一种权利要求1所述抗原多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s2中的筛选包括普适性筛选和免疫原性测定。

5.一种分离的核酸，其特征在于，所述分离的核酸编码如权利要求1所述的抗原多肽。

6.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求5所述的核酸。

7.一种包含权利要求1所述的抗原多肽、权利要求5所述的核酸或权利要求6所述重组表达载体的细胞。

8.一种权利要求1所述的抗原多肽、权利要求5所述的核酸、权利要求6所述的重组表达载体或权利要求7所述的细胞在制备诊断、治疗或预防包虫病的产品中的应用。

9.一种用于检测包虫病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的抗原多肽。

10.一种包虫病的疫苗，其特征在于，所述的疫苗包括权利要求1所述的抗原多肽、权利要求5所述的核酸、权利要求6所述的重组表达载体或权利要求7所述的细胞。

技术总结
本发明公开了一种抗原多肽及其应用，所述抗原多肽包含如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的一种或多种。本发明的抗原多肽，其纯度高达99％，丰富了包虫单一抗原数据库，为实验室诊断包虫病的特异性和灵敏性提升提供了空间。

技术研发人员：曹建平,胡媛,吴晓莹
受保护的技术使用者：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/4/22