一株哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株及其感染动物模型的建立方法和应用

本发明涉及生物，特别是涉及一株哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株及其感染动物模型的建立方法和应用。

背景技术：

1、哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus，mrv)属于正呼肠孤病毒属，呼肠孤病毒科，是一种无包膜病毒。呼肠孤病毒科共有9个属，其中3个属(正呼肠孤病毒属、轮状病毒属和环状病毒属)可感染各种哺乳动物。正呼肠孤病毒包括哺乳动物正呼肠孤病毒、鸟禽正呼肠孤病毒、nalson湾正呼肠孤病毒和单纯狒狒正呼肠孤病毒4种。其中mrv包含10个双链rna基因片段，是双链rna病毒。哺乳动物呼肠孤病毒有四种血清型或病毒种内的明显变异，这意味着有四种单独的哺乳动物呼肠孤病毒株：1型lang，2型jones，3型dearing，4型ndelle。mrv感染了许多作为自然宿主的哺乳动物和脊椎动物。由该病毒引起的或与该病毒相关的某些疾病包括轻度上呼吸道疾病和胃肠道疾病。随着近几年越来越多报道出mrv的新发现，表明mrv3在猪群中具有一定的流行性，并可能是养猪业的重要病原体并与其他猪病原体一起共同导致肠道疾病，威胁动物和公共健康。

2、病毒感染模型的构建对mrv3的防控、疫苗研究及药物研发具有重要意义，但是，目前哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型建立方法的研究报道甚少，且关于仔猪疾病模型的构建更少。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一株哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株及其感染动物模型的建立方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明提供一种猪呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型的建立方法，构建的动物模型为mrv3的防控提供了基础，对其疫苗研究及药物研发具有重要意义。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一株哺乳动物呼肠孤病毒3型(mammalian orthoreovirus 3type)hn2021-01毒株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202373，保藏时间为2023年8月18日，保藏地址为中国武汉大学。

4、本发明还提供一株哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型的建立方法，包括利用所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株感染仔猪的步骤。

5、进一步地，所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株的病毒浓度为106tcid50，感染剂量为8-10ml/头。

6、进一步地，所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株为体外传至第5代的毒株。

7、进一步地，所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株的感染方式包括口服。

8、本发明还提供一种所述的建立方法构建的哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型在筛选或评价能够预防、缓解或者治疗哺乳动物呼肠孤病毒感染的药物中的应用。

9、进一步地，所述药物包括益生菌药物。

10、本发明还提供一种所述的建立方法构建的哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型在筛选或评价能够预防哺乳动物呼肠孤病毒感染或者清除哺乳动物呼肠孤病毒的疫苗中的应用。

11、本发明公开了以下技术效果：

12、本发明从猪场临床腹泻样本中分离得到一株在河南地区流行的毒株，经过vero细胞传代后、纯化，通过基因组测序，电镜观察，ifa，wb，分析毒株在vero细胞、st细胞和llc-pk细胞上生长特性及全基因组序列，鉴定出该毒株为哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株hn2021-01。

13、将该病毒接种五日龄仔猪，临床出现轻微腹泻，生长迟缓等现象；组织分布、病理切片及组化结果分析，感染仔猪肠道出现典型的病理变化，肠壁变薄，肠道出血，肠绒毛脱落等病理现象；结果表明hn2021-01对仔猪的致病性具有明显的病理变化，然而在临床上无明显症状，说明了hn2021-01毒株在感染仔猪后，仔猪机体呈隐性感染，处于亚健康状态。证明本发明成功构建了mrv3型流行毒株感染动物模型，并进一步研究发现，该病毒对仔猪肠道菌群多样性及微生物群落组成产生较大影响，为益生菌药物筛选提供了研究基础。

14、本发明提供一种猪呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型的建立方法，为呼肠孤病毒的防控提供了基础，对其疫苗研究及药物研发具有重要意义。

技术特征：

1.一株哺乳动物呼肠孤病毒3型(mammalian orthoreovirus 3type)hn2021-01毒株，其特征在于，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：v202373，保藏时间为2023年8月18日，保藏地址为中国武汉大学。

2.一株哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型的建立方法，其特征在于，包括利用权利要求1所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株感染仔猪的步骤。

3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株的病毒浓度为106tcid50，感染剂量为8-10ml/头。

4.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株为体外传至第5代的毒株。

5.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述哺乳动物呼肠孤病毒3型hn2021-01毒株的感染方式包括口服。

6.一种如权利要求2-5任一项所述的建立方法构建的哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型在筛选或评价能够预防、缓解或者治疗哺乳动物呼肠孤病毒感染的药物中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物包括益生菌药物。

8.一种如权利要求2-5任一项所述的建立方法构建的哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株感染动物模型在筛选或评价能够预防哺乳动物呼肠孤病毒感染或者清除哺乳动物呼肠孤病毒的疫苗中的应用。

技术总结
本发明公开了一株哺乳动物呼肠孤病毒3型毒株及其感染动物模型的建立方法和应用，属于生物技术领域，该毒株保藏编号为CCTCC NO：V202373；该建立方法包括利用该呼肠孤病毒3型(MRV3)HN2021‑01毒株感染仔猪的步骤。本发明分离到一株MRV3型流行毒株HN2021‑01，将该病毒接种五日龄仔猪，对仔猪的致病性具有明显的病理变化，然而在临床上无明显症状，证实HN2021‑01毒株在感染仔猪后，仔猪机体呈隐性感染，处于亚健康状态；本发明成功构建了MRV3型流行毒株感染动物模型，并进一步发现，该病毒对仔猪肠道菌群多样性及微生物群落组成产生较大影响，为益生菌药物筛选提供了研究基础。

技术研发人员：胡慧,魏战勇,韩方方,袁晋,组少坡,张越
受保护的技术使用者：河南农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/17