一种精子显微操作液及其制备方法与应用与流程

本发明涉及辅助生殖，尤其涉及一种精子显微操作液及其制备方法与应用。

背景技术：

1、卵胞浆内单精子显微注射(icsi)是使用显微操作技术将精子注射到卵细胞胞浆内，使卵子受精的技术。该技术为不孕不育的治疗提供了新方案。

2、icsi操作者需要在显微镜下对单个精子进行人工挑选，人工挑选不可避免的需要显微操作液。现有技术的精子显微操作液的作用仅是降低精子的运动速度，并不能对精子进行筛选。

3、因此，需要一种性能更优良的精子显微操作液来满足现有技术的不足。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种精子显微操作液及其制备方法与应用。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种精子显微操作液，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：

4、麦芽糊精5～10mg/l、羟乙基纤维素5～10mg/l、大豆异黄酮0.2～0.3μg/l、小牛血清60～80ml/l、丙酮酸钠0.1～0.2mg/l、葡萄糖1～3mg/l、4-羟乙基哌嗪乙磺酸900～1100mg/l、硫酸镁95～135mg/l、碳酸氢钠50～60mg/l、氯化钠5000～6000mg/l、氯化钾380～420mg/l、氯化钙560～580mg/l、庆大霉素8～9mg/l。

5、作为优选，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：

6、麦芽糊精6～9mg/l、羟乙基纤维素6～9mg/l、大豆异黄酮0.225～0.275μg/l、小牛血清65～75ml/l、丙酮酸钠0.125～0.175mg/l、葡萄糖1.5～2.5mg/l、4-羟乙基哌嗪乙磺酸950～1050mg/l、硫酸镁105～125mg/l、碳酸氢钠52～58mg/l、氯化钠5200～5800mg/l、氯化钾390～410mg/l、氯化钙565～575mg/l、庆大霉素8.25～8.75mg/l。

7、作为优选，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：

8、麦芽糊精7.5mg/l、羟乙基纤维素7.5mg/l、大豆异黄酮0.25μg/l、小牛血清70ml/l、丙酮酸钠0.15mg/l、葡萄糖2mg/l、4-羟乙基哌嗪乙磺酸1000mg/l、硫酸镁115mg/l、碳酸氢钠55mg/l、氯化钠5500mg/l、氯化钾400mg/l、氯化钙570mg/l、庆大霉素8.5mg/l。

9、作为优选，所述精子显微操作液的ph为7.2～7.5。

10、本发明还提供了一种精子显微操作液的制备方法，包括如下步骤：

11、(1)称取所述的精子显微操作液中的组分与水混合，搅拌至溶解，得到混合液；

12、(2)调节所述混合液的ph后，过滤除菌，得到精子显微操作液。

13、作为优选，步骤(1)所述搅拌的转速为300～400rpm。

14、作为优选，步骤(2)所述过滤除菌的方法为滤膜过滤法；

15、所述滤膜的孔径为0.1～0.2μm。

16、本发明还提供了所述的精子显微操作液或所述的制备方法制备得到的精子显微操作液在制备保持精子活力和/或减少精子损伤的产品中的应用。

17、本发明还提供了所述的精子显微操作液或所述的制备方法制备得到的精子显微操作液在制备卵胞浆内单精子注射试剂中的应用。

18、本发明提供了一种精子显微操作液及其制备方法与应用，本发明的精子显微操作液具有如下优点：

19、麦芽糊精和羟乙基纤维素配合可以降低精子的运动速度，为挑选活力好的精子提供便利条件。麦芽糊精还为一种糖类组分，其与葡萄糖、丙酮酸钠配合为精子提供生长发育的能量。小牛血清通过结合脂肪酸抑制脂肪的过氧化反应，从而稳定和保护细胞膜，为配子发育提供必要和直接的营养物质。4-羟乙基哌嗪乙磺酸可以调控精子显微操作液的ph，使其具有更强的缓冲能力，ph更稳定。硫酸镁、碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙的加入为精子显微操作液提供稳定的离子环境，维持精子细胞的渗透压。庆大霉素具有抗菌功效，其可以抑制筛选过程中杂菌的渗入，而影响精子的活力和受精卵的形成。大豆异黄酮可以提高正常精子的穿透能力，有助于更好的区分正常精子和异常精子。

20、本发明的精子显微操作液无菌，ph适宜，更利于胚囊的形成。

技术特征：

1.一种精子显微操作液，其特征在于，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：

2.根据权利要求1所述的精子显微操作液，其特征在于，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：

3.根据权利要求2所述的精子显微操作液，其特征在于，以水为溶剂，包括如下浓度的组分：

4.根据权利要求1～3任意一项所述的精子显微操作液，其特征在于，所述精子显微操作液的ph为7.2～7.5。

5.一种精子显微操作液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述搅拌的转速为300～400rpm。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述过滤除菌的方法为滤膜过滤法；

8.权利要求1～4任意一项所述的精子显微操作液或权利要求5～7任意一项所述的制备方法制备得到的精子显微操作液在制备保持精子活力和/或减少精子损伤的产品中的应用。

9.权利要求1～4任意一项所述的精子显微操作液或权利要求5～7任意一项所述的制备方法制备得到的精子显微操作液在制备卵胞浆内单精子注射试剂中的应用。

技术总结
本发明涉及辅助生殖技术领域，尤其涉及一种精子显微操作液及其制备方法与应用。本发明的精子显微操作液以水为溶剂，包括如下浓度的组分：麦芽糊精5～10mg/L、羟乙基纤维素5～10mg/L、大豆异黄酮0.2～0.3μg/L、小牛血清60～80ml/L、丙酮酸钠0.1～0.2mg/L、葡萄糖1～3mg/L、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸900～1100mg/L、硫酸镁95～135mg/L、碳酸氢钠50～60mg/L、氯化钠5000～6000mg/L、氯化钾380～420mg/L、氯化钙560～580mg/L、庆大霉素8～9mg/L。按照本发明的方法配置得到的精子显微操作液更好对精子进行筛选。

技术研发人员：冯怀亮,冯博
受保护的技术使用者：瑞柏生物（中国）股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24