FKTN基因突变体、突变体蛋白、试剂、试剂盒及应用的制作方法

本发明涉及检测试剂领域，尤其涉及一种fktn基因突变体、突变体蛋白、试剂、试剂盒及应用。

背景技术：

1、walker-warburg 综合征（walker-warburg syndrome，wws）是一种常染色体隐性遗传病，以先天性肌营养不良、脑回畸形和眼睛异常为特征。fktn基因突变是导致walker-warburg 综合征的病因，由于fktn基因表达的fukutin蛋白在大脑、心肌、骨骼肌、视网膜等多种组织表达，该病临床表现复杂且存在较大的遗传异质性，临床特征包括骨骼肌的营养不良改变和中枢神经系统迁移障碍导致的大脑和小脑皮质发育不良，临床表现为肌张力减退、虚弱和精神运动迟缓，有轻度、典型和重度表型等。典型患者临床特征包括要幼儿早期开始的运动发育迟缓、肌张力减退、进行性肌肉无力、关节挛缩、智力障碍和癫痫等，眼部症状包括近视、白内障、异常眼动、视盘苍白和视网膜脱离等血清学示肌酸激酶明显升高，肌电图示肌源性损害，疾病逐渐进展，死亡平均年龄16岁，心脏受累在患者第二个十年中表现明显，头颅磁共振特征性改变包括：不规则或“鹅卵石”脑表面、侧脑室增大、白质信号异常、小脑、脑干轻度发育不良和小脑囊肿等。

2、fktn基因（mim 607440）定位于染色体9q31.2，包括11个外显子和10个内含子，基因长83.0kb，编码461个氨基酸的fktn (fukutin） 蛋白。fukutin蛋白在高尔基体中参与α-抗肌萎缩相关糖蛋白（α-dystroglycan，α-dg）翻译后的糖基化修饰；抗肌萎缩相关糖蛋白在多种组织中广泛表达于包括大脑、周围神经、心肌、骨骼肌、肝脏、肺部、皮肤等，翻译后形成的前体在内质网中被水解，从而形成细胞外α-dg和跨膜β-dg；外α-dg的c端与β-dg相连，中间的粘蛋白样结构被多种糖链附着修饰；α-dg可与几种细胞外基质和突触蛋白结合，这些结合发挥功能需要α-dg的连接糖基化，fktn基因导致α-dg的o-连接糖基化缺陷，进而影响与α-dg配体连接相关的各种生理过程，进而累及患者骨胳肌、中枢神经系统及眼部等，导致一系列临床症状，根据患者的基因突变位点，临床表现差异较大。

3、因此，基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊walker-warburg 综合征的重要遗传学标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊断。

技术实现思路

1、本发明的主要目的是提供一种fktn基因突变体、突变体蛋白、试剂、试剂盒及应用，以解决walker-warburg 综合征的筛查和诊断的技术问题。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种fktn基因突变体，相比野生型fktn基因，所述fktn基因突变体的第5号外显子的第349位碱基t重复。

3、本发明提供一种fktn突变体蛋白，相比野生型fktn蛋白，所述fktn突变体蛋白的第117位由酪氨酸突变为亮氨酸，并造成了移码突变，在后续的7个氨基酸后终止。

4、本发明提供一种如上所述的fktn基因突变体作为检测靶点在制备walker-warburg 综合征的检测试剂和/或制备walker-warburg 综合征检测试剂盒中的应用。

5、进一步的，所述检测试剂和/或所述检测试剂盒包括扩增引物，所述扩增引物包括

6、上游引物fktn-f1和下游引物fktn-r1；所述fktn-f1的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述下游引物fktn-r1的核苷酸序列如seq id no.2所示。

7、进一步的，所述检测试剂和/或所述检测试剂盒包括测序引物，所述测序引物包括上游引物fktn-seqf1和下游引物fktn-seqr1；所述上游引物fktn-seqf1的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述下游引物fktn-seqr1的核苷酸序列如seq id no.6所示。

8、本发明提供一种如上所述的fktn突变体蛋白作为检测靶点在制备walker-warburg 综合征的检测试剂和/或制备walker-warburg 综合征的检测试剂盒中的应用。

9、本发明提供一种walker-warburg 综合征的检测试剂，所述检测试剂的检测靶点包括如上所述的fktn基因突变体或如上所述的fktn突变体蛋白。

10、本发明提供一种walker-warburg 综合征的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括如上所述的检测试剂。

11、与常用技术相比，本发明主要包括以下优点：

12、本发明提供了一种fktn突变体蛋白，所述fktn突变体蛋白包括p.y117lfs7。p.y117lfs7与野生型fktn基因编码的蛋白相比，第117位氨基酸由酪氨酸（y）突变为亮氨酸（l），并造成了移码突变，并在后续的7个氨基酸后终止。

13、本发明首次发现fktn突变体蛋白可以参与walker-warburg 综合征的致病，且与walker-warburg 综合征的发病密切相关，通过检测该fktn突变体蛋白在生物样品中是否存在，可以有效地检测患者是否为walker-warburg 综合征的携带者或者walker-warburg综合征病患，明确患者的分子遗传学或产前诊断、指导患者的精准治疗和优生优育。

14、本发明还提供了编码上述所述fktn突变体蛋白的fktn基因突变体，所述fktn基因突变体包括c.349dupt。c.349dupt突变指野生型fktn基因第5号外显子的第349位t碱基重复，形成fktn基因突变体。本发明通过检测上述fktn基因突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测患者是否因此患walker-warburg 综合征或者患者是否为walker-warburg综合征携带者。

15、接上述，本发明申请提出导致walker-warburg 综合征的致病基因，可以有效将walker-warburg 综合征患者、walker-warburg 综合征携带者和正常人群区分开，因此，本发明的致病基因突变可以作为诊断walker-warburg 综合征的生物标志物。本发明可通过检测受试者是否携带有上述突变，用于walker-warburg 综合征的遗传学诊断、筛查和优生优育指导。本发明所提供的检测试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断walker-warburg 综合征。本发明为walker-warburg 综合征的发病机制研究奠定了新的基础和途径，为walker-warburg 综合征患者的治疗提供全新的理论依据，并为治疗walker-warburg 综合征提供可能的药物靶点。

技术特征：

1.一种fktn基因突变体，其特征在于，相比野生型fktn基因，所述fktn基因突变体的第5号外显子的第349位碱基t重复。

2.一种fktn突变体蛋白，其特征在于，相比野生型fktn蛋白，所述fktn突变体蛋白的第117位由酪氨酸突变为亮氨酸，并造成了移码突变，在后续的7个氨基酸后终止。

3.一种如权利要求1所述的fktn基因突变体作为检测靶点在制备walker-warburg 综合征的检测试剂和/或制备walker-warburg 综合征检测试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂和/或所述检测试剂盒包括扩增引物，所述扩增引物包括：

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂和/或所述检测试剂盒包括测序引物，所述测序引物包括上游引物fktn-seqf1和下游引物fktn-seqr1；所述上游引物fktn-seqf1的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述下游引物fktn-seqr1的核苷酸序列如seq id no.6所示。

6.一种如权利要求2所述的fktn突变体蛋白作为检测靶点在制备walker-warburg 综合征的检测试剂和/或制备walker-warburg 综合征的检测试剂盒中的应用。

7.一种walker-warburg 综合征的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂的检测靶点包括如权利要求1所述的fktn基因突变体或如权利要求2所述的fktn突变体蛋白。

8.一种walker-warburg 综合征的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如权利要求7所述的检测试剂。

技术总结
本发明提供了一种FKTN基因突变体、突变体蛋白、试剂、试剂盒及应用；致病基因相比于野生型FKTN基因，所述FKTN基因突变体的第5号外显子的第349位碱基T重复；和/或，相较于野生型FKTN基因，所述FKTN基因突变体的第3号外显子的第62位由碱基T突变为碱基A。本发明的致病基因突变可以作为诊断Walker‑Warburg综合征的生物标志物。本发明可通过检测受试者是否携带有上述突变，用于筛查或诊断Walker‑Warburg综合征的遗传学诊断，以指导治疗。本发明所提供的检测试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断Walker‑Warburg综合征。

技术研发人员：曾桥,刘亚宁,徐霞
受保护的技术使用者：湖南家辉生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/1