一种用祛毒大动物肝脏制备肝肽的方法及其获得的产品

本申请涉及生物医药和保健品领域，特别涉及一种用祛毒大动物肝脏制备肝肽的方法及其获得的产品。

背景技术：

1、肽是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类物质。通常将分子量大于1000，小于10000的肽称为多肽；分子量在1000以下一般称为寡肽；小肽专指超低分子量、仅由2～4个氨基酸构成的高活性肽，分子量一般在180～480，小肽是寡肽中的超低分子量部分，具有特殊功能。

2、例如，小肽能够对动物的生理功能产生直接影响。小肽作为蛋白质的主要消化产物，在氨基酸消化、吸收以及动物营养代谢中起着重要作用。例如：血液循环中的小肽能直接参与组织蛋白质的合成；肝脏、肾脏、皮肤和其他组织也能完整地利用小肽。小肽还可以以络合物的形式与矿物质结合，从而促进矿物质的吸收利用。对于消化系统而言，小肽还能够促进氨基酸的吸收，加速蛋白质的合成。原因可能是：第一，游离氨基酸的吸收存在相互竞争的现象，例如游离的赖氨酸和精氨酸相互竞争吸收位点，而赖氨酸以肽的形式存在时，对精氨酸的吸收没有影响；第二，小肽本身对氨基酸及其残基的吸收有促进作用。肽类还是神经系统的重要活性物质。

3、小肽有些是天然产生的，有些则通过水解蛋白产生。由于动物的蛋白质成分比例与人体更为接近，相对于植物类蛋白质而言对人具有更高的营养价值。且大动物肝脏含有丰富的蛋白质、铁质及微生物a等，因此，从大动物肝脏中制备肝肽成为一种常用的利用现代生物技术从小分子肽来源。

4、常规用动物肝脏提取肝肽的方法，通常是用新鲜动物肝脏或者是冷冻保存后解冻的肝脏作为原料，如cn115181775a、cn 103255190 a均公开了用复合酶制备小分子多肽的方法，cn102764423a公开另一种由动物肝脏水解得到的多肽的药物组合物及其制备方法。但是上述肝肽提取方法中，采用的均为新鲜的猪肝或者其他动物肝脏，步骤较为复杂，没有对得到的肝肽产品中肽含量、小分子肽含量进行考察，或者结果不尽如人意，产品的口味也仅仅是满足较低要求。

5、因此，如何通过生物技术对动物肝脏进行处理，使得处理过程简便有效，并得到希望的分子量分布的肽组合物，仍在研究当中。

技术实现思路

1、为了实现上述发明目的，本申请提供以下技术方案：

2、本申请提供一种肝肽产品，其中全部肽的相对分子质量均小于10000，且相对分子质量在200-1000之间的肽在全部肽组分中的占比在80％以上，相对分子质量在200-500之间的肽在全部肽组分中的占比在75％以上，相对分子质量在200以下的占比在10％以下。并且，其中全部肽含量占肝肽产品的70％以上。

3、本申请还提供了一种肝肽的制备方法，其采用祛毒大动物肝脏作为原料，包括以下步骤：

4、粉碎步骤：将祛毒肝脏粉碎，得到祛毒肝脏粉碎产物；

5、酶解步骤：在祛毒肝脏粉碎产物中加入至少两倍质量的水，控制温度在50-60℃之间，加入基于粉碎产物0.1-1wt％的碱性蛋白酶，保温搅拌1-6个小时；

6、酶灭活步骤：将酶解产物升温至75-100℃，保温至少15分钟；

7、过滤步骤：将酶灭活后产物进行固液分离，得到的液体经过粗滤，再通过超滤膜进行过滤脱杂。

8、脱色步骤：经过超滤的清液加入活性炭进行脱色，脱色时间1-2小时；

9、浓缩步骤：将过滤去除活性炭的清液通过减压蒸馏进行浓缩，得到固体含量不低于20wt％的浓缩料液；以及

10、干燥步骤：所述浓缩料液经过杀菌和喷雾干燥得到最终产物。

11、在一个实施方式中，本申请采用的祛毒大动物肝脏为经过事先灌注处理，基本上去除了免疫细胞、血液和胆汁，从而去除了其中的病原体和毒素的大动物肝脏。在后续肝肽制备过程中，对肝脏原料的预处理变得简单易行，且肝脏原料本身病原体和毒素含量低也使得后续产物的不希望的杂质含量降低。

12、本申请实现的有益效果在于：采用祛毒大动物肝脏作为原料进行肝肽制备，原料中毒素和病原体含量较低，使得在肝肽制备过程中，对肝脏原料的预处理变得简单易行，安全有效，不涉及过多化学试剂。祛毒大动物肝脏作为原料本身病原体和毒素含量低也使得后续产物的不希望的杂质含量降低。采用碱性蛋白酶，并在一定的水解条件下进行处理，获得的产物肽含量更高，且相对分子质量低的肽组分占比更多。并且，通过本申请获得的肝肽口味更好。

技术特征：

1.一种肝肽产品，其中全部肽的相对分子质量均小于10000，且相对分子质量在200-1000之间的肽在全部肽组分中的占比在80％以上，相对分子质量在200-500之间的肽在全部肽组分中的占比在75％以上，相对分子质量在200以下的占比在10％以下。

2.根据权利要求1所述的肝肽产品，其中相对分子质量在200-1000之间的肽在全部肽组分中占比在85％以上，相对分子质量在200-500之间的肽在全部肽组分中的占比在80％以上，且相对分子质量在200以下的肽在全部肽组分中占比在7％以下。

3.根据权利要求1所述的肝肽产品，其中全部肽占所述肝肽产品的70wt％以上。

4.根据权利要求3所述的肝肽产品，其中全部肽占所述肝肽产品的75wt％以上。

5.一种肝肽的制备方法，其特征在于，采用祛毒大动物肝脏作为原料，包括以下步骤：

6.如权利要求5所述的肝肽的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：

7.如权利要求5所述的肝肽的制备方法，其特征在于，在所述酶解步骤中，酶解温度控制在55℃以上，碱性蛋白酶加入量为粉碎产物的0.3wt％以上，保温搅拌时间不低于3个小时。

8.如权利要求5所述的肝肽的制备方法，其特征在于，所述酶灭活步骤中，将酶解后产物升温至80℃以上。

9.如权利要求6所述的肝肽的制备方法，其特征在于，所述过滤步骤中超滤膜的孔径为50-100nm，超滤处理压力为0.1-0.2兆帕，当截流液折光度为零时结束超滤。

10.如权利要求6所述的肝肽的制备方法，其特征在于，所述脱色步骤中加入料液体积0.8-1％的活性炭进行脱色，所述活性炭通过板式过滤法除去。

11.如权利要求5所述的肝肽的制备方法，其特征在于，所述祛毒肝脏为经过灌注处理基本上去除了免疫细胞、血液和胆汁的肝脏，优选所述祛毒肝脏是新鲜的，或者以冷藏/冷冻后解冻方式保鲜的。

12.如权利要求11所述的肝肽的制备方法，其特征在于，所述免疫细胞为巨噬细胞。

技术总结
本申请涉及一种肝肽产品，其中全部肽的相对分子质量均小于10000，且相对分子质量在200‑1000之间的肽在全部肽组分中的占比在80％以上，且相对分子质量在200‑500之间的肽在全部肽组分中的占比在75％以上，相对分子质量在200以下的占比在10％以下。本申请还涉及了一种采用祛毒大动物肝脏制备肝肽的方法，其采用祛毒大动物肝脏作为原料，包括粉碎步骤，用碱性蛋白酶进行酶解的步骤，酶灭活步骤，过滤步骤等。

技术研发人员：董蒨,夏楠,魏宾,董冰子,刘瑶,王雪峰,修文丽
受保护的技术使用者：青岛大学
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10