一种构建牛T细胞受体TCRβCDR3文库的多重PCR引物组及其应用

本发明属于基因文库构建，尤其涉及一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组及其应用。

背景技术：

1、免疫学研究是探索生物体如何识别病原体、维护健康并应对疾病挑战的关键领域，为理解免疫系统功能、疾病机制及疫苗与治疗开发提供关键洞见。t细胞组库研究为免疫学提供了关键洞见，t细胞多样性和特异性与免疫应答、疾病治疗以及疫苗开发息息相关。了解动物的tcr β cdr3序列信息对于理解其免疫系统功能和特性至关重要。tcrβcdr3代表t细胞受体β链的互补决定区3，其中的多样性和特异性直接影响着t细胞的抗原识别和免疫反应。在过去几十年里，人和小鼠作为模型生物，在tcr β cdr3组库分析方面进行了广泛的研究，这些研究为免疫学、疾病诊断、免疫疗法以及疫苗研发提供了深刻的洞察。

2、随着高通量测序技术的不断发展和生物信息学分析工具的完善，tcr β cdr3组库分析变得更加全面和高效。这种技术的发展为研究人员提供了更准确、更全面的tcrβcdr3序列信息，这些信息对于免疫学基础研究、药物研发、疾病诊断和个性化医疗具有重要意义。目前本领域大多侧重于人类和小鼠tcr β cdr3组库分析方面，鲜有对于牛tcr β cdr3组库分析方法的有关研究。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组及其在构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库中的应用。本发明提供的牛的tcrβcdr3组库以及分析方法将填补牛的t细胞受体tcr β cdr3该领域的知识空白，并有望为兽医学、畜牧业以及相关领域的研究提供新的工具和视角。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组，所述多重pcr引物组包括核苷酸序列如seq id no.1-seq id no.47所示的引物序列。

4、本发明还提供了上述多重pcr引物组在构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库中的应用。

5、本发明还提供了一种构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的方法，包括如下步骤：采用上述的多重pcr引物组对牛dna进行多重pcr扩增，对扩增产物进行凝胶电泳检测，在100-250bp之间存在清晰的目的条带，表明建库成功。

6、优选的，所述多重pcr扩增的反应条件为：94℃预变性3分钟；94℃变性1分钟、56℃退火1分钟、72℃延伸1分钟，总共进行40个循环；72℃延伸10分钟。

7、优选的，所述多重pcr扩增的反应体系以50μl计，包括25μl dream taq green pcrmaster mix、2.8μl上游引物、2.8μl下游引物、5μl模板dna和14.4μl dd h2o。

8、本发明还提供了上述方法构建所得的牛t细胞受体tcr β cdr3文库。

9、本发明还提供了上述方法或上述tcr β cdr3文库在免疫学研究、遗传育种或疾病诊断药物研发中的应用。

10、本发明还提供了上述方法或上述tcr β cdr3文库在制备牛免疫响应特性评估药物、疫苗或免疫相关疾病诊断药物中的应用。

11、优选的，在上述方法基础上，还包括如下步骤：将扩增产物进行高通量测序，对测序结果进行数据分析和解读，获得牛tcr β cdr3组库的信息。

12、优选的，所述数据分析和解读包括tcr β cdr3序列的比对、统计、功能注释、克隆频率和/或氨基酸插入剪切分析，以获得相关参数和特征。

13、本发明的有益效果：

14、本发明首次提供了构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库的多重pcr引物组及其在构建牛t细胞受体tcr β cdr3文库中的应用，以及构建所得的牛t细胞受体tcr β cdr3文库，能够为牛免疫学研究、疾病诊断、疫苗研发以及免疫相关疾病治疗提供深入了解，并为牛免疫系统的特异性特征提供重要信息。本发明提供的牛的tcr β cdr3组库分析方法的开发将填补该领域的知识空白，并有望为兽医学、畜牧业以及相关领域的研究提供新的工具和视角，为牛免疫系统研究和相关应用提供重要支持。

15、本发明借助较少的多重pcr引物序列在同一个多重pcr反应体系中进行扩增，能够快速、高效地获得牛tcr β cdr3区的组库信息，为进一步的免疫相关研究和疾病诊断提供了有效的工具。本发明设计的多重pcr引物序列具有高特异性和灵敏度。根据本发明方法构建的组库，能够覆盖胚系基因中几乎所有的v基因和j基因，具有覆盖率高的优势。

技术特征：

1.一种构建牛t细胞受体tcrβcdr3文库的多重pcr引物组，其特征在于，所述多重pcr引物组包括核苷酸序列如seq id no.1-seq id no.47所示的引物序列。

2.权利要求1所述多重pcr引物组在构建牛t细胞受体tcrβcdr3文库中的应用。

3.一种构建牛t细胞受体tcrβcdr3文库的方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求1所述的多重pcr引物组对牛dna进行多重pcr扩增，对扩增产物进行凝胶电泳检测，在100-250bp之间存在清晰的目的条带，表明建库成功。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重pcr扩增的反应条件为：94℃预变性3分钟；94℃变性1分钟、56℃退火1分钟、72℃延伸1分钟，总共进行40个循环；72℃延伸10分钟。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述多重pcr扩增的反应体系以50μl计，包括25μl dream taq green pcr master mix、2.8μl上游引物、2.8μl下游引物、5μl模板dna和14.4μl dd h2o。

6.权利要求3-5任意一项所述方法构建所得的牛t细胞受体tcrβcdr3文库。

7.权利要求3-5任意一项所述方法或权利要求6所述的tcrβcdr3文库在免疫学研究、遗传育种或疾病诊断药物研发中的应用。

8.权利要求3-5任意一项所述方法或权利要求6所述的tcrβcdr3文库在制备牛免疫响应特性评估药物、疫苗或免疫相关疾病诊断药物中的应用。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，在权利要求3-5任意一项所述方法基础上，还包括如下步骤：将扩增产物进行高通量测序，对测序结果进行数据分析和解读，获得牛tcrβcdr3组库的信息。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述数据分析和解读包括tcrβcdr3序列的比对、统计、功能注释、克隆频率和/或氨基酸插入剪切分析，以获得相关参数和特征。

技术总结
本发明提供了一种构建牛T细胞受体TCRβCDR3文库的多重PCR引物组及其应用，属于基因文库构建技术领域。本发明提供的构建牛T细胞受体TCRβCDR3文库的多重PCR引物组，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.47所示的引物序列。本发明借助较少的多重PCR引物序列在同一个多重PCR反应体系中进行扩增，能够快速、高效地获得牛TCRβCDR3区的组库信息，为进一步的免疫相关研究和疾病诊断提供了有效的工具。本发明设计的多重PCR引物序列具有高特异性和灵敏度。根据本发明方法构建的组库，能够覆盖胚系基因中几乎所有的V基因和J基因，具有覆盖率高的优势。

技术研发人员：李俊,姚新生,吴凤丽,惠林虎,马龙,李洋洋
受保护的技术使用者：遵义医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/12