一种靶向调控Br-C基因的miR-285及其应用

本发明涉及农业生物，更具体的说是涉及一种靶向调控br-c基因的mir-285及其应用。

背景技术：

1、昆虫作为世界上种类数目众多，分布范围最广的生物群体，在长期的进化过程中，拥有一套属于自己的生存方式，能够在各种环境中存活并繁殖。对于完全变态昆虫来说，其一生要经历卵、幼虫、蛹、成虫四个不同的阶段。不同的虫态对环境的需求存在差异，并且每一个虫态之间的转换在基因方面也存在着复杂的调控关系。microrna(mirna)是一类仅有18～24个核苷酸的小分子非编码rna，广泛存在于高等和低等生物体内，并通过与目标生物的靶标基因相结合，在转录后水平发挥作用，达到降解靶标基因或翻译异常的目的。在昆虫体内mirna被发现参与调节昆虫的生长发育、变态发育、生殖发育、神经发育、免疫调节、昼夜节律、细胞凋亡、病原体互作等方面。broad-complex(br-c)作为蜕皮激素信号通路的主要应答基因，调控昆虫变态过程中的基因表达，参与昆虫的变态发育，在昆虫从幼虫到蛹发育的过程中发挥着重要作用。mirna作为一类在转录后水平发挥调控作用的小分子rna，在昆虫的生长发育的调控中占据重要地位。mirna调控靶标基因参与昆虫体内的正常生命活动，目前已经发现了多个mirna靶标不同的基因参与变态发育的调控。

2、沙葱萤叶甲galeruca daurica是近些年来肆虐危害草原植被的一种新害虫，属鞘翅目(coleoptera)、叶甲科(chrysomelidae)、萤叶甲亚科(galerucinae)。该虫一年发生一代，属完全变态昆虫，一生要经历卵、幼虫、蛹及成虫四个生命阶段。沙葱萤叶甲属寡食类害虫，以百合科葱属植物为食，幼虫和成虫皆可取食为害。该虫于四月中上旬以越冬卵的状态孵化，四月下旬至五月中旬为幼虫期，呈带状分布为害植被；于六月上旬羽化为成虫，取食约一周后躲藏在石块、牛粪及杂草下不食不动，从而抵御不利环境进入滞育期，在8月下旬滞育期解除，成虫开始活动取食，并开始进行交配产卵，后又以滞育卵开始越冬。该虫自2009年在内蒙古锡林郭勒草原突然大爆发后，危害趋势逐年加重。草场植被遭受取食后，草地破坏严重，植被紧缺，土壤结构受损，致使牧草数量和质量急剧下降，草原生态受到恶劣影响，降低了农牧民的经济效益，严重威胁了草原的可持续发展。

3、综上，如何提供一种可调控沙葱萤叶甲的mirna是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种靶向调控br-c基因的mir-285及其应用。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种靶向调控br-c基因的mir-285，所述mir-285的核苷酸序列如seq id no:1所示，br-c基因的核苷酸序列如seq id no:2所示；

4、cttgactaaagcttaccacgat，seq id no:1。

5、进一步的，靶向负调控br-c基因。

6、进一步的，mir-285通过靶向br-c基因调控蜕皮激素通路相关基因的表达。

7、进一步的，所述蜕皮激素通路相关基因为ecr、e74、e75、ftz-f1、hr3和atg5。

8、上述的mir-285在防治沙葱萤叶甲或在制备防治沙葱萤叶甲药剂中的应用。

9、一种防治沙葱萤叶甲的方法，促进或抑制沙葱萤叶甲体内mir-285的表达，所述mir-285的核苷酸序列如seq id no:1所示。

10、进一步的，促进沙葱萤叶甲体内mir-285的表达的物质如下：

11、mir-285-sense strand：uagcaccauucgaaaucaguuc，seq id no:3；

12、mir-285-antisense strand：acugauuucgaauggugcuauu，seq id no:4。

13、进一步的，抑制沙葱萤叶甲体内mir-285的表达的物质如下：

14、mir-285antagomir：gaacugauuucgaauggugcua，seq id no:5。

15、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：新型核酸农药是外源干扰rna制剂，因特异性强、高效、环境污染小等优势正逐渐成为新型农药研发的热点，开发绿色环保的新型rna农药将在沙葱萤叶甲绿色防控技术中具有巨大的应用前景。本发明通过注射mir-285的抑制剂和激动剂实现了对沙葱萤叶甲mir-285基因的沉默和过表达，从而影响了沙葱萤叶甲生长发育过程中重要基因br-c的表达，导致变态发育受阻最终死亡，为rna干扰技术在沙葱萤叶甲防治中的应用提供了一定的理论基础和数据支撑。

技术特征：

1.一种靶向调控br-c基因的mir-285，其特征在于，所述mir-285的核苷酸序列如seqid no:1所示，br-c基因的核苷酸序列如seq id no:2所示；

2.如权利要求1所述的mir-285，其特征在于，靶向负调控br-c基因。

3.如权利要求1所述的mir-285，其特征在于，mir-285通过靶向br-c基因调控蜕皮激素通路相关基因的表达。

4.如权利要求3所述的mir-285，其特征在于，所述蜕皮激素通路相关基因为ecr、e74、e75、ftz-f1、hr3和atg5。

5.权利要求1～4任一所述的mir-285在防治沙葱萤叶甲或在制备防治沙葱萤叶甲药剂中的应用。

6.一种防治沙葱萤叶甲的方法，其特征在于，促进或抑制沙葱萤叶甲体内mir-285的表达，所述mir-285的核苷酸序列如seq id no:1所示。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，促进沙葱萤叶甲体内mir-285的表达的物质如下：

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，抑制沙葱萤叶甲体内mir-285的表达的物质如下：

技术总结
本发明公开了一种靶向调控Br‑C基因的miR‑285及其应用。属于农业生物技术领域。所述miR‑285的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，Br‑C基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。miR‑285通过靶向Br‑C基因调控蜕皮激素通路相关基因的表达，进而打乱沙葱萤叶甲体内的稳态平衡，降低其化蛹率和羽化率。本发明为沙葱萤叶甲的生物防治提供了理论依据。

技术研发人员：李玲,王海超,李艳艳,韩海斌,谭瑶,霍志家,张静航,庞保平
受保护的技术使用者：内蒙古农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/3/31