生防菌黄暗青霉（Penicilliumcitreonigrum）JSNL-B16、生防菌剂及其制备方法和应用

本发明属于草莓生防，涉及生防菌黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16、生防菌剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、草莓是蔷薇科(rosaceae)草莓属(fragaria)多年生草本植物，具有结果早、生长周期短、适应性强和产量高等特点。草莓富含钙、钠、镁、铁等多种有益微量元素，具有较高的营养价值。另外，由于草莓色、香、味俱佳，深受消费者的喜爱，也带来了较高的经济效益。然而，在草莓生长过程中经常受到多种病害的侵染，其中草莓灰霉病和炭疽病是近年来草莓生产上发生较为广泛的病害。

2、草莓灰霉病是由灰葡萄孢菌(botrytis cinerea)引起的，除侵染草莓外，还可为害葡萄、黄瓜、番茄、韭菜、辣椒等多种植物，寄主范围广泛。灰霉病分布广、扩展速度快、危害严重，给全球果蔬的产量和品质带来巨大损失，在全球十大植物病害中排名第二位。灰霉病是草莓开花后危害最严重的一种真菌性病害，该病害主要侵染果实，也侵染叶片、果梗、花萼、花瓣及叶柄，造成花及果实腐烂，感病品种的病果率一般在30％-60％，严重的情况下甚至绝收，给草莓生产造成巨大的损失。

3、草莓炭疽病是由炭疽菌(刺盘孢)属(colletotrichum spp.)引起的，包括胶孢炭疽菌(colletotrichum gloeosporioides)、尖孢炭疽菌(c.acuta tum)、草莓炭疽菌(c.fragariae)和暹罗炭疽菌(c.siamense)等。除了可侵染草莓，还可侵染葡萄、苹果、辣椒、芒果、柑橘、桃、梨和大豆等植物。草莓炭疽病发生时，草莓叶片、叶柄、托叶、匍匐茎、花瓣和果实均可受害。该病危害性大、毁灭性强，一般造成草莓减产25％-30％，严重时达80％，甚至毁灭性损失。草莓炭疽病是制约中国草莓产业的第三大病害。

4、现有技术中草莓灰霉病和炭疽病的防治主要是依赖嘧啶胺类、酰胺类、吡啶胺类、二甲酰亚胺类、三唑类和吡咯类等化学药剂，但大量使用化学药剂导致病原菌抗药性不断增强，其防治效果大大下降，并且给生态环境和食品安全带来极大威胁，危及人类健康，不利于我国绿色农业的可持续性发展。

5、因而，迫切需要一种高效、低毒的灰霉病和炭疽病防治措施。植物内生真菌栖息于无症状的宿主植物组织内，是影响植物生长、营养和健康的关键因素之一，可以帮助植物获得营养物质，抑制植物病原菌以及抵抗生物和非生物胁迫。由于植物内生真菌来源于植物，对植物安全、对环境友好且不易产生抗药性，能够克服化学农药防治的弊端，因此，植物内生真菌是促进有绿色农业可持续性发展的新型化合物的来源。

6、综上所述，现有技术还缺少一种预防草莓灰霉病和炭疽病的绿色、高效的生防菌。

技术实现思路

1、针对上述存在的问题，本发明提供了防治草莓灰霉病和炭疽病的生防菌黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16、生防菌剂及其制备方法和应用。

2、本发明采用下述技术方案：

3、第一方面，本发明提供了一种防治草莓灰霉病和炭疽病的生防菌，所述生防菌为黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no.40490。

4、黄暗青霉jsnl-b16，分类命名为penicillium citreonigrum，已于2023年1月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称cgmcc)登记保藏，保藏编号为cgmcc no.40490，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

5、经过筛选鉴定，黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16基因组组dna的its基因序列为seq id no.1，bena基因序列为seq id no.2。

6、第二方面，本发明提供了一种防治草莓灰霉病和草莓炭疽病的生防菌剂，所述生防菌剂包括黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16的菌丝或分生孢子、或黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16的发酵产物。

7、第三方面，本发明还提供了一种第二方面所述的生防菌剂的制备方法，所述制备方法采用以下任一步骤，

8、1)将保藏号为cgmcc no.40490的黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16接种于pda培养基培养制得；或

9、2)将保藏号为cgmcc no.40490的黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16菌丝块接种至pdb液体培养基中发酵培养制得。

10、进一步地，所述发酵条件为，在22-26℃中，150-180rpm条件下黑暗培养4-6d。

11、第四方面，本发明还提供了第一方面所述的生防菌或第二方面所述的生防菌剂在防治草莓灰霉病和草莓炭疽病中的应用。

12、进一步地，所述草莓灰霉病由b.cinerea引起，所述草莓炭疽病由c.siamens引起。

13、第五方面，本发明还提供了一种草莓灰霉病和炭疽病的防治方法，所述防治方法包括向植物生长环境中施用第一方面所述的生防菌或第二方面所述的生防菌剂。

14、与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：

15、1)本发明提供的生防菌黄暗青霉jsnl-b16与b.cinerea和c.siamense均有很好拮抗活性，对于b.cinerea菌株的抑制率达到了66.85％，对于c.siamense菌株的抑制率达到了51.24％，同时，菌株jsnl-b16分泌的胞外代谢物对b.cinerea和c.siamense均有抑制效果。

16、2)本发明提供的生防菌黄暗青霉jsnl-b16显著降低草莓灰霉病和炭疽病的病害严重度，其根长、株高、鲜重等指标增加，对草莓植株存在促生作用。

17、3)本发明提供的生防菌黄暗青霉jsnl-b16能够诱导草莓对b.cinerea和c.siamense产生抗性。

技术特征：

1.一种防治草莓灰霉病和炭疽病的生防菌，其特征在于，所述生防菌为黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmcc no.40490。

2.一种防治草莓灰霉病和草莓炭疽病的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂包括黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16的菌丝或分生孢子、或黄暗青霉(penicillium citreonigrum)jsnl-b16的发酵产物。

3.一种权利要求2所述的生防菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法采用以下任一，

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述发酵条件为，在22-26℃中，150-180rpm条件下黑暗培养4-6d。

5.权利要求1所述的生防菌或权利要求2所述的生防菌剂在防治草莓灰霉病和草莓炭疽病中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述草莓灰霉病由b.cinerea引起，所述草莓炭疽病由c.siamens引起。

7.一种草莓灰霉病和炭疽病的防治方法，其特征在于，所述防治方法包括向植物生长环境中施用权利要求1所述的生防菌或权利要求2所述的生防菌剂。

技术总结
本发明属于草莓生防技术领域，公开了生防菌黄暗青霉(Penicilliumcitreonigrum)JSNL‑B16、生防菌剂及其制备方法和应用。本发明鉴定的生防菌命名为黄暗青霉(Penicillium citreonigrum)JSNL‑B16，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40490。本发明提供的生防菌黄暗青霉JSNL‑B16对B.cinerea和C.siamense均有很好拮抗活性，对于B.cinerea菌株的抑制率达到了66.85％，对于C.siamense菌株的抑制率达到了51.24％，同时，菌株JSNL‑B16分泌的胞外代谢物对B.cinerea和C.siamense均有抑制效果。此外，本发明提供的生防菌黄暗青霉JSNL‑B16显著降低草莓灰霉病和炭疽病的病害严重度，草莓的根长、株高、鲜重等指标均有增加，该生防菌对草莓植株存在促生作用，还能够诱导草莓对B.cinerea和C.siamense产生抗性。

技术研发人员：李文婷,张旭,万双粉,杨洪俊,陈沫含,颜志明,吴美玲,沈湘琦,顾嘉琪,韩明轩,戴鑫
受保护的技术使用者：江苏农林职业技术学院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/22