本申请涉及分子生物学检测领域,特别涉及到一种检测mei1基因突变的核酸产品、试剂盒及应用。
背景技术:
1、临床上通常按照精液常规检查等结果,将男性不育分为无精子症,判断标准为精子浓度为0个精子/ml;少精子症,判断标准为精子浓度小于1500万个精子/ml;弱/畸形精子症,判断标准为精子浓度正常,精子活动力小于40%或者畸形精子超过96%;以及后两种同时存在的情况,即少弱/畸形精子症。
2、无精子症包括梗阻性无精子症和非梗阻性无精子症,其中非梗阻性无精子症(noa),由于睾丸生精障碍导致无法产生精子,是男性不育最严重的形式。noa的原因很复杂,医源性损伤、盆腔手术史、感染史、放化疗治疗史、以及其他有害物质暴露等都可能导致noa;剩余患者为原因不明,通常称为特发性noa。研究表明,遗传缺陷突变可能是特发性noa的潜在病因。目前公认的特发性noa的遗传缺陷包括染色体异常和y染色体azf区域微缺失,其中染色体异常主要为克氏综合征,常见的核型是47,xxy,但该两项遗传缺陷仍然不能解释所有特发性noa患者的遗传病因。近年来随着分子诊断技术的发展及其在特发性noa患者中的应用,已经陆续发现一些noa的致病基因。但是,这些基因仅能解释部分患者的原因,相当多患者的原因依然未知。
3、因此,寻找新的致病基因并开发能对男性不育症的致病基因进行高效准确检出的相关技术和产品具有重要意义。
技术实现思路
1、本申请研究发现,人类mei1基因位于22号染色体22q13区域,转录本nm_152513.3全长4016bp,包含31个外显子,编码1个含有1274个氨基酸的蛋白质,前期在多名特发性noa和男性不育患者中发现在mei1基因的多个不同外显子上存在致病性突变,携带该基因突变的患者无法通过显微取精获得精子,进而无法通过辅助生殖生育孩子。基于此,有必要提供一种特异性高且灵敏度强的检测mei1基因突变的核酸产品、试剂盒及应用。
2、本申请第一方面,提供一种用于检测mei1基因突变的核酸产品,所述核酸产品包括序列如下所示的27对引物对中的一对或多对:seq id no:1~2、seq id no:3~4、seq idno:5~6、seq id no:7~8、seq id no:9~10、seq id no:11~12、seq id no:13~14、seqid no:15~16、seq id no:17~18、seq id no:19~20、seq id no:21~22、seq id no:23~24、seq id no:25~26、seq id no:27~28、seq id no:29~30、seq id no:31~32、seqid no:33~34、seq id no:35~36、seq id no:37~38、seq id no:39~40、seq id no:41~42、seq id no:43~44、seq id no:45~46、seq id no:47~48、seq id no:49~50、seqid no:51~52、seq id no:53~54。
3、在其中一个实施例中,所述核酸产品包括seq id no:1~seq id no:54所示的27对引物对。
4、本申请第二方面,提供一种上述核酸产品在制备非梗阻性无精子症的检测试剂盒中的应用。
5、本申请第三方方面,提供一种用于检测非梗阻性无精子症的试剂盒,所述试剂盒包括上述的核酸产品。
6、在其中一些实施例中,所述试剂盒还包括pcr反应试剂。
7、在其中一些实施例中,所述pcr反应试剂包括pcr缓冲液、dna聚合酶、镁离子和dntps中的至少一种或多种。
8、在其中一些实施例中,所述试剂盒还包括dna提取试剂。
9、本申请第四方面,提供一种检测mei1基因突变的方法,其特征在于,包括以下步骤:
10、以待测样本的dna为模板,使用上述的核酸产品进行pcr扩增反应,得到扩增产物;及对所述扩增产物进行分析,以确定所述mei1基因的突变情况。
11、在其中一些实施例中,进行扩增时,上述核酸产品的浓度均为1μmol/l~10μmol/l。
12、在其中一些实施例中,所述待测样本的dna为外周血基因组dna、精液dna、口腔粘膜细胞dna或细胞全基因组扩增产物。
1.一种用于检测mei1基因突变的核酸产品,其特征在于,所述核酸产品包括序列如下所示的27对引物对中的一对或多对:seq id no:1~2、seq id no:3~4、seq id no:5~6、seq id no:7~8、seq id no:9~10、seq id no:11~12、seq id no:13~14、seq id no:15~16、seq id no:17~18、seq id no:19~20、seq id no:21~22、seq id no:23~24、seqid no:25~26、seq id no:27~28、seq id no:29~30、seq id no:31~32、seq id no:33~34、seq id no:35~36、seq id no:37~38、seq id no:39~40、seq id no:41~42、seqid no:43~44、seq id no:45~46、seq id no:47~48、seq id no:49~50、seq id no:51~52、seq id no:53~54。
2.根据权利要求1所述的用于检测mei1基因突变的核酸产品,其特征在于,所述核酸产品包括seq id no:1~seq id no:54所示的27对引物对。
3.权利要求1或2所述核酸产品在制备非梗阻性无精子症的检测试剂盒中的应用。
4.一种用于检测非梗阻性无精子症的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1~2任一项所述的核酸产品。
5.根据权利要求4所述的用于检测非梗阻性无精子症的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括pcr反应试剂。
6.根据权利要求5所述的用于检测非梗阻性无精子症的试剂盒,其特征在于,所述pcr反应试剂包括pcr缓冲液、dna聚合酶、镁离子和dntps中的至少一种或多种。
7.根据权利要求4~6任一项所述的用于检测非梗阻性无精子症的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括dna提取试剂。
8.一种检测mei1基因突变的方法,其特征在于,包括以下步骤:
9.根据权利要求8所述的检测mei1基因突变的方法,其特征在于,进行扩增时,上述核酸产品的浓度均为1μmol/l~10μmol/l。
10.根据权利要求8~9任一项所述的检测mei1基因突变的方法,其特征在于,所述待测样本的dna为外周血基因组dna、精液dna、口腔粘膜细胞dna或细胞全基因组扩增产物。