一种AUY922诱导视网膜退行性病变模型制备方法与流程

本发明涉及模型制备，具体为一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法。

背景技术：

1、视网膜退行性病变(rd)是一组以视网膜色素上皮(rpe)损伤和光感受器变性为特征的多基因致盲性遗传病，其致病机制复杂，发病原因、病理机制等尚未完全清楚；随着对rd致病机制和治疗策略研究的不断加深，需要新的疾病诱导模型。

2、目前的rd模型分为动物模型和细胞模型，动物模型的造模方式一般分为玻璃体腔内注射、腹腔注射、静脉注射三种途径，由于视网膜细胞的生长发育的基本机制在大多数动物中都高度保守，从低等动物果蝇、小鼠到高等动物猫、狗、猪等都具有与视网膜变性相似的表征，被作为研究用于视网膜变性的模型；细胞模型主要研究光感受器细胞(661w)、视网膜色素上皮细胞(rpe)及小胶质细胞。近些年来随着转基因技术的飞速进展，转基因动物也逐渐用于实验，通常为携带某种视网膜变性的目的基因过表达或缺失从而表现出视网膜变性的表征。

3、在视网膜变性的相关研究中，rd小鼠是目前最常用的动物模型，这是由于pde6b基因的突变,视杆细胞外界cgmp磷酸二酯酶(pde)的缺乏导致cgmp的聚集，最终导致光感受器细胞变性,视杆细胞在4周时消失殆尽而产生的。英国皇家外科学院种系鼠中rcs小鼠是另一种rd的常用模型。这种小鼠是由于基因缺陷导致的rpe细胞不能正常吞噬感光细胞外节，盘膜碎屑积聚rpe层和感光细胞层，从而使感光细胞死亡，还有视紫红质基因敲除小鼠(pho-/﹣)的视杆细胞外节发育不完善导致的视网膜细胞变性。由于基因工程造价昂贵、自然突变的模型可获得性少，因此我们迫切的需要一种经济实用、可重复性高、稳定性高的模型，因此提出一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法。

技术实现思路

1、(一)解决的技术问题

2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，解决了现有基因工程造价昂贵、自然突变的模型可获得性少，经济实用、可重复性高、稳定性高的模型难获取的问题。

3、(二)技术方案

4、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

5、一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，包括以下步骤：

6、s1：选定细胞类型，细胞类型选用小鼠光感受器细胞；

7、s2：细胞培养，使用高糖培养基dmem和10％fbs，在恒温培养箱中以5％co2条件下培养，当细胞长至铺满培养瓶底65-80％时再消化传代，用胰酶消化液将细胞数调整至5*106cells/ml；

8、s3：溶解，将auy922用二甲基亚砜(dmso)溶解；

9、s4：分组，采用药物auy922，用高糖培养基dmem和10％fbs分别配置为20nmol/l,50nmol/l，100nmol/l，500nmol/l，1μmol/l浓度的溶液，培养细胞，空白对照组使用高糖培养基dmem+10％fbs进行对照；

10、s5：检测，检测auy922是否对细胞具有损伤作用，得到模型。

11、进一步的，所述s1中小鼠光感受器细胞为661w。

12、在前述的基础上，所述s2中细胞培养时温度为33-40℃，饱和湿度条件下培养。

13、作为本发明的进一步方案，所述s2中培养液更换频率为1～2d一次。

14、进一步的，所述s4中培养细胞的时间为22-28小时。

15、(三)有益效果

16、与现有技术相比，本发明提供了一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，具备以下有益效果：

17、本发明普适性强，且工艺简单，通过选定易获取的细胞类型，然后培养时条件也比较宽松，使得模型的培养更加经济使用、可重复性高、而且经过多种方式验证检测，稳定性高，有相当的工业化优势。

技术特征：

1.一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，其特征在于，所述s1中小鼠光感受器细胞为661w。

3.根据权利要求1所述的一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，其特征在于，所述s2中细胞培养时温度为33-40℃，饱和湿度条件下培养。

4.根据权利要求2所述的一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，其特征在于，所述s2中培养液更换频率为1～2d一次。

5.根据权利要求1所述的一种auy922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，其特征在于，所述s4中培养细胞的时间为22-28小时。

技术总结
本发明涉及模型制备技术领域，且公开了一种AUY922诱导视网膜退行性病变模型制备方法，包括以下步骤：S1：选定细胞类型，细胞类型选用小鼠光感受器细胞；S2：细胞培养，使用高糖培养基DMEM和10％FBS，在恒温培养箱中以5％CO2条件下培养，当细胞长至铺满培养瓶底65‑80％时再消化传代，用胰酶消化液将细胞数调整至5*10<supgt;6</supgt;cells/mL；S3：溶解，将AUY922用二甲基亚砜溶解；S4：分组。本普适性强，且工艺简单，通过选定易获取的细胞类型，然后培养时条件也比较宽松，使得模型的培养更加经济使用、可重复性高、而且经过多种方式验证检测，稳定性高，有相当的工业化优势。

技术研发人员：陶冶,王可心,赵娜,李思雨,魏冬,普宁,刘亚爽,王刚
受保护的技术使用者：河南省立眼科医院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/22