一种抗人碱性磷酸酶单克隆抗体及其在免疫类诊断试剂阻断剂制备中的应用的制作方法

本发明属于抗体，具体涉及一种抗人碱性磷酸酶单克隆抗体及其在免疫类诊断试剂阻断剂制备中的应用。

背景技术：

1、基于碱性磷酸酶为标记物的免疫类诊断试剂在临床应用中具有广泛的价值，但多种非特异性干扰因素会影响其准确性。其中，人血液中的碱性磷酸酶是一个重要的干扰因素，因为该干扰物同样具备底物催化能力，从而造成假性升高的信号。为了解决这一问题，开发一种能够特异性阻断内源性碱性磷酸酶活性而不影响标记物碱性磷酸酶活性的阻断剂是当前研究的重点。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种抗人碱性磷酸酶单克隆抗体及其在免疫类诊断试剂阻断剂制备中的应用。本发明提供的抗人碱性磷酸酶单克隆抗体能够与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合，而同牛小肠来源碱性磷酸酶无结合，可作为免疫类诊断试剂的特异性阻断剂。

2、本发明提供了一种与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合的单克隆抗体，所述单克隆抗体fab段抗原结合部位的轻链可变区包括cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，所述单克隆抗体fab段抗原结合部位的重链可变区包括cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；所述cdr-l1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述cdr-l2的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述cdr-l3的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述cdr-h1的氨基酸序列如seq id no.4所示，所述cdr-h2的氨基酸序列如seq id no.5所示，所述cdr-h3的氨基酸序列如seq id no.6所示。

3、优选的是，所述单克隆抗体还包括轻链可变区框架区fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4，以及重链可变区框架区fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4；所述fr-l1的氨基酸序列如seq idno.7所示，所述fr-l2的氨基酸序列如seq id no.8所示，所述fr-l3的氨基酸序列如seq idno.9所示，所述fr-l4的氨基酸序列如seq id no.10所示，所述fr-h1的氨基酸序列如seqid no.11所示，所述fr-h2的氨基酸序列如seq id no.12所示，所述fr-h3的氨基酸序列如seq id no.13所示，所述fr-h4的氨基酸序列如seq id no.14所示。

4、优选的是，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

5、优选的是，所述单克隆抗体还包括抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区的全部或者部分。

6、本发明还提供了一种核酸分子，所述核酸分子为编码上述技术方案所述单克隆抗体的核酸分子。

7、本发明还提供了一种载体，所述载体包括上述技术方案所述的核酸分子。

8、本发明还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括上述技术方案所述的核酸分子或上述技术方案所述的载体。

9、本发明还提供了一种试剂盒，包含上述技术方案所述的单克隆抗体、或基于上述技术方案所述的核酸分子、上述技术方案所述的载体或上述技术方案所述的宿主细胞制备得到的单克隆抗体，以及检测中可接受的助剂。

10、本发明还提供了上述技术方案所述单克隆抗体或基于上述技术方案所述的核酸分子、上述技术方案所述的载体或上述技术方案所述的宿主细胞制备得到的单克隆抗体在制备免疫类诊断试剂的特异性阻断剂中的应用；所述免疫类诊断试剂包括基于碱性磷酸酶标记物类免疫类诊断试剂。

11、本发明还提供了一种免疫原在制备与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合的单克隆抗体中的应用，所述免疫原的氨基酸序列如seq id no.17所示。

12、本发明提供了一种抗人碱性磷酸酶单克隆抗体及其在免疫类诊断试剂阻断剂制备中的应用。本发明提供的抗人碱性磷酸酶单克隆抗体能够与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合，而同牛小肠来源碱性磷酸酶无结合，可作为免疫类诊断试剂的特异性阻断剂。具体的，本发明所述单克隆抗体具有以下有益效果：

13、1）特异性高：本发明的抗人碱性磷酸酶抗体特异性识别人内源性碱性磷酸酶，而同小牛肠来源的碱性磷酸酶没有结合，在达到阻断效果的同时，不影响试剂酶标记物的活性。

14、2）应用广泛：本发明的抗人碱性磷酸酶抗体可广泛应用于各种基于碱性磷酸酶偶联的免疫类诊断试剂中，为临床诊断提供更加准确的结果。

15、3）制备简便：本发明的制备方法简单易行，可实现大规模生产，为实际应用提供充足的阻断剂来源。

技术特征：

1.一种与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体fab段抗原结合部位的轻链可变区包括cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，所述单克隆抗体fab段抗原结合部位的重链可变区包括cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3；所述cdr-l1的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述cdr-l2的氨基酸序列如seq id no.2所示，所述cdr-l3的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述cdr-h1的氨基酸序列如seq id no.4所示，所述cdr-h2的氨基酸序列如seq id no.5所示，所述cdr-h3的氨基酸序列如seq id no.6所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体还包括轻链可变区框架区fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4，以及重链可变区框架区fr-h1、fr-h2、fr-h3和fr-h4；所述fr-l1的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述fr-l2的氨基酸序列如seq id no.8所示，所述fr-l3的氨基酸序列如seq id no.9所示，所述fr-l4的氨基酸序列如seq id no.10所示，所述fr-h1的氨基酸序列如seq id no.11所示，所述fr-h2的氨基酸序列如seq idno.12所示，所述fr-h3的氨基酸序列如seq id no.13所示，所述fr-h4的氨基酸序列如seqid no.14所示。

3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.15所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no.16所示。

4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体还包括抗体重链恒定区和/或抗体轻链恒定区的全部或者部分。

5.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为编码权利要求1~4任一项所述单克隆抗体的核酸分子。

6.一种载体，其特征在于，所述载体包括权利要求5所述的核酸分子。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求5所述的核酸分子或权利要求6所述的载体。

8.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1~4任一项所述的单克隆抗体、或基于权利要求5所述的核酸分子、权利要求6所述的载体或权利要求7所述的宿主细胞制备得到的单克隆抗体，以及检测中可接受的助剂。

9.权利要求1~4任一项所述单克隆抗体或基于权利要求5所述的核酸分子、权利要求6所述的载体或权利要求7所述的宿主细胞制备得到的单克隆抗体在制备免疫类诊断试剂的特异性阻断剂中的应用；所述免疫类诊断试剂包括基于碱性磷酸酶标记物类免疫类诊断试剂。

10.一种免疫原在制备与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合的单克隆抗体中的应用，所述免疫原的氨基酸序列如seq id no.17所示。

技术总结
本发明属于抗体技术领域，涉及一种抗人碱性磷酸酶单克隆抗体及其在免疫类诊断试剂阻断剂制备中的应用。本发明提供了一种与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合的单克隆抗体，所述单克隆抗体Fab段抗原结合部位的轻链可变区包括CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3，所述单克隆抗体Fab段抗原结合部位的重链可变区包括CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3。本发明提供的抗人碱性磷酸酶单克隆抗体能够与人血液中内源性碱性磷酸酶特异性结合，而同牛小肠来源碱性磷酸酶无结合，可作为免疫类诊断试剂的特异性阻断剂。

技术研发人员：周裕军,周建平,许秀丽,王艳新,常缘荣
受保护的技术使用者：北京德奥平生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/12