利用仙茅制备仙茅苷和石蒜碱的方法

文档序号:39919640发布日期:2024-11-08 20:11阅读:76来源:国知局
利用仙茅制备仙茅苷和石蒜碱的方法

本发明涉及一种利用仙茅制备仙茅苷和石蒜碱的工艺技术,属于天然产物分离。


背景技术:

1、仙茅为石蒜科植物,在传统医学中,仙茅是常用的壮阳药物,对性功能的作用较突出。它能使精液分泌亢进,精囊充满后,刺激感觉神经,间接兴奋性欲;还对精子的运动能力有促进作用,对其膜功能有显著改善作用,故有益于治疗男性不育并可能有助于提高人工授精的成功率。有学者对仙茅化学成分研究表明,含有较高的微量元素,如锌、锰等元素,也有大量石蒜碱等生物碱,还含有抗肿瘤、抗衰老、抗炎、抗骨质疏松的多糖,仙茅苷能促进巨噬细胞的增生能力和吞噬作用,提高机体的免疫功,为仙茅中的有效成分之一,含量约为0.32~0.46%。

2、公开号为cn101342274的中国专利公开了一种仙茅提取物的制备方法,包括如下步骤:(1)仙茅药材粉碎,加6~12倍水,浸泡2小时,煎煮3~4次,每次煎煮1~2小时,过滤,合并提取过滤液,减压浓缩至相对密度为1.05~1.2,加入乙醇,搅拌,至乙醇浓度为60%~90%,静置1~12小时,过滤乙醇溶液,少量乙醇洗涤滤渣,弃掉滤渣,滤液浓缩至无乙醇,备用;(2)选用树脂为非极性~中极性的大孔树脂的一种或和聚酰胺树脂的组合,上样,水洗脱3~6倍柱体积,10%~70%的乙醇溶液洗脱,分段接收,洗脱体积为3~15倍柱体积,富含仙茅苷者浓缩至无乙醇,备用;(3)树脂分离浓缩液加乙酸乙酯萃取,1:1(vv)萃取3~5次,合并萃取液,浓缩至干;(4)萃取干燥品溶解于无水乙醇中,浓缩,冷却,静置,析出针状自色晶体仙茅苷,过滤,低温减压干燥,重结晶,即得。

3、公开号为cn102344471a的中国专利公开了一种仙茅苷的提取方法,其特征在于包括以下几个步骤:1)超声提取:取干燥的仙茅叶粉碎,加10-20倍量甲醇,超声提取30min,过滤,提取液浓缩至无醇味,得提取浓缩液;2)聚酰胺层析:将提取浓缩液上样至聚酰胺树脂柱,用3-4倍柱体积的水洗脱杂质,1-2倍柱体积的30%乙醇洗脱杂质,弃洗脱液,用2-3倍柱体积40-50%乙醇洗脱仙茅苷,浓缩至无醇味,得层析浓缩液;3)萃取:将层析浓缩液用正丁醇萃取2-3次,合并正丁醇萃取液,浓缩为浸膏;4)结晶:将浸膏溶于无水乙醇中,浓缩冷却,静置结晶,重结晶,即得产品。

4、公开号为cn104592322a的中国专利公开了一种从仙茅属植物中提取分离仙茅苷的生产方法,主要步骤为乙酸乙酯提取、回收溶剂得粗膏,水溶、乙酸乙酯逆流萃取、层析、重结晶、干燥包装。本发明利用仙茅中各化学成分的特点,首先利用乙酸乙酯提取,提取分离出仙茅苷,其中乙酸乙酯提取后的残渣可以用来生产多糖、淀粉、饮用酒等,提高仙茅资源的利用率,本发明工艺合理、能耗少、成本低,安全环保。

5、公开号为cn105954387a的中国专利公开了一种仙茅中仙茅苷的测定方法,包括以下步骤:步骤1:将仙茅粉碎后采用ase萃取法萃取得到萃取液;步骤2:将萃取液稀释、离心、过滤后,得到上清液;步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析,色谱柱为c18(3mm×100mm,3μm),仙茅苷的检测条件:流动相为甲醇-0.1%磷酸(19:81,v/v)、检测波长为285nm、流速为0.5ml/min、柱温40℃、进样量为20μl。

6、公开号为cn107970325a的中国专利公开了一种使仙茅增苷增效的炮制新工艺。这种增苷增效的仙茅炮制新工艺,称取以质量计的净选、除去虫蛀和霉变品的生仙茅片,加入制吴茱萸汁,闷润1-3h,置于炒制容器内,用文火加热,炒干,取出晾凉,得萸仙茅饮片成品。该法通过多批次实验室放大试验证明,饮片质量稳定,安全可靠,经含量测定,萸仙茅较生仙茅及传统酒仙茅仙茅苷和苔黑酚葡萄糖苷增加,能更好的起到“增苷”的目的,萸仙茅在补肾壮阳方面优于生仙茅及传统酒仙茅,更好地起到“增效”的作用。

7、公开号为cn113189256a的中国专利公开了一种从仙茅中提取仙茅苷的方法,由下述步骤组成:(1)提取:取仙茅药材粉碎,加10~15倍量的乙醇溶液,80℃~85℃下加热回流提取2~3次,每次1~2小时,粗滤后得仙茅粗提液;(2)浓缩干燥:将上述过滤后的提取液减压真空浓缩干燥;(3)制备纯化:取干燥后的提取物加入20~30倍量20%~30%乙腈,过0.22μm微孔滤膜后上制备液相;(4)馏分收集:收集仙茅苷馏分;(5)浓缩干燥:将上述收集的馏分减压真空浓缩干燥,温度55-65℃。

8、公开号为cn114588217a的中国专利公开了一种去除仙茅毒性的炮制方法,包括以下步骤:(1)清洗;(2)闷润:将洗净后的仙茅根茎,置于黄酒中闷润;(3)蒸制:将闷润完成的仙茅地下根茎,置于高压蒸锅中蒸制;(4)冷却:将蒸制完成的仙茅地下根茎,冷却至室温;(5)预冻:将冷却后的仙茅地下根茎,置于预冻柜中进行低温冷冻;(6)真空冷冻干燥:预冻完成的仙茅地下根茎,在真空冷冻柜中进行超低温真空干燥;(7)升温:冷冻干燥完成后在冷冻柜内升至室温,本发明采用了现代超高温蒸制技术,一方面可使仙茅药材毒性成分石蒜碱完全失活,另一方面,有蒸制时间缩短,减少了蒸制过程中标志性活性成分仙茅苷的损失。

9、公开号为cn115669489a的中国专利公开了一种促进仙茅苷有效积累的调节剂及调节方法,包括以下步骤:(1)移栽的仙茅苗,于次年6月,仙茅生长初期,用调节剂a灌根,间隔7~10天后,用调节剂b灌根;(2)于8月仙茅生长始盛期,用调节剂c灌根,间隔7~10天后,用调节剂d灌根;(3)于10月仙茅生长末期,用调节剂e灌根,间隔7~10天后再用调节剂e再灌根一次;(4)每年重复步骤(1)~(3),直至采挖;本发明通过采用适宜浓度的脱落酸、水杨酸两种植物生长调节剂以及铜离子和锌离子刺激仙茅植物本身,产生次生代谢产物,同时搭配丙氨酸,可大幅度促进仙茅苷的有效积累,每年可使仙茅苷的有效积累提高至1.6倍以上。

10、上述文献报道了较多的仙茅苷制备方法。也有期刊文献报道相关仙茅苷提取方法,如李宁等《仙茅的化学成分研究》、陈昌祥等《仙茅根茎中的配糖体》采用硅胶层析的方法只能用于定性实验中的成分检测,无法扩大用于生产。张梅等《大孔树脂富集、纯化仙茅总皂苷》研究了总皂苷的提取方法,未能对仙茅苷单一成分进行进一步的提纯。王志伟等《薄层光密度法测定仙茅中仙茅苷的含量》中采用索氏提取法提取仙茅苷,花费时间长,溶剂用量大,且效率不高。而且我们发现制备单一仙茅苷,生产成本较高,会出现大量含有石蒜碱的废水,未发现有同时提取制备高纯度的仙茅苷和石蒜碱的方法。


技术实现思路

1、针对制备仙茅苷,会出现大量含有石蒜碱的废水等问题,本发明采用的技术方案包括:鲜仙茅绞碎、石油醚脱脂、分别用乙醇回流、酸水提取、过滤、调节ph浓缩后低温结晶、分别经柱层析制得仙茅苷、石蒜碱纯品。

2、因此,本发明提供利用仙茅制备仙茅苷和石蒜碱的方法,具体步骤包括:

3、(1)脱脂与醇提:绞碎新鲜仙茅根,加入石油醚在60~70℃下回流提取1~1.5h,去除石油醚液,向罐中继续加入70~80%乙醇溶液进行在70~85℃下回流提取2~3h,过滤得滤液和滤渣,其中加入乙醇溶液的量l与新鲜仙茅根的重量kg比为2~4:1;

4、(2)浓缩:将滤液在60~70℃下减压浓缩至原有体积的1/20~1/40,得浓缩液ⅰ;

5、(3)酸水提取:向滤渣中加入10~100mmol/l盐酸水溶液,80~90℃下回流提取2~3h,过滤得水相,其中加入盐酸水溶液的量l与新鲜仙茅根的重量kg比为1~4:1;

6、(4)调节ph浓缩:将水相用0.5~1mol/l氢氧化钠水溶液调节ph至5.5~6,在80~90℃下进行减压浓缩至原有体积的1/10~1/30,得浓缩液ⅱ;

7、(5)低温结晶:将浓缩液ⅰ和浓缩液ⅱ分别放置在4~8℃冰箱放置过夜,分别6000~8000rpm离心20~30min,所得沉淀和上清液分别合并,得沉淀物和上清液混合液;

8、(6)上柱:将沉淀物加入乙酸乙酯溶解,6000~8000rpm离心10~15min,上清液上大孔树脂柱层析,采用3~5倍柱体积的乙醇溶液进行洗脱,得洗脱液ⅰ;

9、(7)仙茅苷结晶:洗脱液ⅰ在60~70℃下进行减压浓缩至原有体积的1/10~1/30,得浓缩液,4℃冰箱放置过夜,过滤得仙茅苷纯品;

10、(8)石蒜碱结晶:上清液混合液用0.1mol/l氢氧化钠水溶液调节ph至7.5~8,在60~70℃下进行减压浓缩至原有体积的1/5~1/20,得浓缩液,用两倍体积的乙醚萃取1次,4℃冰箱放置过夜,过滤得石蒜碱纯品。

11、上述过滤优选陶瓷膜过滤1次,上述80%乙醇溶液的配制为80ml无水乙醇加入20ml水混合而成。

12、在一个具体实施方案中,步骤(1)中所述加入石油醚的量l与新鲜仙茅根的重量kg比为1~3:1。

13、在一个具体实施方案中,步骤(6)中所述加入乙酸乙酯的量l与沉淀重量kg比为3~5:1。

14、在一个具体实施方案中,步骤(6)中所述大孔树脂的型号为hp-20、nka-9、lx-8、ads-7等型号。

15、在一个具体实施方案中,步骤(6)中所述乙醇溶液是体积比为60~70%乙醇溶液。

16、技术效果

17、1、通过石油醚脱脂与醇提联合处理,有效提高了石蒜碱溶出率,快速使仙茅蛋白变性失活,加速破坏仙茅细胞膜,更提高了浸出速度,大大提高了仙茅资源的利用效率。

18、2、采用酸水溶剂对滤渣(经乙醇提取后其仙茅苷含量比较低)再次高温提取,既有效降低了仙茅苷的水解速度,又能提高石蒜碱的提取率,还能获得少量的仙茅苷。

19、3、通过酸碱调节与结晶技术相结合,使仙茅苷和石蒜碱完全分开,完全避免了柱层析分离纯化的干扰,极大提高了其生产效率和减少了生产设备投资。

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