本发明涉及3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb在制备卡拉胶五糖中的应用，属于卡拉胶寡糖的制备。
背景技术：
1、卡拉胶是一种线性大分子硫酸多糖，是红藻细胞壁的主要成分之一，由二糖单元d-半乳糖（d-galactose，d-gal）和3，6-内醚-d-半乳糖（3,6-anhydro-d-galactose，d-ahg）组成。卡拉胶寡糖的功能活性强，应用广泛，并且不同结构的卡拉胶寡糖活性存在较大差异，与偶数卡拉胶寡糖相比，奇数卡拉胶寡糖在抗炎、抗氧化等方面具有更好的作用效果，所以制备奇数卡拉胶寡糖具有重要意义。
2、在奇数卡拉胶寡糖生成过程中发挥重要作用的是3，6-内醚-半乳糖苷酶，它可以外切偶数卡拉胶寡糖并生成相应的奇数卡拉胶寡糖和d-ahg。现有技术中只表征了7个3，6-内醚-半乳糖苷酶且酶学性质研究不完善，因此，有必要挖掘新型高效的3，6-内醚-半乳糖苷酶，为实现特定结构的奇数卡拉胶寡糖的制备提供工具酶。
技术实现思路
1、针对上述现有技术，本发明提供了3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb在制备卡拉胶五糖中的应用，属于卡拉胶寡糖的制备技术领域。
2、本发明是通过以下技术方案实现的：
3、3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb在制备卡拉胶五糖中的应用，所述3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4、进一步地，具体应用时，以红藻胶寡糖为底物，在3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下，制备得到卡拉胶五糖。
5、进一步地，所述红藻胶寡糖是以κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn降解红藻胶而制备得到的，所述κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn的氨基酸序列如seq id no.3所示。
6、更进一步地，所述红藻胶寡糖是通过以下方法制备得到的：在2 ml反应体系中，向1 ml浓度为1 mg/ml的红藻胶溶液中加入0.5 u的κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和水，35℃反应3h。
7、进一步地，具体应用时，联合κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn，所述κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn的氨基酸序列如seq id no.3所示。具体应用时，以红藻胶为底物，在κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下，制备得到卡拉胶五糖。
8、更进一步地，具体应用时，在2 ml反应体系中，向1 ml浓度为1 mg/ml的红藻胶溶液中加入0.5 u的κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn、0.05 u的3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb和水，35℃反应3 h，制备得到卡拉胶五糖。
9、一种卡拉胶五糖的制备方法，如下：以红藻胶为底物，在κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下，制备得到卡拉胶五糖；所述3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn的氨基酸序列如seq id no.3所示。
10、进一步地，制备方法如下：在2 ml反应体系中，向1 ml浓度为1 mg/ml的红藻胶溶液中加入0.5 u的κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn、0.05 u的3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb和水，35℃反应3 h，制备得到卡拉胶五糖。
11、本发明挖掘到了一种新型的3，6-内醚-半乳糖苷酶——3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb，经研究，惊喜地发现，其可以用于制备特定结构的奇数卡拉胶寡糖——卡拉胶五糖，具体结构为g-（da-g4s）2,即非还原段缺少一个硫酸基团的卡拉胶五糖，且有底物特异性，能够降解非还原段不含硫酸基团的κ-卡拉胶寡糖（即红藻胶寡糖），但不能降解κ-卡拉胶寡糖。在制备卡拉胶五糖时，对底物的浓度要求低，且活性较高。具体应用时，可以同时向红藻胶溶液中加入κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb，在35℃条件下可直接生成卡拉胶五糖和d-ahg，且当反应时间为3 h以上时，寡糖产物为单一的卡拉胶五糖。本发明能够以红藻胶为底物，在3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下制备卡拉胶五糖，填补了奇数卡拉胶寡糖制备的空缺，对工业化制备奇数卡拉胶寡糖具有重要意义。
12、本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。
1.3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb在制备卡拉胶五糖中的应用，其特征在于：所述3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：以红藻胶寡糖为底物，在3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下，制备得到卡拉胶五糖。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述红藻胶寡糖是以κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn降解红藻胶而制备得到的，所述κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn的氨基酸序列如seq idno.3所示。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述红藻胶寡糖是通过以下方法制备得到的：在2 ml反应体系中，向1 ml浓度为1 mg/ml的红藻胶溶液中加入0.5 u的κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和水，35℃反应3 h。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：联合κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn，所述κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn的氨基酸序列如seq id no.3所示。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：以红藻胶为底物，在κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下，制备得到卡拉胶五糖。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：具体应用时，在2 ml反应体系中，向1 ml浓度为1 mg/ml的红藻胶溶液中加入0.5 u的κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn、0.05 u的3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb和水，35℃反应3 h，制备得到卡拉胶五糖。
8.一种卡拉胶五糖的制备方法，其特征在于：以红藻胶为底物，在κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn和3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的作用下，制备得到卡拉胶五糖；所述3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb的氨基酸序列如seq id no.1所示，所述κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn的氨基酸序列如seq id no.3所示。
9.根据权利要求8所述的卡拉胶五糖的制备方法，其特征在于：在2 ml反应体系中，向1ml浓度为1 mg/ml的红藻胶溶液中加入0.5 u的κ-卡拉胶酶ouc-cgka-sn、0.05 u的3，6-内醚-半乳糖苷酶ouc-apdagb和水，35℃反应3 h，制备得到卡拉胶五糖。