本申请涉及对虾分子免疫学的,尤其是涉及一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体及其应用。
背景技术:
1、中国对虾是我国重要的海水养殖经济动物,自1993年对虾白斑症病毒病(whitespot syndrome virus,wssv)爆发以来,该病一直是我国养虾业发展的严重制约因素。因此,研究中国对虾的免疫机理变得尤为迫切和需要。
2、对虾血蓝蛋白(shrimp hemocyanin,shc)是甲壳动物血淋巴的重要组成部分,具有多种生理功能。除了携带氧气外,血蓝蛋白还具有酚氧化物酶活性、抗细菌和抗病毒活性、金属离子转运、蛋白质储存、渗透压调节、蜕皮激素的运输以及参与表皮的固化等作用。因此,甲壳动物血蓝蛋白的研究成为国内外学者关注的热点领域。
3、甲壳动物通过调节血蓝蛋白的浓度和特性来执行各种生理功能。因此,利用抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体可以方便快捷地检测和监测中国对虾体内血蓝蛋白浓度的波动变化规律。
4、目前文献报道的关于抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体主要是通过杂交瘤细胞进行表达,但是杂交瘤细胞表达存在表达不稳定的技术问题。
技术实现思路
1、本申请的目的是为了解决上述的杂交瘤细胞表达的不稳定问题而提供一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体,该抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体可以在哺乳动物细胞expi293中稳定表达,且具有很好的特异性,可以作为抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体检测的阳性内参应用。
2、本申请的技术方案
3、第一方面,本申请提供一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体,所述的抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体为anti-shc-14b3;
4、所述anti-shc-14b3的轻链氨基酸序列如seq id no.3所示,所述anti-shc-14b3的轻链氨基酸序列含有轻链可变区vl和轻链恒定区cl;所述anti-shc-14b3的重链氨基酸序列如seq id no.4所示,所述anti-shc-14b3的重链氨基酸序列含有重链可变区vh和重链恒定区ch1;
5、上述的anti-shc-14b3的轻链可变区的氨基酸序列中的cdr1如seq id no.5所示、cdr2如seq id no.6所示、cdr3如seq id no.7所示;anti-shc-14b3的重链可变区的氨基酸序列中的cdr1如seq id no.8所示、cdr2如seq id no.9所示、cdr3如seq id no.10所示。
6、第二方面,本申请提供一种核酸,所述核酸编码抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3,所述核酸编码anti-shc-14b3的轻链氨基酸序列的核苷酸序列如seq idno.1所示,所述核酸编码anti-shc-14b3的重链氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.2所示。
7、通过采用上述技术方案,所得的抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3的抗原决定簇位于对虾血蓝蛋白分子量为73kda和75kda的两个亚基上,具有很好的特异性。
8、第三方面,本申请提供一种表达抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3的杂交瘤细胞。
9、第四方面,本申请提供一种含有编码上述核酸的重组质粒pcdna3.1。
10、第五方面,本申请提供一种含有重组质粒pcdna3.1的重组大肠杆菌dh5α。
11、第六方面,本申请提供一种含有重组质粒pcdna3.1的重组expi293细胞。
12、第七方面,本申请提供一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体作为阳性内参用于定性判断经中国对虾血蓝蛋白免疫的动物免疫成功与否、或定量检测经中国对虾血蓝蛋白免疫的动物中抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体的含量。
13、本申请的有益技术效果
14、本申请的一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3,可以通过重组expi293细胞稳定表达,且得到的抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体经纯化后纯度≥90%。
15、进一步,本申请的一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3具有很好的特异性,与抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体特异性结合的抗原决定簇位于对虾血蓝蛋白分子量为73kda和75kda的两个亚基上。
16、进一步,本申请的一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3可作为阳性内参用于定性判断经中国对虾血蓝蛋白免疫的动物免疫成功与否、或定量检测经中国对虾血蓝蛋白免疫的动物中抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体的含量。
1.一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体,其特征在于,所述的抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体为anti-shc-14b3;
2.一种核酸,其特征在于,所述核酸编码权利要求1所述的抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体anti-shc-14b3,所述核酸编码anti-shc-14b3的轻链氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.1所示,所述核酸编码anti-shc-14b3的重链氨基酸序列的核苷酸序列如seq idno.2所示。
3.一种含有编码如权利要求2所述核酸的重组质粒pcdna3.1。
4.一种含有如权利要求3所述重组质粒pcdna3.1的重组大肠杆菌dh5α。
5.一种含有如权利要求3所述重组质粒pcdna3.1的重组expi293细胞。
6.如权利要求1所述的一种抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体作为阳性内参用于定性判断经中国对虾血蓝蛋白免疫的动物免疫成功与否、或定量检测经中国对虾血蓝蛋白免疫的动物中抗中国对虾血蓝蛋白的单克隆抗体的含量。