本发明属于细胞工程，具体涉及一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导液和诱导方法。
背景技术：
1、间充质干细胞(mesenchymal stem cells，mscs)是一种具有自我更新和多向分化能力的多能干细胞，存在于骨髓、脐带、脂肪、胎盘等多种组织中。间充质干细胞在心脑血管疾病、脊髓损伤、糖尿病、肝硬化等疾病的临床治疗已取得了较好的治疗结果，间充质干细胞强大的增殖能力、多向分化潜能、免疫调节功能等特征，使其在细胞治疗上具有广阔的临床应用前景。
2、原代间充质干细胞具有来源广、易分离、培养和扩增快的优势，但不同供体、不同组织来源的间充质干细胞生物学效应存在差异，制备过程不容易质控，存在潜在的肿瘤细胞污染风险，这些都影响了原代间充质干细胞的大规模制备及临床应用。因此，来源稳定、均一性高的间充质干细胞将是未来细胞治疗及其临床应用的研究热点。
3、诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell，ipsc)通过导入外源基因，从而诱发已分化的体细胞发生重编程，获取具有干细胞特性并可无限增殖能力的细胞，因此不涉及伦理学问题，且多能干细胞的来源稳定，对实验结果影响小，可以实现工业化制备。但将所述ipsc诱导成mscs还存在一些技术缺陷，比如诱导时间较长且过程繁琐导致批次间差异性大，影响细胞稳定性；诱导效率低导致诱导细胞分化能力和自我更新能力受限；诱导条件优化不足导致成功率较低；诱导细胞在临床治疗中的安全性和有效性还有待评价。因此，需要更多研究来解决上诉问题，优化技术条件，获得高效稳定的诱导间充质干细胞，推动其在转化医学中的应用。
技术实现思路
1、本发明提供了一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导液和诱导方法，诱导得到的间充质干细胞具备成脂、成骨分化的能力，为干细胞治疗提供了新的理想细胞。
2、在本发明中，百分含量均为体积百分含量，如5％～15％fbs指体积百分含量为5％～15％的fbs。
3、本发明提供了一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导液，所述诱导液包括基础培养基和5％～15％fbs，其中所述基础培养基为dmem/l培养基。
4、本发明一种优选方式中，所述诱导液中还包括1％～2％100mm丙酮酸钠溶液、1％～2％100×非必需氨基酸溶液、1％～2％200mm谷氨酰胺细胞培养添加剂和10～25ng/ml成纤维细胞生长因子。
5、本发明一种优选方式中，所述诱导液包括10％fbs；
6、所述诱导液中还包括：1％100mm丙酮酸钠溶液、1％100×非必需氨基酸溶液、1％200mm谷氨酰胺细胞培养添加剂和20ng/ml成纤维细胞生长因子。
7、本发明还提供了利用上述诱导液在将家犬诱导多能干细胞诱导得到间充质干细胞中的应用。
8、本发明还提供了一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导方法，包括以下步骤：将家犬诱导多能干细胞置于低吸附培养板中，扩增形成拟胚体；
9、将所述拟胚体置于明胶包被后的培养板中，利用上述诱导液进行诱导培养，获得间充质干细胞。
10、本发明一种优选方式中，所述扩增所用的培养基包括mtesr完全培养液。
11、本发明一种优选方式中，所述培养板的包被明胶的质量体积百分含量为0.2％。
12、本发明一种优选方式中，将所述拟胚体以5×104细胞布板至所述明胶包被后的培养板中。
13、本发明一种优选方式中，待所述明胶包被后的培养板中细胞贴壁后加入所述诱导液。
14、本发明一种优选方式中，所述诱导液每隔48h换液一次，连续诱导培养14d以上。
15、有益效果：本发明提供了一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导液，所述诱导液以dmem/l培养基为基础培养基，还包括5％～15％fbs。本发明还构建了利用所述诱导液将家犬诱导多能干细胞诱导为间充质干细胞的方法，将家犬诱导多能干细胞置于低吸附培养板中扩增，形成拟胚体，再将其置于明胶包被后的培养板中，更换所述诱导液后诱导得到间充质干细胞。
16、本发明利用诱导多能干细胞获取间充质干细胞，可替换从动物活体取材的方式，避免伦理问题的产生，也能减少实验动物的使用，一定程度上减少了实验成本。本发明所述诱导方法简单，诱导的间充质干细胞具备成脂和成骨分化的能力。
1.一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导液，其特征在于，所述诱导液包括基础培养基和体积百分含量为5％～15％的fbs，其中所述基础培养基为dmem/l培养基。
2.根据权利要求1所述诱导液，其特征在于，所述诱导液中还包括体积百分含量为1％～2％的100mm丙酮酸钠溶液、体积百分含量为1％～2％的100×非必需氨基酸溶液、体积百分含量为1％～2％的200mm谷氨酰胺细胞培养添加剂和10～25ng/ml成纤维细胞生长因子。
3.根据权利要求1或2所述诱导液，其特征在于，所述诱导液包括10％fbs；
4.利用权利要求1～3任一项所述诱导液在将家犬诱导多能干细胞诱导得到间充质干细胞中的应用。
5.一种家犬诱导多能干细胞向间充质干细胞转化的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：将家犬诱导多能干细胞置于低吸附培养板中，扩增形成拟胚体；
6.根据权利要求5所述诱导方法，其特征在于，所述扩增所用的培养基包括mtesr完全培养液。
7.根据权利要求5所述诱导方法，其特征在于，所述培养板的包被明胶的质量体积百分含量为0.2％。
8.根据权利要求7所述诱导方法，其特征在于，将所述拟胚体以5×104细胞布板至所述明胶包被后的培养板中。
9.根据权利要求5或7所述诱导方法，其特征在于，待所述明胶包被后的培养板中细胞贴壁后加入所述诱导液。
10.根据权利要求9所述诱导方法，其特征在于，所述诱导液每隔48h换液一次，连续诱导培养14d以上。