本发明涉及生物药物制备领域，具体涉及一种依柯胰岛素的制备方法。
背景技术：
1、依柯胰岛素，insulin icodec，化学名：人胰岛素n6.29b-[(22s)-22, 42-二羧基-10, 19, 24-三羰基-3, 6, 12, 15-四氧基-9, 18, 23-三氮四十二烷-1-酰基]-[tyr14a >glu, tyr16b > his, phe25b > his]-去thr30b。由丹麦诺和诺德公司研制的重组依柯胰岛素注射液是一种新型长效胰岛素类似物，2024年6月24日，国家药品监督管理局批准诺和诺德的依柯胰岛素注射液上市，这款最新的胰岛素每周只需注射液1次，为全球首款每周只需1针的长效胰岛素制剂，在人体内的半衰期长达196小时，效果相当于一周内每天注射甘精胰岛素100单位。
2、cn117756914a公开了一种依柯胰岛素的制备方法，首先通过生物合成方法制备包含胰岛素前体的固相包涵体，将固相包涵体进行变性、复性、酶切得到胰岛素前体，在所述胰岛素前体的溶液中加入硼酸后，再加入乙腈，并调节ph值，加入侧链活化酯溶液反应得到依柯胰岛素粗品，依柯胰岛素粗品经反相层析、超滤、结晶、冻干得到依柯胰岛素。
3、cn117756914a所公开的制备方法中，胰岛素前体与侧链活化酯的定向转化率低，连接侧链步骤的收率在50-84%，大部分的实施例均未超过80%，连接侧链加上后续纯化、冻干步骤的总收率小于60%。并且，其在反应过程中加入了硼酸，在质量研究和控制阶段，需要对硼酸残留进行控制，增加了操作难度。现有技术存在制备操作繁琐，工业化操作难度大，反应收率和产品纯度低的问题。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中存在的缺点，本发明提供了一种依柯胰岛素的绿色合成方法，该合成方法操作简单、定向转化率高、环境友好、收率高、产品纯度高。
2、本发明的技术方案包括：
3、本发明提供一种依柯胰岛素的制备方法，所述制备方法包括：调节ph至10.0-10.5，将依柯胰岛素主链50aa与侧链在反应溶剂中反应，得到依柯胰岛素，反应如反应式1所示：
4、
5、其中，所述反应溶剂包括水和有机溶剂，所述有机溶剂选自nmp、dmf、异丙醇、甲醇、乙醇、丁二醇中的一种或多种，
6、r是活性酯基团。
7、优选地，所述水和所述有机溶剂的体积比为20：3。
8、优选地，所述反应溶剂为水和异丙醇。
9、优选地，所述r是苯并三唑基团、五氟苯酚基团、邻苯二甲酰亚胺基团、5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺基团、7-偶氮苯并三氮唑基团或苯并吡唑基团。
10、优选地，调节所述ph的试剂包括无机酸和无机碱。
11、更优选地，所述无机碱包括碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的一种或多种，所述无机酸包括盐酸、硫酸、磷酸中的一种或多种。
12、优选地，所述依柯胰岛素主链50aa与所述侧链的摩尔比例为1.0：1.0-1.0：10.0。
13、更优选地，所述依柯胰岛素主链50aa与所述侧链的摩尔比例为1：2.0-1：3.0。
14、优选地，所述制备方法还包括将所述依柯胰岛素进行制备液相色谱纯化的步骤。
15、更优选地，所述制备液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和异丙醇。
16、本发明的有益效果包括：本发明通过对反应溶剂和反应ph值的调控，实现依柯胰岛素主链50aa与侧链反应的定向转化，即侧链主要连接在50aa的b-29赖氨酸上，减少侧链与a1、b1氨基酸的连接，降低了工业化操作难度，大幅度提高了反应收率和产品纯度，使反应总收率不小于85.7%，产品hplc纯度大于99%。且本发明的制备方法不使用硼酸，也不使用乙腈作为分离溶剂，在制药行业，乙腈为二类溶剂，在药物中残留的限度标准远高于作为三类溶剂的醇类，本发明降低了后续处理难度，且对环境友好。
1.一种依柯胰岛素的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：调节ph至10.0-10.5，将依柯胰岛素主链50aa与侧链在反应溶剂中反应，得到依柯胰岛素，反应如反应式1所示：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水和所述有机溶剂的体积比为20：3。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反应溶剂为水和异丙醇。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述r是苯并三唑基团、五氟苯酚基团、邻苯二甲酰亚胺基团、5-降冰片烯-2,3-二甲酰亚胺基团、7-偶氮苯并三氮唑基团或苯并吡唑基团。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，调节所述ph的试剂包括无机酸和无机碱。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述无机碱包括碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的一种或多种，所述无机酸包括盐酸、硫酸、磷酸中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述依柯胰岛素主链50aa与所述侧链的摩尔比例为1.0：1.0-1.0：10.0。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述依柯胰岛素主链50aa与所述侧链的摩尔比例为1：2.0-1：3.0。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括将所述依柯胰岛素进行制备液相色谱纯化的步骤。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述制备液相色谱的流动相为乙酸铵水溶液和异丙醇。