胰高血糖素类似物的制作方法

文档序号:8344142阅读:753来源:国知局
胰高血糖素类似物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及胰高血糖素类似物及其医疗用途,例如在治疗低血糖中的用途。特别 地,本发明涉及适于以液体制剂使用的稳定的胰高血糖素类似物。
【背景技术】
[0002] 人前胰高血糖素原(preproglucagon)是158个氨基酸的前体多肽,其在组织中被 差异性加工而形成多种结构上相关的胰高血糖素原衍生肽,包括胰高血糖素(Glu或GCG)、 胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)、胰高血糖素样肽-2 (GLP-2)和胃泌酸调节素(0XM)。这些分子 参与多种生理功能,包括葡萄糖内稳态、胰岛素分泌、胃排空和肠生长,以及食物摄取调节。
[0003] 天然胰高血糖素是29个氨基酸的肽,其对应于前胰高血糖素原的53至81位氨基 酸。胰高血糖素帮助维持血液中的葡萄糖水平,这通过与肝细胞上的胰高血糖素受体结合 并经由糖原分解而使肝释放以糖原形式储存的葡萄糖来实现。随着这些储存的耗尽,胰高 血糖素还刺激肝通过糖异生合成额外的葡萄糖。这些葡萄糖被释放到血流中,防止发生低 血糖。
[0004] 由于天然胰高血糖素本身相对低的物理和化学稳定性,目前市场上可以得到的主 要在缓解接受了过高剂量胰岛素的糖尿病对象中的急性低血糖的"营救"情形中使用的胰 高血糖素产品以冻干固体制剂形式提供,以用于在临使用前于合适的液体介质中重构。降 血糖对象尤其可能表现出头晕和/或错乱,在一些情况下可能失去意识或部分意识,导致 他们不能进行或完成所需的初始液体重构和随后所讨论葡萄糖制剂的注射。因此,这种重 构和注射可能必须由另一位没有产品处理经验的人在出现过多的胰高血糖素聚集之前有 限的可利用时间内进行。
[0005] 尽管天然胰高血糖素在液体溶液中的稳定类似物是期望的,但是没有市售的任何 这样的胰高血糖素类似物的稳定液体制剂。
[0006] 在此基础上,很明显还强烈需求这样的胰高血糖素类似物,其除了对胰高血糖素 受体具有令人满意的高活性外,在水性液体介质中还充分可溶(尤其是在生理pH下,在此 pH下天然胰高血糖素不可溶)和稳定(物理地和化学地)。这些类似物(i)可有利地以适 合于即时注射的即用型液体药物制剂的形式提供,以及(ii)在使用前可以令人满意地长 时间储存(包括由所讨论的对象或患者储存在环境条件下)。

【发明内容】

[0007] 在一些实施方案中,本发明提供了具有式I的化合物:
[0008] Ri-Z-R2 (I)
[0009] 或者其可药用盐或溶剂合物;
[0010] 其中
[0011] R1是氢、Ch烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基;
[0012] R2是 0H或NH2;以及
[0013] Z是衍生自式la序列的氨基酸序列:
[0014] His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-A rg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (la)
[0015] 并且还包含如下仅在选自2、3、4、9、10、15、16、17、20、21、24、28和29的氨基酸序 列位置(用X表示)处的至少4个氨基酸替换或缺失:
[0016] X2 选自Aib和Ala;
[0017] X3 选自His、Pro、Dab(Ac)、Dap(Ac)和Gin(Me);
[0018] X4 是DAla;
[0019] X9 是Glu;
[0020]X10 选自Val、Leu、N-Me-Tyr和N-Me-DTyr;
[0021] X15 是Glu;
[0022] X16 选自Aib、Lys、Glu、Leu、Val、DVal、Phe、His、Arg、Pro、DPro、N-Me-Ser和 N-Me-DSer;
[0023] X17 选自Ala和Ser;
[0024] X20 选自Glu和Lys;
[0025] X21 选自Glu、Lys和Ser;
[0026] X24 选自Lys、Ser、Glu和Ala;
[0027] X28选自Ser、Glu和Lys,或者不存在;
[0028] X29选自Ser和Ala,或者不存在;
[0029] 前提是Z并非选自:
[0030] HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST;和
[0031] HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST。
[0032] 在一些实施方案中,本发明提供了具有式I的化合物:
[0033] Ri-Z-R2 (I)
[0034] 或者其可药用盐或溶剂合物;
[0035] 其中
[0036] R1是氢、Ch烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基;
[0037] R2是 0H或NH2;以及
[0038] Z是衍生自式la序列的氨基酸序列:
[0039] His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-A rg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Glu-Asn-Thr (la)
[0040] 并且还包含如下仅在选自2、3、9、10、15、16、17、20、21、24、28和29的氨基酸序列 位置处的至少4个氨基酸替换或缺失:
[0041] X2 选自Aib和Ala;
[0042] X3 选自His和Pro,;
[0043] X9 是Glu;
[0044] X10 选自N-Me-Tyr和N-Me-DTyr;
[0045] X15 是Glu;
[0046] X16 选自Aib、Lys、Glu、Leu、Val、DVal、Phe、His、Arg、Pro、DPro、N-Me-Ser和 N-Me-DSer;
[0047] X17 选自Ala和Ser;
[0048] X20 选自Glu和Lys;
[0049] X21 选自Glu、Lys和Ser;
[0050] X24 选自Lys、Ser、Glu和Ala;
[0051] X28选自Ser和Lys,或者不存在;
[0052] X29选自Ser和Ala,或者不存在;
[0053] 前提是Z并非选自:
[0054] HSQGTFTSDYSKYLDSARAEDFVKWLEST;和
[0055] HSQGTFTSDYSKYLESRRAKEFVEWLEST。
[0056] 在一些实施方案中,在选自式I化合物之2、3、4、9、10、15、16、17、20、21、24、28和 29的氨基酸序列位置(用X表示)处的至少4个氨基酸的替换或缺失如下:
[0057] X2 选自Aib和Ala;
[0058]X3 选自His和Pro、Dab(Ac)、Dap(Ac)和Gin(Me);
[0059] X4 是DAla;
[0060] X9 是Glu;
[0061]X10 选自Val、Leu、N-Me-Tyr和N-Me-DTyr;
[0062] X15 是Glu;
[0063] X16 选自Aib、Lys、Glu、Leu、Val、Phe、His和Arg;
[0064] X17 选自Ala和Ser;
[0065] X20 选自Glu和Lys;
[0066] X21 选自Glu、Lys和Ser;
[0067] X24 选自Lys、Ser、Glu和Ala;
[0068] X28选自Ser、Glu和Lys,或者不存在;
[0069] X29选自Ser和Ala,或者不存在。
[0070] 在一些实施方案中,至少4个氨基酸的替换或缺失在选自式I化合物之2、3、4、10、 15、16、17、20、21、24、28和29的氨基酸序列位置(用X表示)处,并且如下:
[0071] X2 是Ala;
[0072] X3 是Dab(Ac)、Dap(Ac)和Gin(Me);
[0073] X4 是DAla;
[0074] X10 选自Leu和Val;
[0075] X15 是Glu;
[0076] X16 选自Aib、Lys、Glu、Leu和Val;
[0077] X17 是Ala;
[0078] X20 选自Glu和Lys;
[0079] X21 选自Glu和Ser;
[0080] X24 选自Lys、Ser和Glu;
[0081] X28 选自Ser、Glu和Lys;
[0082] X29是Ala,或者不存在。
[0083] 在一些实施方案中,至少4个氨基酸的替换或缺失在选自式I化合物之2、3、4、16、 17、20、21、24、28和29的氨基酸序列位置(用X表示)处,并且如下:
[0084] X2 是Ala;
[0085]X3 是Dab(Ac)、Dap(Ac)、Gin(Me)或His;
[0086] X4 是DAla;
[0087] X16 选自Aib、Lys、Glu;
[0088] X17 是Ala;
[0089] X20 选自Glu和Lys;
[0090] X21 选自Glu和Ser;
[0091] X24 选自Lys、Ser和Glu;
[0092] X28 选自Ser、Glu和Lys;
[0093] X29是Ala,或者不存在。
[0094] 应理解的是,任何一个所述分子都与式la的序列具有至少4个差异,这些差异可 以是所提供限定内允许的至少4个替换和缺失的任意组合。
[0095] 与式la的氨基酸序列相比,肽序列Z可具有最多4个替换和缺失(考虑了组合), 最多5个替换和缺失,最多6个替换和缺失,最多7个替换和缺失,最多8个替换和缺失,最 多9个替换和缺失,最多10个替换和缺失,最多11个替换和缺失,最多12个替换和缺失或 最多13个替换和缺失。
[0096] 例如,化合物可具有4至11个替换和缺失,6至11个替换和缺失,4至9个替换和 缺失,或6至9个替换和缺失。
[0097] 本发明化合物具有胰高血糖素激动剂活性。
[0098] 与天然胰高血糖素相比,本发明化合物具有提高的溶解度和/或稳定性。
[0099]提高的溶解度可以包括或者是在pH4 (例如,在lOOmMpH4的醋酸盐缓冲液中)、 pH5(例如,在lOOmMpH5的醋酸盐缓冲液中)、pH6(例如,在lOOmMpH6的磷酸盐缓冲液 中)、pH7(例如,在lOOmMpH7的磷酸盐缓冲液中)和/或pH7. 5(例如,在lOOmMpH7. 5 的磷酸盐缓冲液中)下与天然胰高血糖素相比提高的溶解度。可以在实施例4中给出的条 件下进行测定。可以期望溶解度多lmg/ml。
[0100] 提尚的稳定性可以包括或者是与天然人膜尚血糖素相比提尚的物理稳定性和/ 或提高的化学稳定性。
[0101] 提高的物理稳定性可以包括或者是聚集例如形成可溶性或不溶性聚集体(例如, 原纤维)的趋势降低。可以在例如pH7.5和40°C下以溶解肽lmg/ml的起始浓度测定聚集 (例如,原纤维形成)。可使用任何合适的时间段,例如,24小时、48小时或96小时。可以 在实施例5给出的条件下测定聚集,同时进行搅拌或不进行搅拌。
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