一株从腐烂秸秆中筛选获得的米根霉菌株jhsw01的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株从腐烂秸杆中筛选获得的米根霉菌株 JHSff01〇
【背景技术】
[0002] 农作物秸杆是地球上第一大可再生资源，我国拥有量居世界首位。全国每年产生 的大约6亿多吨农作物秸杆中，通过机械化还田和堆怄腐熟还田利用农作物秸杆2亿吨左 右，采用青贮、氨化等过腹还田方式利用2亿吨左右，另外还有少量农作物秸杆用于气化和 加工等，秸杆总量的2/3已基本实现了综合利用，还有约1/3、即2亿吨左右剩余秸杆尚未得 到综合利用，一些农民采取了最简单的处理方式-焚烧，造成了大气污染、土壤矿化、火灾 事故等大量的社会经济和生态问题，引起了全社会的广泛关注。
[0003] 秸杆本身主要有纤维素、半纤维素和木质素三种物质组成，还含有少量蛋白质和 矿物元素，是一种良好的微生物生长基质。而米根霉是中国药和酒曲中的重要霉菌之一， 可产生大量的淀粉酶、糖化酶、蛋白酶，分解秸杆中的纤维素和半纤维素，将其转化为乳酸 等有机酸，已有大批学者开始利用秸杆蒸煮液进行米根霉发酵乳酸的实验，有文章指出该 菌种在适宜的有氧条件下可将80%的糖转化为乳酸。但是目前该菌种用于农林废弃物的发 酵软化处理的应用较少。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供了一株从腐烂秸杆中筛选获得的米根霉菌株JHSW01，本发明 筛选到的米根霉菌株JHSW01作为一种生产食品所用的发酵菌种，不仅没有毒副作用，而且 米根霉发酵快，菌体生长营养要求简单，可以用于发酵农林废弃物，具有良好的市场应用前 景。
[0005]为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现： 一株从腐烂秸杆中筛选获得的米根霉菌株JHSW01，其分类命名为热办即狀其 保藏编号为CCTCCM2015189。
[0006] 所述米根霉菌株JHSW01革兰氏染色阳性；菌落稠密，菌丝匍匐爬行，最初呈白色， 后变为黑褐色；假根发达，分枝呈根状，呈黑褐色；孢子丝上有厚坦孢子，孢囊梗2~4成束， 孢囊梗直立有分枝，后呈黑色。
[0007] 进一步的，所述米根霉菌株JHSW01接种到液体培养基中培养产生酶活高达 110-200U/mL的糖化酶。
[0008] 进一步的，所述米根霉菌株JHSW01接种到固体培养基中培养产生酶活达 50~100U/g的纤维素酶。
[0009] 进一步的，所述米根霉菌株JHSW01具有有效分解纤维素和半纤维素的特性。
[0010] 与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：本发明从腐烂秸杆中筛选获得一 株米根霉菌株JHSW01，经实验验证其能够产纤维素酶且具有产生高糖化酶活的能力，能够 有效的分解纤维素和半纤维素；利用所筛选到的米根霉菌株JHSW01可以有效分解纤维素 的特性，可以将其用于发酵秸杆等农林废弃物，不仅充分利用了秸杆这种可再生资源，而且 解决了秸杆直接焚烧对环境带来的污染问题；本发明所述的米根霉菌株JHSW01采用的培 养基配方简易易于配制，有利于工业生产的成本节省；本发明菌种培养条件简单易于控制， 便于工业化应用，所以具有良好的市场应用前景。
[0011] 结合本发明的【具体实施方式】后，本发明的其他特点和优点将变得更加清楚。
【附图说明】
[0012] 图1是本发明中米根霉JHSW01的平板培养图。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。
[0014] 实施例1 一、米根霉菌株JHSW01的分离筛选 2010年7月4日从山东沂南大庄小麦腐烂秸杆中取样50余份，分别取6g样品粉末浸 泡在50mL生理盐水中，20°C条件下，每2h震荡一次。分别取100yL样品悬浮液在营养琼 脂平板均匀涂布，28°C恒温培养箱中培养3~7d，挑取形态典型的单菌落用划线法接种到营 养琼脂平板上，通过反复多次划线得到纯菌，共筛选出8株霉菌。
[0015] 将所得到的8株霉菌用接种环接种到液体PDA培养基中进行培养。获得的其中一 株菌命名为米根霉JHSW01，其符合米根霉菌的生物学特性，具体为：革兰氏染色阳性；菌落 稠密，菌丝匍匐爬行，最初呈白色，后变为黑褐色；假根发达，分枝呈根状，呈黑褐色；孢子 丝上有厚坦孢子，孢囊梗2~4成束，孢囊梗直立有分枝，后呈黑色，参见附图1。
[0016] 二、米根霉菌株JHSW01的细菌分子遗传学分类鉴定 首先提取菌株JHSW01的DNA，以该DNA为模板，18SrDNA通用引物为引物，对18SrDNA片段进行扩增。将扩增的片段直接进行序列测定。将测序的结果输入NCBI网站上的BLAST 程序进行比对，结果显示该菌株18SrDNA序列与GenBank基因库中根霉菌属中的Rhizopus oryzae的18srDNA序列同源度最高，同源率达到100%。通过DNAMAN6. 0对Genbank中已 有的芽孢杆菌属的18SrDNA序列进行遗传进化分析，结果显示，菌株JHSW01的18SrDNA 与Rhizopusoryzae同源性最高，因此可以判定该菌株为根霉菌属的米根霉菌。
[0017] 经所述生物学特性鉴定和细菌分子遗传学分类鉴定方法鉴定，可以确定所筛选 到的菌株JHSW01为根霉属，米根霉菌。将筛选到的米根霉菌株JHSW01进行菌种保藏，保 藏单位：中国典型培养物保藏中心（CCTCC);地址：湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学保 藏中心；保藏日期：2015年4月2日，米根霉的保藏编号为CCTCCM 2015189。
[0018] 三、米根霉菌株JHSW01在发酵过程中产生高糖化酶活 称取麦麸 2. 4g，大豆蛋白胨 1. 6g，可溶性淀粉 0? 8g，K2HP040. 16g，MgS04. 7H20 0? 04g，KC1 0.04g溶于80mL的蒸馏水后，置于250mL三角瓶中，121°C灭菌20min。冷却后接种两 环斜面米根霉JHSW01菌丝体，置于30°C，190rpm条件下发酵40h，离心取lmL上清液测定酶 活。利用DNS法进行米根霉糖化酶酶活的鉴定结果如下。
[0019] 表1米根霉JHSW01的糖化酶酶活实验结果
【主权项】
1. 一株从腐烂秸杆中筛选获得的米根霉菌株JHSW01，其特征在于：其分类命名为 TfeizojOT1S 其保藏编号为CCTCCM2015189。
2. 根据权利要求1所述的米根霉菌株JHSWOl，其特征在于：所述米根霉菌株JHSWOl革 兰氏染色阳性；菌落稠密，菌丝匍匐爬行，最初呈白色，后变为黑褐色；假根发达，分枝呈根 状，呈黑褐色；孢子丝上有厚坦孢子，孢囊梗2~4成束，孢囊梗直立有分枝，后呈黑色。
3. 根据权利要求1所述的米根霉菌株JHSWOl，其特征在于：所述米根霉菌株JHSWOl接 种到液体培养基中培养产生酶活高达110-200U/mL的糖化酶。
4. 根据权利要求1所述的米根霉菌株JHSWOl，其特征在于：所述米根霉菌株JHSWOl接 种到固体培养基中培养产生酶活达50~100U/g的纤维素酶。
5. 根据权利要求1所述的米根霉菌株JHSWOl，其特征在于：所述米根霉菌株JHSWOl具 有有效分解纤维素和半纤维素的特性。
【专利摘要】本发明提供了一株从腐烂秸秆中筛选获得的米根霉菌株JHSW01，此菌株的保藏编号为CCTCC M 2015189。经本发明实验证明此菌株具有产生高糖化酶活的能力，还可产纤维素酶，同时还能够有效促进农林废弃物腐烂过程中菌群纤维素酶的合成分泌；利用所筛选到的米根霉菌株JHSW01可以有效分解纤维素的特性，可以将其用于发酵秸秆等农林废弃物，充分利用了秸秆这种可再生资源，而且解决了秸秆直接焚烧对环境带来的污染问题；本发明所述的米根霉菌株JHSW01采用的培养基配方简易易于配制，有利于工业生产的成本节省；本发明菌种培养条件简单易于控制，便于工业化应用，所以具有良好的市场应用前景。CCTCC M 201518920150402
【IPC分类】C12N1-14, C12R1-845
【公开号】CN104818220
【申请号】CN201510192533
【发明人】董桂秀, 张召佐, 杨海征
【申请人】稼禾生物股份有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年4月22日