一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺的制作方法

本发明涉及兽用生物制品领域，具体涉及一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺。

背景技术：

1、猪繁殖与呼吸综合征，又称蓝耳病，由猪繁殖与呼吸综合征病毒(prrsv)引起，是一种以母猪繁殖障碍、仔猪和育肥猪出现呼吸道症状为主要特征的高度接触性传染病。带病的猪只、病毒污染的气溶胶和媒介昆虫、鸟类、运输工具均可引起prrsv的传播。目前，猪繁殖与呼吸综合征的防治仍以疫苗免疫预防为主。蓝耳病毒冻干活疫苗是较为有效的一款疫苗，能够有效刺激猪体产生坚强持久的免疫力、控制疾病严重性以及降低临床发病率，还可以提高猪只日增重等生产性能。

2、蓝耳病毒冻干活疫苗是将蓝耳病毒扩大培养，达到一定的抗原量，加入冻干保护剂进行配制，按要求进行灌装，通过低温冷冻，增加冻干机内真空度的方法，抗原中的水分会以升华的方式分离，经过升华与解析干燥处理，制成保持原有病毒免疫原性的干粉。使用时只需加入相应的稀释液稀释完全，即可进行免疫接种。该疫苗使用剂量小，保存方便，能快速产生免疫保护力。

3、目前，蓝耳病毒冻干活疫苗在市场上应用广泛，但还存在以下问题：(1)疫苗的溶解度不稳定，有些批次加入稀释液静置3秒即可溶解，有些需要较长时间才能溶解，影响疫苗使用效率。(2)冻干疫苗外观有缺陷不完整，部分存在萎缩和侧壁塌陷的现象。(3)抗原经过冻干后，效价损耗较大。(4)成品剩余水分不稳定，容易超标。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本发明提供了一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺，目的在于提高疫苗溶解度、提升物理性状，减少成品水分、减少抗原效价的耗损。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺，包括以下步骤：

4、1)抗原梯度降温融化

5、将放置于-40℃保存的蓝耳病毒抗原取出，放入-20℃冷库中保存24～36h，再放入2～8℃冷库中保存15～24h，然后将抗原置于大容量摇床上化冻，摇床温度设定为22～25℃，当抗原完全融化，瓶壁不再出现大量冷凝水，此时抗原约为6～10℃，即可将抗原从摇床中取出，移入抗原传递间，将抗原摇匀后通过管道传至配苗罐；在配苗罐中开启搅拌桨进一步混匀；

6、2)配苗

7、将配苗罐搅拌桨转速调至120～150r/min，将保护剂配制罐中37℃保温的保护剂通过管道打入配苗罐内，边打边搅拌，待保护剂加至所需剂量，关闭阀门，继续搅拌3～4min，将混悬液的ph调至6.5～6.8(优选为6.6)，继续搅拌10～12min，直至搅拌均匀，将配好的成品通过管道打入灌装系统；

8、3)灌装：

9、采用全自动灌装系统进行灌装；

10、此系统包含灌装和称重两部分，每个灌装泵都采用独立伺服电机控制，灌装程序可自动调节伺服电机行程，从而调节灌装量；灌装开始前，在称重系统中设定好灌装重量，开始自动称重，待所有灌装泵调至所需灌装量时，灌装正式开始，在灌装过程中，自动称重系统会根据设定频率，定时抽样检查灌装量是否准确，以保证本批次灌装量稳定；

11、4)冻干

12、4-1)预冻：

13、将灌装完成的制品于18～26℃进箱，待制品温度降到-4～0℃时，再升温至18～20℃，保温50～60min，然后继续降温至-40～-38℃，保温250～300min；

14、4-2)升华干燥：

15、预冻结束后抽真空，待真空降至28～30pa时，开始加热，板层温度为-5～3℃，真空度不超过25pa，维持该真空度并保温400～700min；

16、4-3)解析干燥：

17、将升华干燥得到的制品升温加热至20～28℃，箱内真空度降为0.3～5pa，维持该真空度并保温200～300min。

18、本发明具有以下有益效果：

19、1、抗原收获后，置于-40℃冷库保存，配苗前采用梯度降温的方式融化，可以减少抗原在保存过程中效价的耗损及化苗过程中抗原保存容器的破裂。

20、2、化苗工序中抗原融化至冰块完全消失，还需继续在摇床上回温至6～10℃。保护剂需要保温至37℃，此方法可以减少抗原与保护剂之间的温差，有利于保护剂与抗原的均匀混合，减少因制品不均匀影响冻干的损耗。如果冰块刚融化就与保护剂一起配制，抗原温度较低，保护剂的胶状物质与抗原混合后，遇冷流动性较差，难以混合均匀。

21、3、配苗后，蓝耳病毒抗原与保护剂的混合液(以下简称混悬液)的ph调至6.5～6.8，保证蓝耳病毒效价稳定。

22、4、灌装时，配苗罐底部安装搅拌桨，不间断搅拌，灌装过程采用自动称重装置，定时监测灌装的准确性，增加灌装过程产品的均一性，便于冻干参数对不同批次疫苗冻干的适用性。

23、5、冻干工艺中，常温进箱，待所有制品灌装结束后再开始对板层进行降温，降温过程进行退火处理，这个步骤可以减少制品出现侧壁坍塌的现象。退火即制品先降温再升温，到一定温度后再降温，保证所有制品到达目标温度。

24、6、预冻时间要充足，保证制品冻结实；升华干燥与解析干燥要维持足够长的时间，制品的剩余水分控制在2.4～2.9％左右。

25、7、通过本发明冻干工艺生产的蓝耳病毒活疫苗制品，能够较好的控制制品的剩余水分，制品外观呈淡黄色海绵状疏通团块，易溶解，且在18个月的有效期内效价耗损极少。

技术特征：

1.一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺，其特征在于，所述抗原按照以下方式梯度降温融化：将放置于-40℃保存的蓝耳病毒抗原取出，放入-20℃冷库中保存24~36h，再放入2~8℃冷库中保存15~24h，然后将抗原置于摇床上化冻，摇床温度设定为22~25℃，当抗原完全融化，瓶壁不再出现冷凝水，将抗原从摇床中取出。

3.根据权利要求1所述的一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺，其特征在于，步骤2）中，配苗罐搅拌桨转速为120~150r/min。

4.根据权利要求1所述的一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺，其特征在于，步骤2）中，将混悬液的ph调至6.6。

技术总结
本发明公开了一种蓝耳病毒活疫苗的配苗灌装及冻干工艺。1）将放置于‑40℃保存的蓝耳病毒抗原取出，将其梯度降温融化，然后移入抗原传递间，将抗原摇匀后通过管道传至配苗罐，在配苗罐中开启搅拌桨进一步混匀；2）将保护剂通过管道打入配苗罐内，边打边搅拌，待保护剂加至所需剂量，关闭阀门，继续搅拌3~4min，将混悬液的pH调至6.5~6.8，继续搅拌均匀，将配好的成品通过管道打入灌装系统；3）采用全自动灌装系统进行灌装；4）将灌装完成的制品经过预冻、升华干燥、解析干燥后得到蓝耳病毒活疫苗制品。通过本发明工艺生产的蓝耳病毒活疫苗制品，能够较好的控制制品的剩余水分，制品呈淡黄色海绵状疏通团块，易溶解，且在18个月的有效期内效价耗损极少。

技术研发人员：吴丽兰,陈帆,陆奕滨,陈慧婧,陈秋群,卢静,吴静兰,邱吓娟
受保护的技术使用者：兆丰华生物科技（福州）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15