专利名称：苦草球茎离体培养再生方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域。
背景技术：
我国水域生态系统的污染严重，水环境质量的下降对水生生物资源造成了严重破坏，要恢复水生生态系统的平衡，净化水质，促进渔业的发展，引种水体净化植物，具有重要意义。
苦草是水鳖科Hydrocharitaceae苦草属Vallisneria沉水草本植物，苦草营养丰富、成分齐全，是草食性鱼类和底栖动物的重要饵料；苦草冬芽是一些野生珍禽越冬时期的重要食物；苦草生态适应性广，吸附污物能力强，是减少水体污染，缓解水体富营养化程度的重要沉水植物；其植物体被破坏后恢复时间短，因而又是重建水生植被的重点选择对象。但该植物种子苗在自然条件下定居成活率低，冬芽萌发受土层厚度的影响大，土层中大量的生活冬芽不能萌发成苦草植株，难以大规模繁殖推广。
目前国内外尚无苦草组织培养技术研究的相关报道。
发明内容
本发明的目的是发明一种大规模生产苦草优质组培苗的方法，以克服该植物种子苗在自然条件下定居成活率低，冬芽萌发受土层厚度的影响大，土层中大量的生活冬芽不能萌发成苦草植株，阻滞大规模繁殖推广的弊端，适应我国重建水生植被工作中，重点选择苦草进行减少水体污染，缓解水体富营养化程度引种的迫切需要，从而恢复良好的水生生态环境，推动我国渔业的可持续发展。
本发明的技术方案是通过不同外植体的选择、调整改善外植体灭菌处理条件和培养基状态等因子，在遏止外植体的褐化和污染方面取得了成功。选择合适的外植体并建立无菌体系是决定组织培养工作能否进行的关键。
利用苦草球茎进行愈伤组织诱导培养，通过培养基的选择和激素调控，可使其愈伤组织诱导频率达到80％以上。
从愈伤组织再生完整植株是组培快繁成功的关键。通过调整激素条件、氮源和有机化合物等因子，获得了苦草再生植株。
本发明建立了苦草愈伤组织再生体系，从愈伤组织转入分化，植株再生频率为90％。
在以上研究的基础上，本项发明建立了苦草球茎离体培养再生苗的繁殖方法如下(1)在添加2，4-D激素条件下由苦草球茎诱导愈伤组织；(2)在添加BA激素条件下，诱导培养再生植株；(3)在添加NAA激素条件下，培养出完整的生根的再生植株；该繁殖方法性能稳定，试验重复性好，试管再生苗分化、丛生性状良好。各培养阶段的培养基及激素配比如下表苦草球茎离体培养再生各阶段的培养基激素配方
在试管苗生产过程中，各个培养阶段的基本培养基均为MS大量元素、微量元素，B5维生素，蔗糖3％，Gelrite或Phytagel 0.2％。
采用此技术体系，以苦草球茎为外植体，愈伤组织诱导率在80％以上；愈伤组织再生植株的频率达90％；试管苗的生根率达100％。
本发明效果是采用这一技术体系，以球茎为外植体，愈伤组织诱导率在80％以上；愈伤组织再生植株的频率达90％；试管苗的生根率达100％。
通过体细胞胚的诱导培养研究，大规模生产苦草的试管苗，并用组织培养等技术手段改良苦草的农艺品质，以利于推广开发。苦草营养丰富、成分齐全，是草食性鱼类和底栖动物的重要饵料；其冬芽肉质鲜嫩，是野生禽类的良好食物对象，特别是一些珍禽如白鹳、黑鹳、天鹅和白头鹤等越冬时期的重要食物，另外，据《本草纲目》记载，苦草具有明显的药用价值；苦草丛生之处是蟹类的良好栖息地和上等农田绿肥；更重要的是苦草生态适应性广，吸附污物能力强，是减少水体污染，缓解水体富营养化程度的重要沉水植物；其植物体被破坏后恢复时间短，因而又是重建水生植被的重点选择对象。兼有优良饲料、恢复水生植被和净化水体的特点，使之在湖泊、池塘发展可持续的渔业系统的需求方面将有所作为。
具体实施例方式
该方法在植物组织培养室进行，先后培养了三批约12000株苦草工程苗。其具体方式是以MS基本培养基为基础，利用苦草球茎进行愈伤组织诱导培养，在添加2，4-D激素条件下由苦草球茎诱导愈伤组织，其愈伤组织诱导频率达到80％以上。在添加BA激素条件下，诱导培养再生植株；植株再生频率为90％。在添加NAA和IBA激素条件下，培养出完整的生根的再生植株；试管苗的生根率达100％。
权利要求
1.一种苦草球茎离体培养繁殖方法，其特征在于利用苦草球茎进行愈伤组织诱导培养，培养出完整的苦草试管苗，其具体方法为以MS培养基为基础，在添加0.5mg/L 2，4-D激素条件下由苦草球茎诱导愈伤组织；在添加2.0mg/L BA激素条件下，诱导培养再生植株；在添加0.1mg/L IBA和0.1mg/LNAA激素条件下，培养出完整的生根的再生植株。
2.根据权利要求1所述方法培养繁殖的苦草球茎工程苗在湖泊水生植被恢复和湖泊污水处理工程中的应用。
全文摘要
本发明属于植物组织培养技术领域。运用苦草球茎离体培养再生方法，大规模生产苦草优质组培苗；以克服该植物种子苗在自然条件下定居成活率低，冬芽萌发受土层厚度的影响大，土层中大量的生活冬芽不能萌发成株的弊端。可满足我国水生植被重建，削减水体污染，缓解水体富营养化过程中种苗的迫切需要。
文档编号C02F3/32GK1826877SQ20061003934
公开日2006年9月6日 申请日期2006年4月6日 优先权日2006年4月6日
发明者安树青, 郑丽屏, 周长芳, 关保华, 蒋金辉 申请人:南京大学