提取和/或检测的试剂盒及其应用的制作方法

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及提取和/或检测的试剂盒及其应用。

背景技术：

1、类固醇激素是含有环戊烷多氢菲结构的一类化合物，在维持人体生长发育、免疫调节、生育控制方面有重要作用。类固醇激素主要包含盐皮质激素、糖皮质激素、性激素等。类固醇激素代谢紊乱是多种疾病的发病原因，同时也是多种疾病的临床表现，故准确的检测其变化情况在内分泌疾病的诊断中具有重要参考价值。

2、脂溶性维生素是维持人体健康必需的一类脂溶性的营养物质，具有重要的生理功能，缺乏和过量都能导致相关疾病的发生。脂溶性维生素主要包含维生素a、维生素d、维生素e、维生素k等。维生素a的缺乏严重会导致夜盲症、干眼症等；维生素d的缺乏能导致佝偻病、软骨病、高血压、糖尿病等多种疾病的发生；维生素e为抗氧化物质，可清除体内的自由基，延缓皮肤自然衰老。孕妇体内缺乏会增加妊娠期高血疾病的发生风险，过量则会妨碍其他脂溶性维生素的吸收；维生素k过量，易引起溶血、高胆红素血症等不良反应，新生儿缺乏会出现维生素k缺乏性出血症，而成年人会出现维生素k合成障碍和代谢紊乱等疾病。脂溶性维生素在整个人体生长、发育、代谢中有重要作用，故脂溶性维生素浓度水平的检测具有重要意义。

3、现有技术中没有采用磁性固相萃取同时提取多种类固醇激素和脂溶性维生素的方法及试剂盒。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了提取和/或检测的试剂盒及其应用。本发明操作简单无需固相萃取仪和离心设备，降低成本；所用一种方法实现多种类固醇激素和脂溶性维生素的同时提取和检测，缩短样本处理时间，提高检测效率；前处理过程仅涉及混匀、磁吸和溶液转移，步骤简单、降低人员要求。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了磁悬液，包括：磁珠；所述磁珠偶联hlb基团、羧基和/或羟基中的一种或多种；

4、所述磁珠与样本的质量体积比为0.75mg/100μl～1.5mg/100μl。

5、在本发明的一些实施方案中，上述磁悬液，包括：7.5mg/ml、10mg/ml或12.5mg/ml磁珠。

6、在本发明的一些实施方案中，上述磁悬液，包括：10mg/ml磁珠。

7、在本发明的一些实施方案中，上述磁悬液，所述磁珠偶联hlb基团。

8、在本发明的一些实施方案中，上述磁悬液中，所述磁珠经与甲醇混合，磁吸后获得。

9、在本发明的一些实施方案中，上述磁悬液中，所述磁珠与所述甲醇的质量体积比为50:1。

10、本发明还提供了检测试剂，包括：上述磁悬液、裂解液、淋洗液和洗脱液；

11、所述淋洗液包括：0～10％甲醇水溶液。

12、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述淋洗液包括：5％或10％甲醇水溶液。

13、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述裂解液包括：甲醇。

14、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述裂解液的体积为：10～50μl。

15、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述裂解液的体积为：10μl、25μl或50μl。

16、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述裂解液的体积为：50μl。

17、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述洗脱液包括：甲醇溶液和/或乙腈溶液。

18、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述洗脱液的体积为60～100μl。

19、在本发明的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述洗脱液的体积为60μl、80μl或100μl。

20、本发明还提供了上述磁悬液和/或上述检测试剂在制备提取和/或检测类固醇激素和脂溶性维生素的试剂盒中的应用。

21、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述检测包括如下步骤：

22、s1：取待测样本与内标液混合后，与所述裂解液混合，磁吸后，收集沉淀，获得沉淀液1；

23、s2：取所述沉淀液1与所述淋洗液混合，磁吸后，收集沉淀，获得沉淀液2；

24、s3：取所述沉淀液2与所述洗脱液混合，磁吸后，收集上清，检测。

25、在本发明的一些实施方案中，上述应用s1～s3中不包括固相萃取和/或离心的步骤。

26、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述待测样本、所述磁悬液、所述裂解液、所述淋洗液和所述洗脱液的体积比为10:10:5:40:6。

27、在本发明的一些实施方案中，上述应用中，所述待测样本包括血清。

28、本发明还提供了提取和/或检测的试剂盒，包括上述磁悬液和/或上述检测试剂以及可接受的助剂或载体。

29、本发明提供了磁悬液，包括：磁珠；所述磁珠偶联hlb基团、羧基和/或羟基中的一种或多种；所述磁珠与样本的质量体积比为0.75mg/100μl～1.5mg/100μl。

30、本发明的有益效果包括：

31、(1)、本发明可以同时提取和检测血清中类固醇激素和脂溶性维生素；

32、(2)、本发明的提取方法操作简单无需固相萃取仪和离心设备，成本低；

33、(3)、本发明用一种方法实现多种类固醇激素和脂溶性维生素的同时提取和检测，缩短样本处理时间和检测时间，提高检测效率；

34、(4)、本发明的前处理过程仅涉及混匀、磁吸和溶液转移，步骤简单、对人员要求低。

技术特征：

1.磁悬液，其特征在于，包括：磁珠；所述磁珠偶联hlb基团、羧基和/或羟基中的一种或多种；

2.如权利要求1所述的磁悬液，其特征在于，所述磁珠经与甲醇混合，磁吸后获得。

3.检测试剂，其特征在于，包括：如权利要求1或2所述的磁悬液、裂解液、淋洗液和洗脱液；

4.如权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述裂解液包括：甲醇。

5.如权利要求3或4所述的检测试剂，其特征在于，所述洗脱液包括：甲醇溶液和/或乙腈溶液。

6.如权利要求1或2所述的磁悬液和/或如权利要求3至5任一项所述的检测试剂在制备提取和/或检测类固醇激素和脂溶性维生素的试剂盒中的应用。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述检测包括如下步骤：

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，s1～s3中不包括固相萃取和/或离心的步骤。

9.如权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述待测样本、所述磁悬液、所述裂解液、所述淋洗液和所述洗脱液的体积比为10:10:5:40:6。

10.提取和/或检测的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的磁悬液和/或如权利要求3至5任一项所述的检测试剂以及可接受的助剂或载体。

技术总结
本发明涉及生物检测领域，尤其涉及提取和/或检测的试剂盒及其应用。本发明提供了磁悬液，包括：包括：磁珠；所述磁珠偶联HLB基团、羧基和/或羟基中的一种或多种；所述磁珠与样本的质量体积比为0.75mg/100μL～1.5mg/100μL。本发明操作简单无需固相萃取仪和离心设备，降低成本；所用一种方法实现多种类固醇激素和脂溶性维生素的同时提取和检测，缩短样本处理时间，提高检测效率；前处理过程仅涉及混匀、磁吸和溶液转移，步骤简单、降低人员要求。

技术研发人员：申业明,杨雪莹,刘亚娟,赵高岭,李晓霞,蔡克亚,吴学炜,高培丽,孙江彦
受保护的技术使用者：郑州安图生物工程股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29