专利名称：套装人参皂甙标准对照品及其分离制备方法
技术领域：
本发明涉及一种分析测试领域尤其是高效液相色谱法(HPLC)应用的套装高纯度人参皂甙标准对照品及其分离制备方法。
背景技术：
目前，中草药现代化发展及保健食品的兴起，人参制品的产品质量控制已得到高度重视；人参皂甙的含量是其质量控制的关键指标；高效液相色谱法(HPLC)具有高的分离定量能力，并可对各皂甙单体进行定量测定，但此方法的开展需要有相应各皂甙单体的高纯度对照品，以利于方法的外标法定量测定。但目前提供的人参皂甙标准对照品的纯度低，仅为95％(HPLC)，且多数需要进口；尤其是对照品均为单体，经常难买齐全，且价格昂贵。其制备方法有的是单纯用液相色谱法，其分离量小，成本高，只能自己用于科研；二是用硅胶柱层析反复多次进行分离，手续麻烦，纯度达不到要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种产品纯度高的套装人参皂甙单体标准对照品及一种回收率高，产品纯度高的制备方法。
该套装标准对照品中同时包括有产品纯度达98％以上的人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1六种单体。
其制备方法包括以下步骤(一)常压硅胶柱层析预纯化(1)样品的准备取由五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的根或茎叶，用80％乙醇提取并经浓缩、树脂吸附净化得到的总皂甙含量大于50％的人参提取物；(2)制备玻璃层析柱采用100～200目层析硅胶为固定相，于120℃活化4-15小时，冷后以湿法装柱；装柱用的溶剂为氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10(下层溶液)；(3)常压柱层析分离将人参提取物用甲醇溶解后，与失活硅胶按提取物与硅胶重量比为(4～8)∶10范围内配制混合，蒸干溶剂后将固体部分研碎，装入制备好的玻璃层析柱柱头；(4)氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10进行洗脱，洗脱流动相流速为5～15mL/min，各皂甙洗脱顺序)为Rb2、Rg1、Re、Rd、Rc、Rb1；(5)分段收集洗脱液，各部分收集液蒸干后得中间产物，各单体皂甙含量在30～80％范围；其中未分离的各单体主要以两种皂甙混合形式存在，如Rb2+Rg1、Rg1+Re、Re+Rd、Rd+Rc、Rc+Rb1；(二)等度高效制备色谱分离纯化；A、分离固定相为反相C18填料，流动相如下Rb2与Rg1的分离采用20-35％乙腈，Rg1与Re的分离采用15～30％的乙腈，Re与Rd的分离采用20～35％的乙腈，而Rd与Rc、Rc与Rb1的分离采用25～40％的乙腈。
B、同步采用紫外检测器于203nm监视流出曲线而指导产品收集；(三)收集液于水浴上浓缩后于冰箱(4℃)中冷却析晶，得各单体产品；(四)将单体分别装入瓶中，再将各单体组合为一套，而形成套装人参皂甙标准对照品。
用本方法得到的最终单体产品用紫外、红外及梯度高效液相色谱鉴定其纯度并进行产品质量控制，本对照品纯度＞98％，各单体品种齐；可作为人参制品(含人参原材料、人参提取物、中草药及保健食品等)中人参皂甙高效液相色谱测定的定量、定性标准对照品。
图1为Rb2的等度制备色谱图。
图2为Rb1的等度制备色谱图。
图3为Rg1的等度制备色谱图。
图4为Rc的等度制备色谱图。
图5为Re、Rd的等度制备色谱图。
具体实施例方式实施例一、硅胶柱层析1、干法上样 将6克人参茎叶提取物(总皂甙＞70％)溶于10ml甲醇中，所得溶液分几次加入10克未活化的硅胶中，在水浴锅上混匀、烘干，贮存在干燥器中备用。
2、湿法装柱 将于120℃活化12h的硅胶，冷却，装入充满流动相的玻璃空柱(5cm×70cm)，柱长约50cm，静置过夜。
3、流动相准备VCHCl3∶VMeOH∶VH2O＝65∶35∶10，配好摇匀，静置澄清，取下层。
4、将样品装于硅胶柱中，用流动相开始淋洗，前600ml不收集，以后每100ml收集一杯，第4-7杯合并蒸干，得人参皂甙Rb2粗品；第9-14杯合并蒸干，得人参皂甙Rg1粗品；第17-26杯合并蒸干，得人参皂甙Re、Rd的粗品；第27-34杯合并蒸干，得人参皂甙Rc的粗品；第41-47杯合并蒸干，得人参皂甙Rb1的粗品。二、HPLC进行半制备分离1、Rb2的制备色谱柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流动相30％CH3CN流速4ml/min检测波长203nm进样量1ml样液浓度约10mg/ml，色谱图如图1。2、Rb1的制备色谱柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流动相30％CH3CN流速4ml/min检测波长203nm 进样量1ml样液浓度约10mg/ml，色谱图如图2。3、Rg1的制备色谱柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流动相20％CH3CN流速4ml/min检测波长203nm进样量1ml样液浓度约10mg/ml，色谱图如图3。4、Rc的制备色谱柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流动相28％CH3CN流速4ml/min
检测波长203nm进样量1ml样液浓度约10mg/ml，色谱图如图4。5、Re、Rd的制备色谱柱Prep Nova_pakR HR C18 6um 7.8×300mmHPLC column流动相0-25min 25％CH3CN 25-55min 30％CH3CN流速4ml/min检测波长203nm进样量1ml样液浓度约10mg/ml，色谱图如图5。
三、收集液于水浴上浓缩后于冰箱(4℃)中冷却析晶，得各单体产品；四、将单体分别装入瓶中，再将各单体组合为一套，而形成套装人参皂甙标准对照品。
权利要求
1.套装人参皂甙标准对照品，其特征在于每套包括有产品纯度达98％以上的人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1六种单体。
2.一种套装人参皂甙标准对照品的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤(一)常压硅胶柱层析预纯化(1)样品的准备取由人参的根或茎叶，用80％乙醇提取并经浓缩、树脂吸附净化得到的总皂甙含量大于50％的人参提取物；(2)制备玻璃层析柱采用100～200目层析硅胶为固定相，于120℃活化4-15小时，冷后以湿法装柱；装柱用的溶剂为氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10(下层溶液)；(3)常压柱层析分离将人参提取物用甲醇溶解后，与失活硅胶按提取物与硅胶重量比为(4～8)∶10范围内配制混合，蒸干溶剂后将固体部分研碎，装入制备好的玻璃层析柱柱头；(4)用氯仿∶甲醇∶水＝(65～75)∶(35～25)∶10进行洗脱，洗脱流动相流速为5～15mL/min，各皂甙洗脱顺序为Rb2、Rg1、Re、Rd、Rc、Rb1；(5)分段收集洗脱液，各部分收集液蒸干后得中间产物，其中未分离的各单体主要以两种皂甙混合形式存在，如Rb2+Rg1、Rg1+Re、Re+Rd、Rd+Rc、Rc+Rb1；(二)等度高效制备色谱分离纯化；A、分离固定相为反相C18填料，流动相如下Rb2与Rg1的分离采用20-35％乙腈，Rg1与Re的分离采用体积比为15～30％的乙腈，Re与Rd的分离采用体积比为20～35％的乙腈，而Rd与Rc、Rc与Rb1的分离采用25～40％的乙腈；B.同步采用紫外检测器于203nm监视流出曲线而指导产品收集；(三)收集液于水浴上浓缩后于冰箱(4℃)中冷却析晶，得各单体产品；(四)将单体分别装入瓶中，再将各单体组合为一套，形成套装人参皂甙标准对照品。
全文摘要
本发明涉及一种分析测试领域尤其是高效液相色谱法(HPLC)应用的套装高纯度人参皂甙标准对照品及其分离制备方法。该套装标准对照品中同时包括有产品纯度达98%以上的人参皂甙Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1六种单体。其制备方法包括:常压硅胶柱层析预纯化:等度高效制备色谱分离纯化;冷却析晶,得各单体产品,将单体分别装入瓶中,再将各单体组合为一套,而形成套装人参皂甙标准对照品。
文档编号G01N30/02GK1374522SQ02113930
公开日2002年10月16日 申请日期2002年1月25日 优先权日2002年1月25日
发明者陈波, 姚守拙, 罗旭标 申请人:湖南师范大学