专利名称:微量免疫测定用的微型固相物的制作方法
本实用新型属于免疫测定技术领域：
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目前商品化的免疫测定固相物，大多使用聚苯乙烯板和聚苯乙烯球。由于球状固相物比板状固相物在一定量的溶液中，可利用的表面积大，因此球状固相物的测定灵敏度较高。聚苯乙烯球的特点是非特异性吸附小，测定灵敏度高。但有如下几点不足之处1、价格较贵，用其做固相物，试剂盒造价较高。2、材料较硬，直径小于3毫米的聚苯乙烯球不容易生产。目前大量使用的聚苯乙烯球直径为3.2毫米，而3.2毫米直径的球在试管中一般需要50μl以上体积的溶液才能淹盖球面，因此当反应体系较小时，这种固相物就不适用。3、聚苯乙烯球在测定中，从一个试管移至另一个试管，需用镊子夹，操作不方便。
本实用新型的任务是制作一种廉价的、操作简便，且能适于较小反应体系的免疫测定微型固相物。
本实用新型是用软塑料如聚氯乙烯为固相物材料的。由于聚氯乙烯的非特异性吸附大，影响免疫测定的灵敏度，因此很难以聚氯乙烯为固相物材料。本实用新型是将聚氯乙烯固相物做得很小(直径小于2.0mm)，减小其非特异性吸附，使得固相物既能适应小于50μl的反应体系，又能提高灵敏度。另外，为克服固相物体积太小操作不方便的缺陷，在固相物上连有一操作柄。
本实用新型用市面上出售的实心软塑料丝，按需要切成一定长度的颗粒作固相物，这样使得固相物的材料成本非常低廉，且制作非常简单。一般固相物的体积制成小于4mm3、大于0.1mm3的任意一种规格，使固相物既有高的灵敏度，又便于安装操作柄。
将软塑料丝切成的固相物颗粒用曲拉通(Triton)、重蒸水洗涤后，置超声波洗涤器中振荡，这样反复多次，最后用卫生纸吸干，再放入一定量的抗体或抗原溶液中，在室温或4℃下放置1－24小时，用含有牛血清白蛋白的缓冲液将固相物洗三遍，再用非特异性吸附小的金属或其他非塑料的坚硬材料作操作柄，连在固相物上，形成一个带柄的固相物。在使用中，至最后一步时，可将柄去掉，以减小非特异性吸附的干扰，提高测定灵敏度。
本实用新型的优点是价格极为低廉、制作非常简单，由于固相物体积很小，反应体系也很小，从而节约了试剂。且操作方便，灵敏度高，能广泛应用于多种免疫测定。
本应用新型的实施例以市面上出售的直径为0.8mm的聚氯乙烯塑料丝为材料，切成每粒长0.8－1.0mm的园柱体，然后用0.01％的曲拉通(Triton)、重蒸水洗涤，再置于超声波洗涤器中振荡，这样反复5次，用卫生纸吸干。
将洗净、吸干的聚氯乙烯固相物颗粒放在0.1mg／ml的抗体溶液(溶于PH7.5、含0.1％NaN3的0.1M磷酸盐缓冲液)中，在4℃温度中，放置12小时，然后将抗体溶液吸去，用0.01M磷酸缓冲液(含0.1％牛血清白蛋白和0.1％NaN3)将固相物洗三遍。将固相物浸在该缓冲液中，在4℃下，至少可保存一年。
临用前，将被抗体包被的微型固相物从缓冲液中取出，用卫生纸吸干，在切面处插入一个大头针(2.6cm长)作操作柄。将固相物放入长2.0厘米、内径2－3.5毫米的，底部呈V或U型的小试管中，就可与抗原反应，进行免疫测定。
如附图1是操作柄大头针；
2是小试管；3是抗体包被的固相物；4是抗原溶液。
微型固相物用于快速β－hCG(人绒毛膜促性腺激素)酶标定性检测例将抗β－hCG的IgG包被的带柄的固相物(固相物体积同实施例)与10μl hCG标准液、尿或末梢血清在第1号小试管中反应5分钟，提起固相物，移入2号小试管(含10μl5－15μg／ml抗β－hCGFab′－辣根过氧化酶交联物)反应5分钟，提起固相物至水龙头冲洗，再将固相物放入盛有20μl底物溶液的3号试管中，在试管口将大头针拉掉，反应2－5分钟后，肉眼观察，无色管为hCG阴性；兰色管为hCG阳性。这种方法hCG的最小测定值为0.1单位／ml，妊娠7－10天能被迅速检出。
微型固相物用于高灵敏度β－hCG酶免疫测定将抗β－hCG的IgG包被的带柄的微型固相物与10μl hCG标准液或待测末梢血清或尿在1号试管中30℃反应2小时，用0.01M磷酸缓冲液(含0.15M NaCl、PH7.0)洗二遍后，移入2号试管(盛有10μl 0.1－1.0μg／ml抗β－hCG Fab′－辣根过氧化酶交联物)继续在30℃反应2小时，再用上述0.01M磷酸缓冲液洗二遍后转入含有20μl底物的3号试管中，同时去掉操作柄，继续在30℃反应1小时，再在3号试管中加20μl 4N硫酸中止反应溶液移入微量比色池中，用波长450nm检测(用泰州东方仪器厂的多功能紫外可见光分光光度计)。hCG的最小测定值为10Pg／管(1.0ng／ml)。
权利要求
1.一种微量免疫测定用的微型固相物。特别是作为抗原或抗体固定化的微型固相物，其特征在于固相物是用软塑料制成的，体积在0.1mm3至4mm3之间。且固相物上连有一个金属操作柄。
专利摘要
一种微量免疫测定用的微型固相物，特别是作为抗原或抗体固定化的微型固相物，它是用软塑料制成的，体积在0.1mm
文档编号G01N33/544GK87207371SQ87207371
公开日1988年6月8日 申请日期1987年8月1日
发明者阮克和 申请人:福建医学院导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan