专利名称：中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法
技术领域：
本发明属于仪器分析方法中的核磁共振方法，具体地说是关于中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法。
背景技术：
中草药是中医用于防治疾病的物质基础，其真伪优劣不仅直接决定着临床疗效乃至患者的生命安危，也严重影响中药学的继承发扬和中药走向世界。因此只有对中药材进行现代意义下的科学的质量控制，才能更好地保障中药饮片和成药的质量，实现中药质量的安全、有效、稳定、可控，扫除制约中药走向世界的障碍，为中药走向世界奠定良好的基础。其中建立在中药成分的系统测试、分析结果之上的标准指纹图谱是全面、客观评价反映中药内在质量的有效手段，同时也易被国际社会所接受。指纹图谱技术也是在现有的技术条件下对中药材、中成药进行严格质量控制的最好解决办法。它能从原药材的栽培、引种、中成药生产过程中生产工艺的规范与优化，到产品质量标准的制定提供全方位的质量保证。目前已被美国、欧洲、印度、日本等国家广泛使用，并被多个国家的药典所承认。因此能真正反映中药材、中成药内在质量的指纹图谱的建立是实现中药现代化的关键。对于其他光谱如紫外、红外、荧光、原子吸收以及色谱法如气相色谱、高效液相色谱、色谱-光谱联用法，也都可以进行中药质量评价的研究。各种方法性能的差别导致其鉴别效果也各具特色。每种图谱鉴别方法都有其局限性和相对优势。不同方法的难易程度、解决问题的角度、测试成本以及鉴别效果均有所差异。对于中草药某成分的定性、定量分析而言，色谱—质谱联用技术较好。而对于单味中药或中成药的品种鉴定和真伪鉴别而言，特别是其特征性较差时，可靠、灵敏、简便、价廉、重现性好、特征性强的鉴别方法尚未见报道。
发明内容
本发明针对目前已有技术存在的上述缺点，提供了一种可靠、灵敏、简便、价廉、重现性好、特征性强的中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法。
本发明的目的是这样实现的本发明包括将样品用低分子量的极性溶剂提取，分别测试提取物的核磁共振图谱，与相应对照品的核磁共振图谱进行比较，即可获得鉴别结果。所述低分子量的极性溶剂是指乙醇、甲醇、水、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等。
具体操作方法如下取5-20克样品，加50-200毫升低分子量的极性溶剂，于水浴上加热回流30-120分钟，滤取提取液，将溶剂挥发，残余物称重。取1-50毫克残余物进行核磁共振分析，与相应对照品的核磁共振图谱进行比较。
本发明的适用对象包括可粉碎成粉末的固体样品，如中药材或以生药为主的中成药的片剂、散剂、胶囊、水丸剂、锭剂等；粘性固体样品需要将样品切碎，如中成药的蜜丸剂等；液体样品则可以直接选择合适溶剂提取。最常用的溶剂是甲醇、乙醇和水。
图1不同品种金银花的核磁共振指纹图谱图2不同品质金银花的核磁共振指纹图谱图3北沙参的核磁共振指纹图谱图4不同厂家六味地黄丸的核磁共振指纹图谱图中1-蒙花(大毛花)的核磁共振氢谱2-杂交一代的核磁共振氢谱3-金银花的标准核磁共振氢谱4-蒙花(大毛花)的核磁共振碳谱5-杂交一代的核磁共振碳谱6-金银花的标准核磁共振碳谱7-金银花的标准核磁共振氢谱8-受潮变质蒙花(大毛花)的核磁共振氢谱9-金银花的标准核磁共振碳谱10-受潮变质蒙花(大毛花)的核磁共振碳谱
具体实施例方式
实施例1.对不同品种金银花的核磁共振指纹图谱将样品粉碎，过40目筛，称取样品5克，加50ml乙醇，在水浴上回流30分钟，滤取提取液，将溶剂挥发后得到提取物。测试提取物的1HNMR(见图1-1，2)谱和13CNMR谱(见图2-4，5)，并将其与金银花对照药材的1HNMR(见图1-3)谱和13CNMR(见图2-6)谱比较，根据相似程度判断其真伪。
实施例2.对不同品质金银花的核磁共振指纹图谱所用劣质金银花为保存过程中受潮变质的金银花，将样品粉碎，过40目筛，称取样品5克，加50ml乙醇，在水浴上回流30分钟，滤取提取液，将溶剂挥发后得到提取物。测试提取物的1HNMR谱(见图3-7)和13CNMR谱(见图4-9)，并将其与金银花对照药材的1HNMR谱(见图3-8)和13CNMR谱(见图4-10)比较，根据相似程度判断其优劣。
实施例3.北沙参的核磁共振指纹图谱将样品粉碎，过40目筛，称取样品5克，加50ml甲醇，在水浴上回流30分钟，滤取提取液，将溶剂挥发后得到提取物。测试提取物的1HNMR谱和13CNMR谱，并将其与北沙参对照药材的1HNMR谱和13CNMR谱比较，根据相似程度判断其真伪。
实施例4.不同厂家六味地黄丸的核磁共振指纹图谱将样品切碎，过40目筛，称取样品5克，加50ml甲醇，在水浴上回流30分钟，滤取提取液，将溶剂挥发后得到提取物。测试提取物的1HNMR谱和13CNMR谱，并将其与北沙参对照药材的1HNMR谱和13CNMR谱比较，根据相似程度判断其真伪。
实施例5.对仅含水溶物的液体样品丹参注射液的核磁共振指纹图谱取注射液10ml，将水蒸干得到提取物。测试提取物的1HNMR谱和13CNMR谱，并将其与丹参注射液对照品的1HNMR谱和13CNMR谱比较，根据相似程度判断其真伪。
实施例6.银杏叶的核磁共振指纹图谱将样品粉碎，过40目筛，称取样品5克，加50ml丙酮，在水浴上回流30分钟，滤取提取液，将溶剂挥发得到提取物。测试提取物的1HNMR谱和13CNMR谱，并将其与银杏对照药材的1HNMR谱和13CNMR谱比较，根据相似程度判断其真伪。
本发明的优点是基于核磁共振检测方法的特点，核磁共振图谱具有单一性，即氢谱和碳谱的谱峰与每一个氢和碳都有严格的对应关系；全面性，即所测样品中的任一质子和碳原子都有其相关的谱峰；定量性，即谱图的信号的相对强弱反映混合物中各组分的相对含量；易辨性，即通过化合物的结构研究可归属指纹图谱中的各个信号。因此在规范的分离提取程序下，植物中药提取物的核磁共振图谱与植物中药品种间存在严格的对应关系，可以提供反映分子结构的一维特征信号(例如1HNMR和13CNMR)和二维特征信号(例如gHMQC，gHMBC等)，核磁共振检测可以提供反映分子结构特征的多维多息特征信号的优势，使核磁共振指纹图谱鉴别技术能够提供大量的特征信号从多方面，多角度来描述样品的结构特征，从而使中药核磁共振指纹图谱鉴别技术真正达到了重复性高、特征性强、信息量大、使用范围广、鉴别效果准确的优势。
本发明通过测定检品的核磁共振图谱，将其图谱与其对照品的核磁共振图谱或与已建立的中药材和中成药的标准核磁共振波谱库进行比较，同时也可以利用计算机自动检索波谱库进行辅助判断，确定检品的真伪优劣。
使用本发明可以使天然植物或以天然植物原料为主的中药材、中成药以及其各种提取物和添加剂获得其特征的核磁共振指纹图谱。该图谱可用于中药样品的品种鉴定和真伪鉴别以及对产品质量的稳定性考察。不同药材核磁共振谱图是其所有成分磁共振谱图的叠加，是中药材整体化学特征的反映。每种药材核磁共振谱图的轮廓是相对固定的，因此可以看作是一个稳定的谱图，从这个意义上来说，核磁共振指纹图谱鉴别技术就成为类似药材外形鉴别的特殊图形的宏观形态鉴别方法，但它独立于传统的形态学和组织学特征之外，而其准确性则能有效地减少人的主观判断造成的错误，从而使其图谱特征的差异较其形态特征差异更具直观性。同时核磁共振图谱上不同位置的特征峰则反映了中药含有的特征化学成分的存在和结构特征，从微观上反映中药的化学特征。
本发明的方法可以对中药生产、贮存、加工以及最终产品进行全程的质量控制，从而保证产品的质量，提高产品的信誉。
权利要求
1.一种中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法，其特征在于取5-20克样品，加50-200毫升低分子量的极性溶剂，于水浴上加热回流30-120分钟，滤取提取液，将溶剂挥发，残余物称重。取1-15毫克残余物进行核磁共振分析，与相应对照品的核磁共振图谱进行比较。
2.根据权利要求1所述的中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法，其特征在于所述的低分子量的极性溶剂是甲醇。
3.根据权利要求1所述的中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法，其特征在于所述的低分子量的极性溶剂是乙醇。
4.根据权利要求1所述的中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法，其特征在于所述的低分子量的极性溶剂是水。
全文摘要
本发明公开了一种中草药核磁共振指纹图谱鉴别方法，其特征在于取5－20克样品，加50－200毫升低分子量的极性溶剂，于水浴上加热回流30－120分钟，滤取提取液，将溶剂挥发，残余物称重。取1－15毫克残余物进行核磁共振分析，与相应对照品的核磁共振图谱进行比较。所述低分子量的极性溶剂是指乙醇、甲醇、水、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等。本发明的优点是基于核磁共振图谱具有单一性、全面性、易辨性，能够提供大量的特征信号从多方面，多角度来描述样品的结构特征，从而使中药核磁共振指纹图谱鉴别方法真正达到了重复性高、特征性强、信息量大、使用范围广、鉴别效果准确的优势。该方法可以应用于天然植物或以天然植物原料为主要防治疾病的中药材、中成药以及其各种提取物和添加剂的品种鉴定和真伪鉴别。
文档编号G01N24/00GK1731163SQ20051004439
公开日2006年2月8日 申请日期2005年8月10日 优先权日2005年8月10日
发明者孙庆雷, 林云良, 王晓, 程传格, 刘建华, 李福伟, 耿岩玲 申请人:山东省分析测试中心