早产的检测的制作方法

专利名称：早产的检测的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于在妊娠哺乳动物中检测早产(preterm labour)的方法。特别地，但不是排他性地，本发明涉及用于人类的这样一种方法。本发明的各方面涉及用于这样的方法的材料和制剂。
背景技术：
早产是新生儿中发病和死亡的重要原因。由于迅速的干预可能是有益的，所以早产的精确确定和检测对减少死亡率是关键的。精确确定还有助于确定是否有必要使母亲就医，以允许所述需要的干预。此外，早产的不准确确定能导致不必要的住院治疗，这将引起母亲的压力和不适，以及使用稀有的卫生保健资源。
目前早产诊断中所用的标记包括唾液雌三醇，胎儿纤连蛋白，和胰岛素样生长因子蛋白1。唾液雌三醇检测通过ELISA(酶联免疫吸附测定)方式检测到样品中雌三醇的升高水平，据信其为早产的预示。胎儿纤连蛋白通常从子宫颈采样检测到，并且认为这种蛋白的不存在为妊娠继续的指示。
然而这些方法被认为是不可靠的，并且是不令人满意的。例如，美国产科医师和妇科医师学院(American College of Obstetricians andGynecologists)并不推荐唾液雌三醇检测作为用于早产的筛选工具，原因在于其产生高百分率的假阳性结果，并且可能潜在地给产前保健增加显著的成本和不必要的干预。类似地，由于尽管认为阴性结果对于确定分娩没有开始是可靠的，但是阳性结果较不可靠，所以不推荐胎儿纤连蛋白检测用于常规筛选。
因此，用于诊断早产的其它方法是期望的。
发明概述本发明依赖于识别早产的新标记。按照本发明的第一方面，提供在哺乳动物中用于诊断早产的方法，其包括检测受试哺乳动物中内源大麻素(endocannabinoid)的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为受试哺乳动物中上升的水平为早产的征兆。
所述哺乳动物可以为灵长类，并且优选地为人类。
所述检测到的水平优选地在妊娠过半时检测。更加优选地，所述水平在妊娠晚期期间，并且便利地在或者临近产期时进行检测。人的妊娠晚期可以指第三个三个月或者更晚，优选地在第三个三个月阶段后(大于35周)；更加优选地产期是指大于等于37周。
优选地，所述内源大麻素为花生四烯酸乙醇酰胺(也已知为廿碳四烯酰乙醇酰胺(arachidonylethanolamide)或AEA)。在本发明的备选实施方案中，所述内源大麻素可以为2-花生四烯酰甘油，或棕榈酰乙醇酰胺。
所述参考水平可以基于同一受试哺乳动物在妊娠早期检测到的水平，但是优选地基于该种类哺乳动物的典型非产期妊娠水平。所述典型水平可以基于产期中期的水平；例如，当所述方法用于人时，参考水平可以基于第二个或者第三个三个月的水平。
所述方法还可以包括从受试哺乳动物采集用于检测的样品的步骤。所述样品可以取自血液，血浆，唾液，痰液，子宫颈或阴道涂片或拭子。所述检测可以在体内进行，或者优选地在体外进行。
内源大麻素水平的检测可以以任何适当的方式进行；例如，通过HPLC，抗体，受体，结合分子等方式。在特定实施方案中，检测可以包括应用结合内源大麻素的抗体；这些抗体可以用允许检测的荧光或者放射性标记进行标记，或者它们本身可以随后用标记的二级抗体或酶检测。备选地，所述抗体可以用于将内源大麻素从溶液中沉淀出来。抗体可以在溶液中，或者黏附于固体支持物上。可以应用受体或者结合分子来检测内源大麻素；例如，已知受体CB1和CB2与AEA结合，并且可以用于检测AEA。
在本发明的特定实施方案中，可以间接检测内源大麻素水平。例如，据信酶脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)降解AEA，并且下降的FAAH水平与升高的AEA水平相关。因此，可以认为FAAH水平的检测为AEA水平的指示。
按照本发明的另一方面，提供在哺乳动物中用于诊断早产的方法，其包括检测受试哺乳动物中酶脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为受试哺乳动物中下降的水平是早产的征兆。
所检测的水平优选地在妊娠过半时检测。更加优选地，所述水平在妊娠晚期期间，并且便利地在或者接近产期时进行检测。人类妊娠晚期可以指第三个三个月或者更晚，优选地在第三个三个月阶段后(大于35周)；更加优选地产期是指大于等于37周。
本发明的各方面还提供内源大麻素在哺乳动物中用于诊断早产的方法中的应用，所述方法包括检测受试哺乳动物中内源大麻素的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为受试哺乳动物中上升的水平为早产的征兆。本发明还涉及内源大麻素在诊断方法中的应用。本发明还提供FAAH在哺乳动物中用于诊断早产的方法中的应用，所述方法包括检测受试哺乳动物中FAAH的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为受试哺乳动物中下降的水平为早产的征兆。
本发明还提供用于诊断哺乳动物的早产的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测样品中内源大麻素水平的试剂。所述试剂盒还包括关于使用所述试剂的使用说明。所述试剂可以包括针对内源大麻素的抗体，或者可以包括内源大麻素的受体或其它结合分子。可以将所述抗体或者结合分子标记，例如用荧光或放射性标记；备选地，所述试剂盒可以包括用于检测结合的抗体或者结合分子的其它试剂。所述试剂盒还包括从受试哺乳动物采集样品的工具；例如，拭子，注射器等。
本发明还提供治疗哺乳动物早产的方法，所述方法包括降低经历早产的受试哺乳动物中的内源大麻素水平。所述内源大麻素优选为AEA。所述内源大麻素水平可以通过施用针对AEA的抗体或者其它结合分子而降低；或者可以通过施用降解内源大麻素的酶，诸如FAAH而降低。备选地，所述内源大麻素可以为2-花生四烯酰甘油或棕榈酰乙醇酰胺。本发明还提供内源大麻素在制备用于治疗哺乳动物早产的药物中的应用；和FAAH在制备用于治疗哺乳动物早产的药物中的应用。
本发明还提供在受试哺乳动物中诱导分娩的方法，所述方法包括在受试哺乳动物中将内源大麻素的有效水平(effective level)升高。所述内源大麻素优选为AEA。所述方法可以包括施用AEA本身的步骤，或者可以包括施用其类似物。备选地，可以降低FAAH水平，或者可以施用AEA的竞争剂以结合FAAH，由此降低其有效水平。备选地，所述内源大麻素为2-花生四烯酰甘油或棕榈酰乙醇酰胺。
附图简述现在将仅通过实例和参考附图的方式，描述本发明的这些和其它方面，所述附图显示

图1.在绝经后妇女，处于月经周期，妊娠，和产期的未分娩和分娩期间的妇女中的血浆AEA水平。
图2.取样时血浆花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)水平和收缩持续时间之间的关系。
图3.血浆花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)水平和从取样到分娩的间隔之间的关系。
图4.取样时血浆花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)水平和子宫颈扩张之间的关系。
附图详述引言内在大麻素，内源大麻素，是作为大麻素受体的配体的不饱和脂肪酸衍生物1。廿碳四烯酰乙醇酰胺或花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)，是从脑组织中分离的首个内源大麻素2。应答去极化剂，激素和神经递质，它从细胞膜磷脂前体酶促释放3，4。认为AEA水平受下列因素控制其通过花生四烯酸乙醇酰胺转运蛋白的细胞吸收5，6，和其通过膜结合的脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)7-10以及其它酶11-13的随后酶促降解作用。AEA通过与血浆膜大麻素受体的相互作用发挥作用。已经报道了两种亚型的大麻素受体，CB1和CB214-17，其属于G蛋白偶联受体超家族18。它们位于包括生殖道(reproductive tract)在内的不同组织类型中。CB1受体被称为中枢受体，因为其首先位于中枢神经系统中19，而CB2受体被称为外围受体，因为其首先位于脾脏和其它位点17，20，21。
已经发表了在人和动物模型中关于在大麻中存在的外生大麻素对于妊娠的副作用的一些流行病学和观察研究。这些作用从早期流产(foetalloss)，胎儿生长限制到早产22-26。通过比较，存在相对少的关于内源大麻素在妊娠中的作用的报道。在小鼠中，已经提出AEA在子宫植入的局部调控中起着重要作用27，原因在于AEA表现出胚胎毒性并且抑制胚胎发育28。在植入位点，组织AEA水平只有在非植入位点的水平的25％29。这被认为是由于FAAH的局部组织水平导致，与非植入位点相比较，所述FAAH在植入位点高水平表达30。由于CB1R在人子宫肌膜中表达，并且通过AEA体外激发这一受体导致子宫肌带(myometrial strips)的松弛，所以更近的研究表明内源大麻素(例如AEA)在子宫肌膜中进一步的潜在作用31。最近已经在人胎盘和肽体膜中鉴别了CB1R和FAAH的免疫反应性32，这表明，在妊娠过程中，所述内源大麻素系统也可能在这些组织中是重要的。
在人妊娠过程中，可以获得很少的关于AEA系统水平的信息。然而，在早期妊娠期间，在外周血单核细胞中，血AEA水平与FAAH水平反相关33，并且由于与那些妊娠进展超过第一个三个月的妇女相比较，在随后流产的妇女中，妊娠8周的FAAH水平更低，这表明顺利的妊娠进展需要低AEA水平34。与那些经历顺利的进行妊娠(ongoing pregnancies)的患者相比较，在经过IVF治疗和胚胎转移没能完成进行妊娠的患者中，已经表明血浆AEA水平更高，并且这由外周血单核细胞中更低的FAAH水平反映出33。尚未确定这些差异是否受在调节植入并且维持早期妊娠的性甾醇中的各种变化的影响或者取决于这些变化。然而，在AEA水平和妊娠确立之间以及任何其它作用中的关系是不清楚的，原因在于超过第一个三个月或者确实在月经周期期间，不报道AEA水平。在过去，这样的研究受到方法学难度的妨碍，但是用于AEA检测的工具和技术已经得到了改进并且继续改进35。
首先，我们的目标是改进并且验证所建立的检测人血浆中AEA的方法，然后首次应用这种方法来确定在月经周期和正常妊娠中的AEA血浆水平。
受试者和方法受试者所有的受试者给出签署的参与本研究的知情同意书，其由当地的研究道德委员会(research ethics committee)核准。为了确定妊娠期间AEA水平变化的目的，我们交叉研究了5组妇女第一个，第二个和第三个三个月，产期未分娩和产期分娩。所述第一个三个月定义为月经后6-11周，第二个为月经后15-27周，和第三个为月经后28-35周。产期定义为月经后完整的37-42周。
对于妊娠妇女的包括标准为从在月经后6-8周进行的第一个三个月的超声扫描的准确确定日期的妊娠，简单的单胎妊娠和没有共存的母亲或者妊娠疾病。没有人服用任何药物或者已知已经服用了消遣药物(recreationaldrugs)。只有确定分娩(定义为至少4cm的子宫颈扩张和每隔10分钟3-4次规律的子宫收缩)的妇女包含在产期分娩组中。
将非妊娠妇女分成2组绝经期前和后。对于绝经期前妇女的包含标准包括年龄在22-40岁，身体质量指数(BMI)＜27kg/m2，在至少3个月内没有进行任何激素避孕或治疗，没有服用任何药物或经受任何内科疾病的折磨。基于从患者报告的最后月经期日期评估的月经周期(卵泡第2-7天和黄体第20-25天)，在2个亚组中收集样品。对于绝经期后妇女的包含标准包括在绝经后最少2年，BMI＜27kg/m2，年龄在55-60岁之间，在之前的3个月没有进行激素替代疗法并且没有服用任何药物(例如，糖皮质激素，抗高血压药，止痛剂，消遣药物)或经受任何内科疾病的折磨。
N-花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)测定基于早先报道的同位素稀释方法36，通过高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)测量血浆AEA。在冰上在EDTA管中收集血样(4ml)，并且添加到含有2ml的Krebs-Tris-EDTA缓冲液的聚丙烯管中。将样品在22℃以1200×g离心30min，以将血浆与细胞分离。回收后，对血浆掺加25.1pmol氘标记的AEA(d8-AEA，Cayman chemicals，Ann Arbor，USA)，以评估脂质萃取步骤的效率。通过添加冰冷的丙酮沉淀蛋白，接着在22℃以1000×g离心10min。然后，通过添加甲醇∶氯仿(1∶2)(1∶1 vol∶vol)在上层清液进行脂质萃取。回收氯仿层，并且在甲醇∶氯仿(3∶1)重构前将所述样品在氮气气流下干燥。将再生样品的一式两份的注射剂(10μl)用于HPLC-MS分析。
HPLC-MS系统由Waters 1525二元液相色谱泵和配有100μl注射环的Waters 717+自动进样器组成。HPLC与Quattro Ultima triple quadnipole质谱仪通过Z-喷雾离子源接口，并且通过MassLynx NT软件v3.5(Waters MSTechnology，Manchester，UK)控制。反相色谱分离在Hypersil ODS C18柱(4.6×100mm，3μm微粒大小；Phenomenex，Macclesfield，UK)上进行。应用柱温控制器(Jones Chromatography，Hengoed，UK)将柱温维持在30℃，并且所述样品在冷冻注射系统中维持在4℃。流动相由水(A)和甲醇(B)组成，其应用甲醇的逐步递增以0.5ml/min运送，如此25％A，75％B，2min；15％A，85％B，3min；5％A，95％B，20min；100％B，5min；然后通过改变缓冲条件至25％A，75％B，20分钟，进行柱再平衡步骤。在这些条件下，对于AEA和AEA-d8的保留时间分别为17.12和16.98分钟。
应用氮气作为雾化气体，以正模式进行电雾化离子化。毛细管电压设为3.5kV，锥形电压(cone voltage)50V，源温度120℃，和去溶剂化温度350℃。通过应用灌输泵以1ng/μl的灌输标准，确定用于AEA-d0和AEA-d8分析的质谱参数。在所选择的离子记录模式中，应用所述分子离子的钠加合物[M+Na+；m/z＝370.3(d0)和378.3(d8)]进行量化。所述测量表示为在AEA-d0曲线下的面积在AEA-d8曲线下的面积的峰值面积比例，并且从相对于注射到HPLC的已知的AEA-d0量(Cayman chemicals，AnnArbor，USA)的峰值面积比例的曲线上，直接对用等量的AEA-d8掺加的血浆样品中AEA的量进行量化。标准曲线线性达到2pmol AEA-d0，具有注射到柱上的0.03125pmol AEA-d0的检测下限。对于检测范围(0.03-2.1pmol/柱)，内和交互检测变异系数分别为6％和9％。
将所有的血样在收集的2小时内处理。在这段时间内没能处理所述样品导致AEA的降解(数据没显示)。
统计学分析具有α＝0.05和β＝0.8的所发表的AEA数据33的幂分析(poweranalysis)表明，每个研究组需要的能够允许观察到血浆AEA浓度显著变化的最小受试者数目为6。因此，我们确保每个样品组包括至少6名受试者(表I)。数据表示为平均值±平均值的标准误差(SEM)或者标准偏差(SD)，其中适合每个测试组和组间比较的情形应用不成双的Student t-检验和用不等价标准偏差的Welch’s校正完成，并且认为p＜0.05是统计学显著的。
结果受试者研究120名妊娠，月经期和绝经后的妇女。在第一个，第二个和第三个三个月每组10名，在产期和未分娩为22名，以及在产期和分娩组中为25名。表I显示这些妇女的详细情况。在育龄妇女的年龄平均值±SD中不存在显著差异，但是绝经后妇女的平均值±SD显著地大于非妊娠月经期组的值(57±2.0比较(cf.)32.7±6.1；P＜0.05)。产期未分娩和分娩妇女的妊娠年龄平均值±SD是相似的(39.3±1.3比较39.6±1.3；P＞0.05)。
表I.研究组的分布，年龄和妊娠年龄(数据表示为平均值，圆括号里为范围)。
在产期分娩组的25名妇女中，17名自然的阴道分娩，3名产钳分娩，和5名手术分娩(2名真空抽提和3名紧急剖腹产)。在取样时子宫颈扩张的平均值±SD为6.04±2.2cm(4-10cm范围)，而在血样收集前子宫收缩的平均持续时间为5.1±2.2小时(1.2-12小时范围)。在取样和分娩之间的时间间隔平均值±SD为5.3±4.3小时(0.5-11.8小时范围)。在取样前13名妇女在分娩中具有硬膜外止痛法，以及其余的(12名)在分娩中只有一氧化二氮和氧气组合，该组合在分娩中也称为“气体和空气(gasand air)”。
N-花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)水平在妊娠期间，不包括分娩妇女的AEA水平从第一个三个月的0.89±0.14nM下降到第二个三个月的0.44±0.12nM和第三个三个月的0.44±0.11nM(P＝0.04)，并且此后在产期未分娩组中上升到0.68±0.09nM(P＝0.03)。然而，在产期分娩妇女的所述水平中存在非常显著的变化，其中它们比产期未分娩妇女的值上升了3.7倍，并且比第三个三个月的值上升6倍，达到2.5±0.22nM。产期分娩和第一个三个月，第二个三个月和第三个三个月以及未分娩水平之间的差异都是统计学显著的(P＜0.0001)。
在月经期妇女中，卵泡期AEA水平(1.68±0.16nM)显著高于黄体期的AEA水平(0.87±0.19nM)；(P＜0.0053)。在绝经后妇女中的水平(0.67±0.01nM)显著低于在卵泡期的水平(P＝0.0002)，但是并不显著低于在黄体期的水平。
当将在月经期和绝经后妇女中的AEA水平与处于妊娠期间的AEA水平相比较时，出现了显著的模式。这些模式在图1中显示。绝经后(0.67±0.01nM)和黄体期水平(0.77±0.19nM)与在第一个三个月的水平相似，高于第二个三个月和第三个三个月和未分娩产期水平(但是非统计学上地，P＞0.05)，但是显著低于产期分娩组的水平(P＜0.0002)。卵泡期水平显著高于(P＜0.001)妊娠期间的水平，但是显著低于(P＜0.005)分娩组的水平。
图2显示血浆AEA水平和直到取样时的收缩持续时间之间的关系。在AEA水平和这种持续时间之间存在直接的线性关系(r2＝0.2193，p＜0.0182)。基于分娩的完整持续时间，将分娩妇女进一步分成3组(组I＝0-5小时，组II＝5.1-10小时和组III＝10.1-15小时)。在所述3组中，AEA水平平均值±SEM分别为2.1±1.04nM，2.58±0.95和3.8±1.15nM。尽管对于AEA值存在随着分娩时间增加而增加的趋势，这并没有获得统计学显著性(P＞0.05)。图3显示取样时AEA水平和从取样到分娩的时间之间的逆相关关系。图4显示取样时子宫颈扩张和血浆AEA水平之间的关系；(r2＝0.092，P＝0.1)。血浆AEA，与取样和分娩之间的时间间隔之间的关系在图4中显示(r2＝2.113，P＝0.02)。
在取样前具有硬膜外止痛法的13名妇女中的水平(2.24±0.32)，与在取样前并且持续她们剩余的分娩只有entonox‘气体和空气’的12名中的水平(2.78±0.30)相似。这些妇女没有一人接受麻醉剂。
讨论我们的结果证明，在妊娠和分娩期间AEA水平的显著变化。血浆AEA水平从第一个三个月下降到第二个和第三个三个月，在第二个和第三个三个月之间没有变化。在临床上明显的分娩开始发作前的产期所述水平上升，并且在分娩期间进一步上升到代表从第三个三个月的水平增加6倍。
Macarrone及同事的研究33证明，在IVF妊娠中，低血浆AEA水平与超过妊娠的第一个三个月发展的妊娠相关，这表明顺利发育的孕体(conceptus)抑制血浆AEA的系统水平。正常的胎儿发育和妊娠维持可能需要这种抑制，这得到高AEA水平与流产具有相关性的支持33。还已知在小鼠中内源大麻素具有对顺利妊娠的副作用(Yang等，1996；Schmid等.1997，Paria等.1999，Macarrone等2000)。已经证明，在胚泡时期和在胚泡孵化时，所述高水平妨碍2-细胞小鼠胚胎的发育(Yang等，1996)，一种机制，其可能与早期发生的妊娠失败和生长限制相关。对于具有低水平AEA的环境的需求得到外源大麻素的作用的支持，所述外源大麻素在内源大麻素受体上作用，并且与流产，胎儿生长限制和早产相关22-26。
令人惊讶地，在我们的研究中，在第一个三个月检测到的水平，其与在顺利的IVF妊娠中报道的那些水平相似(Macarrone等2000)，与在月经周期的黄体期的那些水平相似。这暗示，所提议支持早期妊娠需要的低的AEA水平已经在黄体期确定，其使得成功植入，并且所述成功的妊娠代表这些被抑制的水平的成功维持。在绝经后妇女的低水平和在卵泡期的高水平，表明甾醇激素主要调控AEA水平，随着雌二醇增加，所述水平和孕酮抑制它们。孕酮的作用可能导致通过外周血单核细胞调控外周AEA的降解，原因在于这些细胞中的FAAH水平，参与AEA降解的主要酶，受到孕酮的调控37，38。由于据报道雌二醇增加AEA从这些细胞到循环的释放，所以由雌二醇诱导的高AEA水平可能受到其对内皮细胞作用的调节39。
然而，这些考虑不能说明在临床上明显分娩开始发作之前的产期和紧接着在分娩期间的AEA水平的显著增加，此时在系统甾醇激素水平上没有变化。由于在AEA浓度和在分娩期间使用的硬膜外止痛法之间没有相关性，所以AEA浓度的增加不可能归因于疼痛。除非AEA的产生专一地由分娩激发，否则甾醇激素控制其产生和降解的早先的考虑将可以解释，如对于子宫提议的那样(ref)，是否在外周血单核细胞中发生‘功能性孕酮退隐(functional progesterone withdrawal)’，以致由孕酮诱导的FAAH不能允许AEA水平上升。
这些观察回避了AEA在生产和分娩中可能的功能的问题实质。分娩与在所有生殖组织中作用的前列腺素的局部增加的产生相关44，并且由于AEA作为花生四烯酸的储存库，AEA水平的上升将会提供巨大的用于产生前列腺素的前体储存库。早产过程中是否发生同等的AEA上升尚等待进一步的研究。大麻素受体，CB1和CB2，存在于子宫中(REF)，并且这些受体的体外刺激导致子宫肌带的松弛(REF)，假定在该研究中AEA的上升与分娩相关，其看起来是荒谬的。然而，可能地，如果大麻素受体在子宫内差异表达，那么在分娩过程中，AEA作用可能与更低的子宫部位内的子宫肌膜细胞的松弛相关。这种解释可以得到我们的观察的支持，即，在先于临床上明显子宫收缩和分娩发作前的产期，以及当更低的子宫部位和子宫颈扩张发生时期间，AEA水平上升。
总之，这些观察强调了内源大麻素在人妊娠维持和分娩中的潜在作用。
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权利要求
1.一种用于诊断哺乳动物早产的方法，其包括检测受试哺乳动物中内源大麻素的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为在所述受试哺乳动物中上升的水平为早产的征兆。
2.权利要求1的方法，其中所述哺乳动物为人类。
3.权利要求1或权利要求2的方法，其中所述内源大麻素是选自由2-花生四烯酰甘油，棕榈酰乙醇酰胺和花生四烯酸乙醇酰胺组成的组。
4.权利要求3的方法，其中所述内源大麻素为花生四烯酸乙醇酰胺(AEA)。
5.前述权利要求中任一项的方法，其中所述参考水平是基于对于所述种类的哺乳动物的典型的非产期妊娠水平。
6.权利要求5的方法，其中所述参考水平是基于产期中期水平。
7.前述权利要求中任一项的方法，其还包括从受试哺乳动物中采集用于检测的样品的步骤。
8.权利要求7的方法，其中所述样品是从血浆采集的。
9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述检测是在体外进行的。
10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述检测是借助内源大麻素的抗体进行的。
11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述检测步骤包括检测受试哺乳动物中脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)水平。
12.一种用于诊断哺乳动物早产的方法，其包括检测受试哺乳动物中酶脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为受试哺乳动物中下降的水平是早产的征兆。
13.前述权利要求中任一项的方法，其中所述检测到的水平是在妊娠晚期期间检测的。
14.权利要求13的方法，其中所述检测到的水平是在或者临近产期时检测的。
15.前述权利要求中任一项的方法，当在人身上进行时，其中所述检测到的水平是在第三个三个月或者更晚时检测的。
16.权利要求15的方法，其中所述检测到的水平时在35周或者更晚时检测的。
17.内源大麻素在用于诊断哺乳动物早产的方法中的应用，所述方法包括检测受试哺乳动物中内源大麻素的水平，并且将检测到的水平与参考水平相比较，认为受试哺乳动物中上升的水平为早产的征兆。
18.一种用于诊断哺乳动物的早产的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测样品中内源大麻素的水平的试剂。
19.权利要求18的试剂盒，其还包括关于所述试剂的使用的使用说明。
20.权利要求18或19的试剂盒，其中所述试剂包括针对所述内源大麻素的抗体。
21.权利要求18-20中任一项的试剂盒，其还包括从受试哺乳动物中采集样品的工具。
22.一种治疗哺乳动物早产的方法，所述方法包括降低经历早产的受试哺乳动物中的内源大麻素的水平。
23.内源大麻素在制备用于治疗哺乳动物早产的药物中的应用。
24.一种诱导受试哺乳动物分娩的方法，所述方法包括在受试哺乳动物中升高内源大麻素的有效水平。
全文摘要
本发明描述一种在哺乳动物中用于诊断早产的方法，其包括测量受试者中内源大麻素，诸如花生四烯酸乙醇酰胺的水平。升高的水平为早产的征兆。所述测量典型地在妊娠晚期，诸如人类的第三个三个月进行。在特定的实施方案中，内源大麻素水平可以间接测定，例如通过测量脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)水平来测定。
文档编号G01N33/94GK1977169SQ200580014584
公开日2007年6月6日 申请日期2005年3月2日 优先权日2004年3月8日
发明者J·科涅 申请人:莱斯特大学