专利名称：一种鉴别华南忍冬和金银花的方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明公开了一种鉴别华南忍冬和金银花的方法及其应用，属于药物分析 领域。
背景技术：
华南忍冬在2005年版《中华人民共和国药典》之前的各版中作为金银花 中的一个来源收载，2005年版《中华人民共和国药典》( 一部)将二者区分开， 但两者来源科属相同、品种相似，性味、鉴别、功能与主治、用法与用量相同， 含量测定项均为高效液相色谱法测定绿原酸含量，方法及限度相同，区别在于 金银花增加了木犀草苷含量测定项，但文献报道华南忍冬亦含有木犀草香。根 据文献报道，标准分列的主要原因是"中药材内含成分差别较大的多来源品种, 按一物一名的原则逐步分列"，表示其化学成分或有效成分的含量不同。
中药复方制剂中的投料药材为华南忍冬还是金银花， 一直无法区分。国家 食品药品监督管理局规定投料药材必须固定品种，从而保证制剂质量的稳定、 均 一 ，因此区分华南忍冬和金银花是急需解决的技术问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服已有技术的困难，目的在于提供一种高 效、可靠的鉴别华南忍冬和金银花的方法。
本发明的另一目的是提供上述方法的应用。 本发明通过以下技术方案实现上述目的
一种鉴别华南忍冬和金银花的方法，是利用薄层色镨法对华南忍冬和金银 花进行区分；所述薄层色谱法的色语条件为对照品溶液绿原酸和咖啡酸混合 的曱醇溶液，各组分浓度均为lmg/ml，供试品溶液为药材的甲醇溶液；薄层 板为以羧曱基纤维素钠为黏合剂的硅胶H板或G板；点样量0.1 20^1;展开 剂为乙酸丁酯-曱酸-水(7:2.5:1-3)的上层溶液或氯仿-曱醇-曱酸(9:1:0.5); 紫外光灯365nm下检视。
检视的结果为供试品色语中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同
3颜色的荧光斑点。华南忍冬供试品薄层色谱中，可以看到一系列的特征斑点， 通过与绿原酸，咖啡酸对照品对照，两个展开系统对比，能够清晰看到华南忍 冬具有的3个特征斑点区别于金银花的蓝色荧光斑点，因此可以区分金银花与 华南忍冬。
更进一 步的，结合高效液相色谱对华南忍冬和金银花进行区分 高效液相色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸
溶液(12:88)为流动相；检测波长为310 ~ 340nm;理论塔板数按咖啡酸峰计
算不低于1000。
对照品溶液的制备精密称取绿原酸和咖啡酸对照品适量，置棕色并瓦中， 加50%曱醇溶液制成每lml含绿原酸40pg、咖啡酸8吗的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品粉末(过四号筛)0.1 10g ，精密称定，置具 塞锥形瓶中，精密加入50。/。曱醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频 率35kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%曱醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50%曱醇至刻度，摇匀， 即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 lOy,注入色谱仪， 测定，即得。本品按干燥品计算，10批华南忍冬和金银花中的绿原酸((:16111809) 含量2.4~3.9%,两种药材的含量相当；华南忍冬的咖啡酸(C9H804)含量范 围大约在0.1% ~ 0.23%，而金银花中咖啡酸含量大约0.02% ~ 0.03%，华南忍 冬的咖啡酸含量是金银花的IO倍左右。
本发明还提供上述筌别方法的应用，是应用于鉴别含有华南忍冬或金银花 的药物制剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
本发明的鉴别方法可用于金银花或华南忍冬药材真伪及品质优劣的评价， 可用于区分金银花药材与华南忍冬药材，还可用于制剂中投料药材的品质评 价，保证其质量的稳定、均一，可控。本发明的方法具有操作简便、重现性好、 直观性强等优点。
图1和图2是本发明的华南忍冬与金银花薄层色谱定性图镨，置紫外光灯 365nm下检视，点样顺序1 ~ 2.金银花供试品溶液(依次为对照药材121060-200504,市售品)，3.绿原酸对照品，4.咖啡酸对照品，5~14.10批华 南忍冬供试品溶液。图1展开剂为乙酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:1)的上层溶液， 图2展开剂为氯仿-曱醇-曱酸(9:1:0.5)。图中A、 B、 C、 D为特征斑点，其中 A为绿原酸、B为咖啡酸，两个展开系统对比，能够清晰看到蓝色荧光斑点B、 C、 D为可以区分金银花与华南忍冬的3个特征蓝色荧光斑点。
图3、图4、图5是本发明的高效液相色谱定量图谱，分别为绿原酸、咖 啡酸混合对照品、华南忍冬药材及金银花对照药材液相色谱图；图中33均为 绿原酸，34均为咖啡酸。
具体实施例方式
以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案。 实施例1
1仪器与试药
1.1 仪器戴安Dionex公司高效液相色谱仪(ASI-100自动进样器、 ATH-585柱温箱、P680四元梯度泵、PDA-100 4全测器)；
色语柱Dikma PLATISIL ODS C18,250mm x4.6mm,5|jm;
预制硅胶H薄板、G薄板(玻璃片基20x20cm浙江省台州市路桥四曱生 化塑料厂)；
CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER薄层自动点样仪、CAM AG TLC REPROSTAR薄层自动成像系统、CAMAG双槽展开缸(瑞士 CAMAG公司)；
1.2试药10批华南忍冬药材及口炎清颗粒、金银花对照药材，均由广 州白云山和记黄埔中药有限公司提供。实验中液相色谱所用试剂乙腈均为色谱
纯，其余所用试剂均为分析纯，水为超纯水。 2方法与结果
2.1 口炎清颗粒中华南忍冬的薄层鉴别取本品10袋，研细，取约10g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处 理(功率360W,频率35kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用曱醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml,减压回收溶剂至干，残渣加水 约5ml溶解，定量转移至固相萃取小柱(填料C18,规格6ml,500mg),加 水15ml分次淋洗，'淋洗液弃去，再用曱醇15ml分次洗脱，收集洗脱液，減压 回收溶剂至干，残渣定量加入曱醇2ml，使完全溶解，用0.45pm微孔滤膜滤
5过，作为成品供试品溶液。另取华南忍冬或金银花药材粉末0.2g,加曱醇提取， 滤过，滤液作为药材供试品溶液。再取绿原酸、咖啡酸对照品，加曱醇制成每 lml各含lmg的溶液，作为混合对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和 国药典》2005年一部附录VIB)试验，吸取成品供试品溶液、上述对照品溶液、 药材供试品溶液及成品供试品溶液各lOpl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为 黏合剂的硅胶H薄层板上，分别以乙酸丁酯-曱酸-水(7:2.5:1 3)的上层溶液 或氯仿-曱醇-曱酸(9:1:0.5)为展开剂，展开约15厘米，取出，晾干，置紫外 光灯(365nm)下检视。以展开剂前者所得图像见图1，以展开剂后者所得图 像见图2。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点。
2.2 高效液相色谱分析
供试品溶液的制备取药材粉末(过四号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频汆 35kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%曱醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，精密量取续滤液2ml，置10ml棕色量瓶中，力口50%曱醇至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液的配制精密称取绿原酸和咖啡酸对照品适量，置棕色瓶中， 加50%曱醇溶液制成每lml含绿原酸40)Lig、咖啡酸8叫的溶液，即得。
色谱条件色错柱为Dikma PLATISIL ODS C18 ，250mm x4.6mm，5|im;流 动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(p形2.50) ( 12:88)为流动相，流速1.0ml/min,检 测波长为327nm。
测定法精密吸取对照品及供试品溶液10^1,进样，依法测定绿原酸和 咖啡酸的含量。
绿原酸和咖啡酸混合对照品色i普图见图3,华南忍冬药材液相色语图见图 4，金银花对照药材液相色谱图见图5。
IO批华南忍冬中绿原酸均达到药典规定的要求> 1.5%;咖啡酸最高含量 为0.23%，最低含量为0.10%。通过对比分析，华南忍冬和金银花的绿原酸含 量2.4~3.9%左右，两种药材的含量相当。IO批华南忍冬的咖啡酸(C9H804) 含量范围大约在0.1% ~ 0.23%,而金《艮花中咖啡酸含量大约0.02%-0.03%, 华南忍冬的咖啡酸含量是金银花的5 ~ 10倍。2.3 精密度试验精密吸耳又咖啡酸、绿原酸对照品混合溶液10|il,在以 上色谱条件下，连续重复进样6次，依法测定，计算咖啡酸、绿原酸对照品峰 面积的相对标准偏差分别为0.51%及0.88%，表明该方法的精密度好。
2.4重复性试验精密称取同一批号药材粉末6份，照上述供试品溶液 的制备方法及色谱条件操作测定，进样10iil，计算咖啡酸、绿原酸峰面积的相 对标准偏差分别为1.65%及2.31%，表明该方法的重复性好。
2.5 中间精密度试验精密称取同一批号药材粉末2份，分别在不同日 期、不同仪器变动因素条件下，按2.2高效液相色谱分析依法进行操作测定， 计算咖啡酸和绿原酸的含量及相对标准偏差。结果不同日期RSD: 1.33%，不 同仪器RSD-0.52。/。，表明该方法具有较好的中间精密度。
2.6加样回收率试验分别精密称取已知咖啡酸、绿原酸含量的药材粉 末适量，再分别精密加入一定量的对照品，使供试品溶液中咖啡酸、绿原酸浓 度分别在咖啡酸、绿原酸标准曲线的高、中、低三个浓度区域，每个浓度平行 操作3份，按2.2高效液相色语分析依法操作测定，计算回收率。结果咖啡酸、 绿原酸的平均回收率分别为99.6%及104.7%, RSD分别为2.16%及3.26%。表 明该方法回收率好，即准确度好。
权利要求
1. 一种鉴别华南忍冬和金银花的方法，是利用薄层色谱法对华南忍冬和金银花进行区分；所述薄层色谱法的色谱条件为对照品溶液绿原酸和咖啡酸混合的甲醇溶液，各组分浓度均为1mg/ml，供试品溶液为药材的甲醇溶液；薄层板为以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H板或G板；点样量0.1～20μl；展开剂为乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶1～3)的上层溶液或氯仿-甲醇-甲酸(9∶1∶0.5)；紫外光灯365nm下检视。
2. 如权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于进一步釆用高效液相色谱 法对华南忍冬和金银花进行区分；高效液相色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-磷酸 溶液(12:88)为流动相；进样量5-10^1;检测波长为310 ~ 340nm;理论塔板数按咖啡酸峰计算不低于1000;对照品溶液绿原酸和咖啡酸的混合的50%曱醇溶液，其中每ml含绿原 酸40pg、咖啡酸8iig;供试品溶液药材的50%甲醇的溶液；
3. 权利要求1或2所述鉴别方法的应用，是应用于鉴别含有华南忍冬或 金银花的药物制剂。
全文摘要
本发明公开了一种鉴别华南忍冬和金银花的方法，是利用薄层色谱法对华南忍冬和金银花进行区分；本发明还进一步采用高效液相色谱法对华南忍冬和金银花进行区分。本发明的鉴别方法可用于金银花或华南忍冬药材真伪及品质优劣的评价，可用于区分金银花药材与华南忍冬药材，还可用于制剂中投料药材的品质评价，保证其质量的稳定、均一，可控。本发明的方法具有操作简便、重现性好、直观性强等优点。
文档编号G01N30/90GK101520444SQ20091003737
公开日2009年9月2日 申请日期2009年2月24日 优先权日2009年2月24日
发明者关倩怡, 维 彭, 李楚源, 青 林, 峰 梁, 王德勤, 王永刚, 肖晓丽, 苏薇薇, 琳 黄 申请人:广州白云山和记黄埔中药有限公司;中山大学