专利名称：：一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法
技术领域：
：本发明涉及桑茶或桑叶活性组分的测定方法。
背景技术：
：桑叶，又名铁扇子、蚕叶，为桑科植物桑(MorusedbeiV.)的叶，全国大部分地区均有生产。除养蚕外，初霜采收的桑叶，除去细枝及杂质，晒干后便为传统中药材，还可以将桑叶制成桑茶，用于饮料、保健食品等方面。甘菊环和育亨宾是桑茶或桑叶中的主要药用活性成分，其中甘菊环的分子式为CltlH8,其药理作用是抗溃疡；育亨宾的分子式为=C21H26N2O3，它是一种可以从西非的茜草科植物育亨宾树(Pausinystaliayohimbe)的干燥树皮中提出的生物碱，主要用于治疗男性性功能障碍，还具有清风热、降肝火、消肿毒的功效。桑茶或桑叶中还含有丙氨酸(C3H7NO2)、1-甲基萘(C11Hltl)和苯乙酮(C8H8O),丙氨酸是组成人体蛋白质的氨基酸之一；1-甲基萘是一种赋香用的烃类活性香料，具有类似萘、樟脑的气息，用于调配干酪、葡萄、肉等食用香精和烟用香精；苯乙酮是酮类香料，具有类似苯甲醛的杏仁气息，稀释后具有甜的坚果、水果味道，用于调配樱桃、坚果、番茄、草莓、杏等食用香精，也可用于烟用香精中。目前，桑茶越来越受到广大消费者的青睐，目前利用GC/MS气质联用仪对桑茶或桑叶进行鉴定及检测时，要先对桑茶或桑叶进行前处理，把桑茶或桑叶中的活性成分先提取出来，然后进样至GC/MS气质联用仪中检测，现有的前处理方法有两种一是将桑茶或桑叶制备成精油，制备精油的操作过程复杂，需要3h24h，而且在制备精油过程中桑茶或桑叶中的成分易发生变化，不能真正反映出桑茶或桑叶的成分；二是利用固相微萃取技术将桑茶或桑叶中的活性成分萃取出来，这种方法采用的固相微萃取装置价格昂贵，而且由于固相微萃取的时间一般为0.5h2h，萃取量小，经常检测失败。
发明内容本发明是为了解决现有的利用GC/MS气质联用仪对桑茶或桑叶进行鉴定和检测时对桑茶或桑叶的前处理方法中，将活性成分制备成精油的方法过程复杂、不能真正反映桑茶或桑叶的成分和固相微萃取方法设备昂贵、萃取量小致经常检测失败的问题，而提供一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法。本发明的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法按以下步骤进行一、将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置24h28h，然后用内填200mgTenax-TA的Tenax-TA吸附管抽气吸附5h7h；二、连接热解析仪与GC/MS气质联用仪，将经步骤一处理的Tenax-TA吸附管放入热解析仪中，设置热解析仪的脱附温度为280°C320°C、脱附时间为5min7min，采用氦气吹扫进样，进样时间为Imin；GC/MS气质联用仪采用柱长30m、内径0.25mm、膜厚0.25mm的TR-5MS毛细管色谱柱，色谱柱升温程序为柱温先升至40°C保持lmin，然后以8°C/min升至90°C，再以15°C/min升至250°C保持8min；载气为氦气，柱流量lmL/min，进样量lmL，分流比1:30；GC-MS气质联用仪接口温度为270°C；质谱条件EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230°C，GC/MS气质联用仪的扫描范围40u450u，然后进行测定；三、根据峰面积用归一化法计算出桑茶或桑叶中活性组分的相对含量。甘菊环、育亨宾、丙氨酸、1-甲基萘和苯乙酮在桑茶或桑叶中含量较高且稳定性较好，甘菊环的相对含量为3.5%22.1%，育亨宾的相对含量为1.3%4.4%，丙氨酸的相对含量为1.1%2.3%，1-甲基萘的相对含量为4.1%12.2%，苯乙酮的相对含量为0.7%1.8%。将桑茶或桑叶先放置在密闭的干燥器中，桑茶或桑叶中的活性成分挥发出来，然后用Tenax-TA进行吸附，方法及过程简单，而且桑茶或桑叶中的活性成分只有挥发、吸附、热脱附过程，在280°C320°C的脱附温度下，活性成分不会发生任何性质改变，整个过程需要29h35h，操作简单易行，检测时间为30min60min，简便快速，而且经过计算机质谱库自动检索、解析，全部操作由机器设备完成，更准确可靠；Tenax-TA管的费用仅是固相微萃取装置的五百分之一，设备成本低，利用本发明的方法出峰不叠加，保留时间稳定，出峰效果好，检测成功率为100%。图1是具体实施方式十的6月桑茶的总离子流色谱图；图2是具体实施方式十的7月桑茶的总离子流色谱图；图3是具体实施方式十的8月桑茶的总离子流色谱图；图4是具体实施方式十一的9月干桑叶的总离子流色谱图；图5是具体实施方式十一的10月干桑叶的总离子流色谱图。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法按以下步骤进行一、将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置24h28h，然后用内填200mgTenax-TA的Tenax-TA吸附管抽气吸附5h7h；二、连接热解析仪与GC/MS气质联用仪，将经步骤一处理的Tenax-TA吸附管放入热解析仪中，设置热解析仪的脱附温度为280°C320°C、脱附时间为5min7min，采用氦气吹扫进样，进样时间为Imin；GC/MS气质联用仪采用柱长30m、内径0.25mm、膜厚0.25mm的TR-5MS毛细管色谱柱，色谱柱升温程序为柱温先升至40°C保持lmin，然后以8°C/min升至90°C，再以15°C/min升至250°C保持Smin；载气为氦气，柱流量lmL/min，进样量lmL，分流比1:30；GC-MS气质联用仪接口温度为270°C；质谱条件EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230°C，GC/MS气质联用仪的扫描范围40u450u，然后进行测定；三、根据峰面积用归一化法计算出桑茶或桑叶中活性组分的相对含量。本实施方式步骤二中所述的Tenax-TA是2，6_二苯呋喃多孔聚合物树脂。本实施方式将桑茶或桑叶先放置在密闭的干燥器中，桑茶或桑叶中的活性成分挥发出来，然后用Tenax-TA进行吸附，方法及过程简单，而且桑茶或桑叶中的活性成分只有挥发、吸附、热脱附过程，在280°C320°C的脱附温度下，活性成分不会发生任何性质改变，整个过程需要29h35h，操作简单易行，检测时间为30min60min，简便快速，而且经过计算机质谱库自动检索、解析，全部操作由机器设备完成，更准确可靠；Tenax-TA管的费用仅是固相微萃取装置的五百分之一，设备成本低，利用本发明的方法出峰不叠加，保留时间稳定，出峰效果好，检测成功率为100%。具体实施方式二本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置25h27h。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一中将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置26h。其它与具体实施方式一相同。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤一中用Tenax-TA吸附管抽气吸附5.5h6.5h。其它与具体实施方式一至三之一相同。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤一中用Tenax-TA吸附管抽气吸附6h。其它与具体实施方式一至四之一相同。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤二中设置热解析仪的脱附温度为285°C310°C。其它与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤二中设置热解析仪的脱附温度为300°C。其它与具体实施方式一至六之一相同。具体实施方式八本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是步骤二中设置热解析仪的脱附时间为5.5min6.5min。其它与具体实施方式一至七之一相同。具体实施方式九本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是步骤二中设置热解析仪的脱附时间为6min。其它与具体实施方式一至八之一相同。具体实施方式十本实施方式的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法按以下步骤进行一、将桑茶放在干燥器中密闭放置24h，然后用内填200mgTenax-TA的Tenax-TA吸附管抽气吸附5h；二、连接热解析仪与GC/MS气质联用仪，将经步骤一处理的Tenax-TA吸附管放入热解析仪中，设置热解析仪的脱附温度为300°C、脱附时间为5min，采用氦气吹扫进样，进样时间为Imin；GC/MS气质联用仪采用柱长30m、内径0.25mm、膜厚0.25mm的TR-5MS毛细管色谱柱，色谱柱升温程序为柱温先升至40°C保持lmin，然后以80C/min升至90°C，再以15°C/min升至250°C保持8min；载气为氦气，柱流量lmL/min，进样量lmL，分流比1:30；GC-MS气质联用仪接口温度为270°C；质谱条件EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230°C，GC/MS气质联用仪的扫描范围40u450u，然后进行测定；三、根据峰面积用归一化法计算出桑茶中活性组分的相对含量。本实施方式中的桑茶分别为6月、7月和8月的桑茶，6月桑茶的总离子流色谱图如图1所示、7月桑茶的总离子流色谱图如图2所示，8月桑茶的总离子流色谱图如图3所示，从图1、图2和图3可以看出，桑茶中各成分出峰不叠加，保留时间稳定，出峰效果好，6月、7月和8月的桑茶中各组分及其相对含量如表1所示。表16月、7月和8月的桑茶中各组分及其相对含量<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>从表1可以看出，保留时间分别为11.09min、lL06min和11.08min的化合物为甘菊环，6月、7月和8月的桑茶中该物质的相对含量分别为16.42%,9.74%和22.09%，而且甘菊环匹配度分别为909,933和927；保留时间分别为14.54min、14.53min和14.54min的化合物为育亨宾，6月、7月和8月的桑茶中该物质的相对含量分别为4.37%,2.90%和2.35%，而且育亨宾的匹配度分别为660、655和660；保留时间分别为1.43min、l.4Imin和1.43min的化合物为丙氨酸，6月、7月和8月的桑茶中该物质的相对含量分别为1.81%、2.25%和1.50%，而且丙氨酸的匹配度分别为783,723和874；保留时间分别为12.27min、12.27min和12.26min的化合物为1_甲基萘，6月、7月和8月的桑茶中该物质的相对含量分别为4.75%、12·12%和4.16%，而且1-甲基萘匹配度分别为704,860和802；保留时间分别为9.45min、9.43min和9.44min的化合物为苯乙酮，6月、7月和8月的桑茶中该物质的相对含量分别为1.79%、1.32%和1.37%，而且苯乙酮匹配度分别为918,889和886。将桑茶先放置在密闭的干燥器中，桑茶中的活性成分挥发出来，然后用Tenax-TA进行吸附，方法及过程简单，而且桑茶中的活性成分只有挥发、吸附、热脱附过程，活性成分不会发生任何性质改变，整个过程需要29h，操作简单易行，检测时间为30min，简便快速，而且经过计算机质谱库自动检索、解析，全部操作由机器设备完成，更准确可靠；Tenax-TA管的费用仅是固相微萃取装置的五百分之一，设备成本低，利用本发明的方法出峰不叠加，保留时间稳定，出峰效果好，检测成功率为100%。具体实施方式十一本实施方式的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法按以下步骤进行一、将桑叶放在干燥器中密闭放置26h，然后用内填200mgTenax-TA的Tenax-TA吸附管抽气吸附6h；二、连接热解析仪与GC/MS气质联用仪，将经步骤一处理的Tenax-TA吸附管放入热解析仪中，设置热解析仪的脱附温度为290°C、脱附时间为7min，采用氦气吹扫进样，进样时间为Imin；GC/MS气质联用仪采用柱长30m、内径0.25mm、膜厚0.25mm的TR-5MS毛细管色谱柱，色谱柱升温程序为柱温先升至40°C保持lmin，然后以80C/min升至90°C，再以15°C/min升至250°C保持8min；载气为氦气，柱流量lmL/min，进样量lmL，分流比1:30；GC-MS气质联用仪接口温度为270°C；质谱条件EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230°C，GC/MS气质联用仪的扫描范围40u450u，然后进行测定；三、根据峰面积用归一化法计算出桑叶中活性组分的相对含量。本实施方式中的桑叶分别为9月和10月的干桑叶，9月干桑叶的总离子流色谱图如图4所示、10月干桑叶的总离子流色谱图如图5所示，从图4和图5可以看出，干桑叶中各成分出峰不叠加，保留时间稳定，出峰效果好，9月和10月的干桑叶各组分及其相对含量如表2所示，表29月和10月的干桑叶各组分及其相对含量<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>从表2中可以看出，保留时间分别为11.06min和11.05min的化合物为甘菊环，9月和10月的干桑叶中甘菊环相对含量分别为12.25%和3.52%，配度分别为865和934；保留时间分别为14.54min和14.53min的化合物为育亨宾，9月和10月的干桑叶中育亨宾相对含量分别为1.35%和4.16%，匹配度分别为644和641；保留时间分别为1.22min和1.42min的化合物为丙氨酸，9月和10月的干桑叶中丙氨酸的相对含量分别为1.17%和1.53%，匹配度分别为908和911；保留时间分别为12.28min和12.26min的化合物为1_甲基萘，9月和10月的干桑叶中1-甲基萘的相对含量分别为5.61%和4.18%，匹配度分别为893和883；保留时间分别为9.43min和9.43min的化合物为苯乙酮，9月和10月的干桑叶中苯乙酮的相对含量分别为1.27%和0.73%，匹配度分别为843和785。将桑叶先放置密闭的干燥器中，桑叶中的活性成分挥发出来，然后用Tenax-TA进行吸附，方法及过程简单，而且桑叶中的活性成分只有挥发、吸附、热脱附过程，活性成分不会发生任何性质改变，整个过程需要29h，操作简单易行，检测时间为30min，简便快速，而且经过计算机质谱库自动检索、解析，全部操作由机器设备完成，更准确可靠；Tenax-TA管的费用仅是固相微萃取装置的五百分之一，设备成本低，利用本发明的方法出峰不叠加，保留时间稳定，出峰效果好，检测成功率为100%。权利要求一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法按以下步骤进行一、将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置24h～28h，然后用内填200mgTenax-TA的Tenax-TA吸附管抽气吸附5h～7h；二、连接热解析仪与GC/MS气质联用仪，将经步骤一处理的Tenax-TA吸附管放入热解析仪中，设置热解析仪的脱附温度为280℃～320℃、脱附时间为5min～7min，采用氦气吹扫进样，进样时间为1min；GC/MS气质联用仪采用柱长30m、内径0.25mm、膜厚0.25mm的TR-5MS毛细管色谱柱，色谱柱升温程序为柱温先升至40℃保持1min，然后以8℃/min升至90℃，再以15℃/min升至250℃保持8min；载气为氦气，柱流量1mL/min，进样量1mL，分流比1:30；GC-MS气质联用仪接口温度为270℃；质谱条件EI电离源，电子能量70eV，离子源温度230℃，GC/MS气质联用仪的扫描范围40u～450u，然后进行测定；三、根据峰面积用归一化法计算出桑茶或桑叶中活性组分的相对含量。2.根据权利要求1所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤一中将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置25h27h。3.根据权利要求1所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤一中将桑茶或桑叶放在干燥器中密闭放置26h。4.根据权利要求1、2或3所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤一中用Tenax-TA吸附管抽气吸附5.5h6.5h。5.根据权利要求1、2或3所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤一中用Tenax-TA吸附管抽气吸附6h。6.根据权利要求4所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤二中设置热解析仪的脱附温度为285°C310°C。7.根据权利要求4所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤二中设置热解析仪的脱附温度为300°C。8.根据权利要求1、2、3、6或7所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤二中设置热解析仪的脱附时间为5.5min6.5min。9.根据权利要求1、2、3、6或7所述的一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，其特征在于步骤二中设置热解析仪的脱附时间为6min。全文摘要一种桑茶或桑叶中活性组分的快速测定方法，它涉及桑茶或桑叶活性组分的测定方法。本发明解决了现有的利用GC/MS气质联用仪对桑茶或桑叶进行鉴定和检测时对桑茶或桑叶的前处理方法中，将桑茶或桑叶中的活性成分制备成精油的方法过程复杂、不能真正反映桑茶或桑叶的成分和固相微萃取方法设备昂贵、萃取量小致经常检测失败的问题。本方法一、将桑茶或桑叶置于干燥器中密闭放置，用Tenax-TA吸附管抽气吸附；二、连接热解析仪与气质联用仪，将吸附管放入热解析仪中，设置参数，进行测定；三、根据峰面积归一化法算出活性组分相对含量。本方法简单，活性成分无性质改变，设备成本低，检测成功率100%。可对桑茶或桑叶进行鉴定和检测。文档编号G01N30/06GK101806783SQ201010165129公开日2010年8月18日申请日期2010年5月7日优先权日2010年5月7日发明者刘志明,王海英申请人:东北林业大学;刘志明