专利名称：一种越橘治疗呼吸道系统疾病有效部位的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及天然药物的质量控制领域，具体涉及一种越橘提取物的质量控制方法。
背景技术：
越橘提取物是从杜鹃花科植物越橘Vaccinium vitis-idaea L的茎、叶按照我们 前期申请的中国专利中所公开的提取方法制得的提取物申请号为200310107623.0、名称 为“越橘治疗呼吸道疾病的有效部位及其制备方法”。该提取物主要包括酚苷类和黄酮类， 其中酚苷部位主要包含熊果苷、甲基熊果苷、2-0-咖啡酰基熊果苷及其衍生物等；黄酮部 位主要包含金丝桃苷、异槲皮苷、匾蓄苷、芦丁、槲皮素及其衍生物等。酚苷类成分为总提取 物的45-65% (w/w)，黄酮类成分类成分为总提取物的5-20% (w/w) 0我们对熊果苷的生物活性进行研究，通过抗炎(醋酸致腹膜炎法)、止咳(氨水引 咳法)、祛痰(气管酚红排泌法)实验表明熊果苷和越橘乙醇提取物均有显著的抗炎、祛 痰和镇咳作用；越橘总黄酮具有较好的抗菌、抗病毒作用。通过实验证明越橘总黄酮对白 喉杆菌的抗菌作用最强，对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、链球菌(A群)也具有显著作用。 越橘总黄酮对感染流感病毒的小鼠有很明显的延长疾病潜伏期及增加存活时间的作用。越 橘中所含的金丝桃苷具有抗炎、止咳、祛痰的作用；异槲皮素具有降压、抗炎、平喘、降血脂 作用；芦丁具有抗炎、抗病毒作用。因此越橘提取物中的酚苷类和黄酮类都是其治疗呼吸道 疾病的有效部位。基于熊果苷、总黄酮和金丝桃苷的药理活性与越橘提取物活性基本一致，因此在 质控中选择熊果苷、总黄酮以及总黄酮中的金丝桃苷作为越橘提取物中的定量检测物质具 有非常重要意义，而熊果苷和总黄酮的含量也成为越橘提取物作为原料制剂疗效保证的重 要指标。越橘提取物是我们自主研制的，目前在分析领域文献报道中，尚无与越橘提取物 质控的相关内容。为保证制剂所需原料的质量稳定可控，建立越橘提取物的质量控制方法 具有很大的意义。
发明内容
由于越橘提取物有两部分成分组成，即以熊果苷为主的酚苷类和以金丝桃苷为主 的黄酮类成分组成，因此如何质控提取物中两种有效部位具有较高的难度。本发明所要解 决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种可控制提取物质量、保证制剂安全的越橘 提取物制剂的质量控制方法。本发明是这样实现的按照天然药物质量标准研究要求，对越橘的活性提取物进行了全面的质量研究。(1)本品性状为棕褐色干浸膏；气微，味苦。(2)鉴别方法为薄层色谱法以氯仿(6 9分)_甲醇(1 3份)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液后，晾干，100 110°C烘至斑点显色清晰。供试品溶 液、对照品溶液各2ul，点于同一硅胶G薄层板上，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。其中对照品溶液配制方法为熊果苷对照品适量用乙醇制成Iml含Img的溶液；其中供试品溶液配制方法为取本品粉末2g，加入甲醇5ml，超声使完全溶解，溶 液作为供试品溶液。(3)检查项内容包括水分、炽灼残渣、重金属、砷盐检查，按照中国药典2005年版 一部附录要求的方法测定；(4)熊果苷含量测定包括以下步骤分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高效 液相色谱法测定，其特征是色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13 18 87 82) 溶液为流动相；流速0. 8 1. Oml/min ；检测波长为278 285nm ；进样量20ul。理论板数 按熊果苷峰计算，不低于2000。其中对照品溶液的制备方法为精密称取熊果苷对照品适量，加乙醇制成每Iml 含40 SOyg的溶液，即得。其中供试品溶液的制备方法为取越橘提取物粉术80 120mg，精密称定，置 IOOml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，经0. 45um微孔滤膜过滤，即得。(5)总黄酮的测定包括以下步骤分别制备供试品溶液和对照品溶液，500 520nm波长处测定吸收度。其中对照品溶液的制备方法为取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每 Iml含金丝桃苷165 215 μ g的溶液，摇勻。分别精密吸取对照品液3. Oml，完全转移至 25ml容量瓶中，再加水3. Oml ；然后加入0. 3 0. 7%亚硝酸钠溶液1ml，放置6分钟；再加 入8 12%硝酸铝1ml，放置5 10分钟；加入9 11%氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容至 刻度，摇勻，放置10 20分钟。其中供试品溶液的制备方法为取越橘提取物粉末0. 3 0. 8g，精密称定，以少 量蒸馏水溶解，加入到预先处理好的聚酰胺柱(内径1.9cm，柱高36cm，上柱量为柱高的一 半)，用蒸馏水400 600ml冲洗至流出液无色，再用乙醇400 600ml冲洗至流出液无色， 将乙醇洗脱液浓缩，用乙醇定容至250ml容量瓶中。精密吸取4ml，置25ml容量瓶中，加2ml 蒸馏水，然后加入0. 3 0. 7 %亚硝酸钠溶液Iml，放置6分钟；再加入8 12 %硝酸铝Iml， 放置5 10分钟；加入9 11%氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容至刻度，摇勻，放置10 20 分钟，即得供试品溶液。(6)金丝桃苷含量测定包括以下步骤分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高 效液相色谱法测定，其特征是色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0. 09 0. 18%磷酸水溶 液(12 18 88 82)；检测波长为320 375nm。理论板数按金丝桃苷峰计算不低于 2000。其中对照品溶液的制备方法为精密称取金丝桃苷对照品适量，加50%乙醇制成 每Iml含3 6yg的溶液，即得。其中供试品溶液的制备方法为精密称取越橘提取物180 220mg，置50ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度，经0. 45um微孔滤膜过滤，即得。基于上述定性和定量方法，使越橘提取物的质量控制大大的进步，为其成为药品 生产、流通和临床应用提供了更好的保障。
下面结合附图和实施例对本实用新型进一步说明。图1是越橘提取物薄层鉴别图。图中1、2、3为越橘提取物薄层色谱点，4为熊果苷对照品薄层色谱点图2是越橘提取物样品及熊果苷对照品液相色谱图(283nm)。图3是越橘提取物测定熊果苷含量所制备样品溶液紫外光谱图。图4是熊果苷对照品溶液紫外光谱图。图5是越橘提取物样品及金丝桃苷对照品液相色谱图(355nm)。图6是越橘提取物测定金丝桃苷含量所制备样品溶液紫外光谱图。图7是金丝桃苷对照品溶液紫外光谱图。
具体实施例方式下面实验选取四批越橘提取物(批号为080301、090601、090602、090603，黑龙江 省中药材GAP中心提供，中试规模样品)进一步描述本发明，但所述实验例仅用于说明本发 明而不是限制本发明。实验例1薄层鉴别方法1. 1展开条件固定相硅胶G板(100 X 200mm，厚度0.20-0. 25mm，青岛海洋化工厂分厂)展开剂以氯仿-甲醇(4 1)为展开剂，饱和时间30分钟，不低于20°C展开。显色喷以10%硫酸乙醇溶液后，晾干，105°C烘至斑点显色清晰1. 2溶液制备对照品溶液制备熊果苷对照品适量用乙醇制成Iml含Img的溶液；供试品溶液制备取三批本品粉末2g，加入甲醇5ml，超声使完全溶解，溶液作为供 试品溶液。1. 3测定法及测定结果分别吸取供试品溶液、对照品溶液2ul，点于同一硅胶G薄层板上，展开，晾干，显 色。实验结果见图1。实验例2按照中国药典2005版附录方法，结合越橘提取物特点，对本品进行常规项检查， 包括水分、炽灼残渣、重金属、砷盐检查，各批样品测定结果见表1。表1四批样品一般检查测定结果 实验例3熊果苷含量测定的方法学验证3. 1实验仪器及试剂仪器Waters 高效液相色谱仪(Waters 2695 Separations Module, Waters 2996 PhotodiodeArray Detector) ；80-2型离心机，上海安亭科学仪器厂；H66MC型超声震荡仪， 天津奥赛特恩斯仪器有限公司)。试剂甲醇色谱级，美国迪马(DIKMA)试剂公司；其余试剂为分析纯。对照品熊果苷(Arbutin)由日本和光纯药株式会社提供，纯度99. 2%。3. 2试验方法3. 2. 1色谱条件色谱柱KromasilC18 色谱柱(3. 9mmX 200mm，5 μ m) ；Kromasil C18 保护柱；流动相甲醇-水(15 85)溶液为流动相；流速lml/min;检测波长283nm；3. 2. 2供试品溶液的制备取越橘提取物粉术lOOmg，精密称定，置100ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释刻度， 取样品液经0. 45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。3. 3实验结果3. 3. 1线性关系考察取熊果苷对照品15mg，精密称定，置25ml容量瓶，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇勻 即得。熊果苷对照品溶液分别自动进样5、10、15、20、25μ1，测得熊果苷的峰面积，以 质量X与色谱峰面积Y做标准曲线，得回归方程为γ = 3. 997Χ105Χ+9. 898X104，r = 0. 9998，结果表明熊果苷在3. 03 15. 15 μ g范围内线性关系良好。3. 3. 2精密度试验取同一熊果苷对照品溶液，重复进样5次，测得熊果苷峰面积，结果RSD为0. 40%， 仪器精密度较好。3. 3. 3重现性试验取本品(批号040603) 100mg(5份)，精密称定，按供试品溶液制备方法平行制备 样品供试液5份，每份样品进样20μ 1，测定熊果苷含量，结果RSD为1. 18%，表明测定方法 的重现性良好。3. 3. 4溶液稳定性试验
取本品(批号040603) 100mg，精密称定，按供试品溶液制备方法制备样品供试 液，每3小时进样20ul分析，测得熊果苷峰面积，结果显示溶液在12小时内，样品中熊果苷 稳定。样品测试一般在2小时内即可完成。3. 3. 5加样回收率试验 取已知含量的越橘提取物粉术(熊果苷含量为48. 15% )50mg左右，精密称定，共 5份，分别加入一定量的熊果苷对照品，置IOOml容量瓶中，按供试液制备方法制备样品5 份，每份样品进样20 μ 1，测定熊果苷含量，按下列公式计算回收率，结果得到平均回收率为 99. 73，RSD 为 2. 53%。 3. 3. 6含量测定取上述四批样品，按供试品溶液制备方法平行制得样品溶液8份(每批测定2 次)，在拟定的色谱条件下进样20ul，测定熊果苷含量，结果见图2-4、表2。表2越橘提取物中熊果苷含量测定结果 3. 3. 7最低含量限定经过四批中试含量测定数据及实验室小试数据积累，越橘提取物中熊果苷的含量 平均在44% 48%之间，考虑国家新药指导原则对有效部位含量测定的限制及总黄酮含 量，可测成分两者之和应在50%以上，因此，将四批样品平均值的90%作为最低含量限定 值，即提取物中熊果苷含量不低于42%，即420mg/g。实验例4总黄酮含量测定的方法学验证4. 1实验仪器及试剂仪器722型光栅分光光度计，山东高密分析仪器厂；电子天平，Mettler-ToledoI nstruments(shanghai)Co, Ltd。试剂聚酰胺(80-100目)，北京化工厂；其他试剂均为分析纯。对照品金丝桃苷(hyperoside)中国生物制品检定所，供含量测定用。批号 1521-200202 ；
4. 2试验部分4· 2. 1供试品溶液的制备 取越橘提取物粉末约0. 5g，精密称定，以少量水(2ml)溶解，加入到预先处理好的 聚酰胺柱(内径1. 9cm,柱高36cm，上柱量为柱高的一半，粒度为80-100目)，用水500ml 冲洗至流出液无色，再用乙醇500ml冲洗至流出液无色，将乙醇洗脱液浓缩，用乙醇定容至 250ml容量瓶中。精密吸取4ml，置25ml容量瓶中，加水2ml，然后加入0. 5 %亚硝酸钠溶液 lml，放置6分钟；再加入10%硝酸铝1ml，放置6分钟；加入10%氢氧化钠10ml，用水定容 至刻度，摇勻，放置15分钟。用阴性对照液做对照测定吸收度。4. 2. 2检测波长的选择取对照品、供试品溶液适量，于400 600nm扫描，得知对照品溶液与样品溶液最 大吸收波长一致，均为510nm，故确定510nm为测定波长。4. 2. 3线性关系的考察取金丝桃苷对照品9. Omg，精密称定，置50ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻 度，摇勻。分别精密吸取对照品液1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. 0ml，完全转移至25ml容量瓶 中，再分别加入蒸馏水5. 0,4. 0,3. 0,2. 0,1. 0,0ml ；然后分别加入0. 5%亚硝酸钠溶液1ml， 放置6分钟；再加入10%硝酸铝1ml，放置6分钟；加入10%氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容 至刻度，摇勻，放置15分钟。用阴性对照液(取6ml蒸馏水，按上述步骤依次加入亚硝酸钠 等溶液，定容至25ml，摇勻)作对照，在510nm处测定。以浓度(X)为横坐标，吸收度(Y)为 纵坐标，做标准曲线。标准曲线为Y = 0.611X-3. 447X102，γ = 0.9995。结果表明总黄 酮在0. 178 1.068mg之间，线性关系良好。4. 2. 4精密度实验精密吸取对照品溶液3. 0ml，加入蒸馏水3ml，然后按对照品溶液制备方法制备对 照品溶液，重复测定5次。结果RSD为0. 44%，精密度较好。4. 2. 5重现性实验取本品(批号040603)0.5g(5份)，精密称定，按供试品溶液制备方法平行制备样 品供试液5份，结果RSD为2. 05%，该方法的重现性较好。4. 2. 6溶液稳定性实验取本品(批号040603)0. 5g，精密称定，按供试品溶液制备要求制备样品供试液， 每隔30min，测定其吸收度，考察溶液稳定性，结果表明在2小时内基本稳定；但吸收度已经 明显下降，建议测定时间不超过60min。4. 2. 7回收率实验取已知含量本品(总黄酮含量为9. 6% ) 150mg(5份)，精密称定，加入对照品适 量，按样品供试品溶液制备样品溶液5份，进行测定，结果得到平均回收率为99. 11，RSD为 2.57%。表明该方法的回收率较好。4. 2. 8样品测定取上述四批样品各0. 5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制得样品溶液8份(每 批测定2次)，以阴性液对照，在510nm处测定，平行测定3次，计算含量，结果见表3。表3越橘提取物中总黄酮含量测定结果 4. 2. 9最低含量限定经过四批中试含量测定数据，越橘提取物中总黄酮的含量平均在9% 10%之 间，考虑国家新药审评指导原则对有效部位含量测定的限制及总黄酮含量，可测成分两者 之和应在50%以上，因此，初步将四批样品平均值的85%作为最低含量限定值，即最低含 量限定值定为提取物中总黄酮含量不低于8%，即80. Omg/g。实验例5金丝桃苷含量测定的方法学验证5.1实验仪器及试剂仪器同实验例3。试剂乙腈HPLC级，美国迪马(DIKMA)试剂公司；其余试剂为分析纯。对照品金丝桃苷(hyperoside)对照品中国生物制品检定所，供含量测定用 (批号 1521-200202)；5. 2实验方法5. 2.1色谱条件色谱柱KromasilC18色谱柱(3. 9mmX 200mm, 5um) ；KromasilC18 保护柱；流动相乙腈-0. 15%磷酸水溶液(14 86)流速lml/min;检测波长355nm;5. 2. 2供试品溶液的制备根据越橘药材的测定法，选择50%乙醇溶液作为提取 溶溶剂。取越橘提取物200mg，精密称定，用50%乙醇溶液溶解定容至50ml，取样品液用 0. 45um微孔滤膜，滤液作为供试品溶液。5. 3实验结果5.3. 1线性关系考察取金丝桃苷对照品8. Omg，精密称定，置IOOml容量瓶，加50%乙醇溶解并稀释至 刻度，摇勻即得。金丝桃苷对照品溶液分别自动进样2、4、6、8、10μ 1，测得金丝桃苷的峰面 积，以质量X与色谱峰面积Y做标准曲线，得回归方程为Υ = 2. 039Χ106Χ-5. 560X 104 (r =0. 9999)，表明金丝桃苷在0. 20 1. OOyg范围内线性关系良好。5. 3. 2精密度试验取同一浓度的金丝桃苷对照品溶液，重复进样5次，测得金丝桃苷峰面积，结果RSD为1. 19%，精密度较好。5. 3. 3重现性试验 按样品供试液制备方法平行操作制备供试品溶液5份，每份样品进样20 μ 1，测定 金丝桃苷含量，结果RSD为1. 37%，测定方法的重现性良好。5. 3. 4溶液稳定性试验取同一样品供试液，每3小时进样分析，测得金丝桃苷峰面积，结果在12小时内， 样品中金丝桃苷稳定。样品测试一般在2小时内即可完成。5. 3. 5回收率试验精密称取已知含量的越橘提取物(金丝桃苷含量为0. 475% )粉末IOOmg左右， 共5份，分别加入一定量的金丝桃苷对照品，按供试液制备方法制备样品5份，每份样品进 样10 μ 1，测定金丝桃苷含量，结果结果得到平均回收率为100. 25%, RSD为2.57%。表明 该方法的回收率较好。5. 3. 6含量测定取越橘提取物样品四批按样品供试液制备方法制得样品溶液8份，每批次两份， 每次20 μ 1，测定金丝桃苷含量，结果见图5-7、表4。表4样品含量结果 5. 3. 7最低含量限定经过四批中试含量测定数据，越橘提取物中金丝桃苷的含量平均在0.45% 0. 48%之间，因此，将四批样品平均值的80%作为最低含量限定值，即金丝桃苷含量不低于 0. 37%, BP 3. 70mg/g。实验例6越橘提取物溶媒残留检查越橘提取物在提取分离过程中使用了大孔树脂，大孔树脂由南开大学化工厂购 买，型号NKA-2型。对大孔树脂可能造成的有机溶媒残留进行了检测。方法如下6.1仪器与试药GC-MSQP5050A日本岛津气质联用色谱仪，A0C_20i自动进样器，石英毛细管柱(3OmXO. 25mm)。越橘提取物(批号为 040601、040602、040603)；NKA-2型大孔树脂(南开大学化工厂)；N，N- 二甲基甲酰胺(色谱纯)(天津市科 密欧化学试剂开发中心)；对照品正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、二乙烯 苯(天津市光复精细化工研究所)。6. 2色谱条件 石英毛细管柱(30mX0. 25mm)；固定液为DB-17 ；柱前压64. 5kpa ；载气为He气，流 速1. Oml/min ；程序升温初始温度50°C，以5°C /min的速率升至150°C;气化室温度200°C; 电子轰击(EI)离子源检测器，加速电压1. Okv，检测器温度280°C ；进样量2 μ 1。6. 3溶剂的选择由于测定的残留溶剂在水中溶解性不好，因此需选择一种对其溶解性好的溶剂。 根据文献选择了 N，N- 二甲基甲酰胺作为溶剂，再用无有机物的水稀释的方法。6. 4对照品溶液的制备精密量取正己烷120 μ 1、苯90 μ 1、甲苯90 μ 1、对二甲苯90 μ 1、邻二甲苯90 μ 1、 苯乙烯90μ 1、二乙烯苯90μ 1置IOOml容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺溶解，并稀释 至刻度，再精密量取Iml置IOOml容量瓶中，加无有机物的水至刻度，摇勻，即得每Iml含 正己烷9. 33 μ g、苯7. 90 μ g、甲苯7. 79 μ g、对二甲苯7. 75 μ g、邻二甲苯7. 92 μ g、苯乙烯 8. 17 μ g、二乙烯苯8. 19 μ g的溶液，进样2 μ 1。6. 5供试品溶液的制备分别称取三批越橘有效部位约0. 8g，精密称定后置锥形瓶中，精密移取IOml无有 机物的水，摇勻使溶解，过0. 45 μ m滤膜，取续滤液作为供试品溶液，进样量2 μ 1。6. 6最低检出量将7种溶剂的对照品溶液逐步稀释，以S/N = 3测得各有机溶剂的最低检测限为 正己烷 328. 22ng/ml、苯 62. 53ng/ml、甲苯 26. 18ng/ml、对 二甲苯 26. 45ng/ml、邻 二甲苯 26. 44ng/ml、苯乙烯 26. 55ng/ml、二 乙烯苯 162. 06ng/ml。6. 7样品测定结果按所选定条件测定了 3批样品中7种溶剂的残留量，测定结果表明，样品中所检测 出的峰的质谱图及保留时间与对照品对比可知均未检出正己烷、苯、甲苯、对二甲苯、邻二 甲苯、苯乙烯、二乙烯苯。
权利要求
一种对越橘提取物的质量控制方法，包括以下步骤性状、鉴别、水分、炽灼残渣、重金属、砷盐、有机溶媒残留检查、熊果苷含量测定，总黄酮含量测定，金丝桃苷含量测定，其特征是(1)本品性状为棕褐色干浸膏；气微，味苦。(2)鉴别方法为薄层色谱法以氯仿(6～9分)-甲醇(1～3份)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液后，晾干，100～110℃烘至斑点显色清晰。供试品溶液在与对照品溶液相应的位置上，显相同颜色的斑点。其中对照品溶液配制方法为熊果苷对照品适量用乙醇制成1ml含1mg的溶液；其中供试品溶液配制方法为取本品粉末2g，加入甲醇5ml，超声使完全溶解，溶液作为供试品溶液。(3)检查项内容包括水分、炽灼残渣、重金属、砷盐、有机溶媒残留检查，按照中国药典2005年版一部附录要求的方法测定；(4)熊果苷含量测定包括以下步骤分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高效液相色谱法测定，其特征是色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13～18∶87～82)溶液为流动相；流速0.8～1.0ml/min；检测波长为278～285nm。理论板数按熊果苷峰计算，应不低于2000。其中对照品溶液的制备方法为精密称取熊果苷对照品适量，加乙醇制成每1ml含40～80μg的溶液，即得。其中供试品溶液的制备方法为取越橘提取物粉末80～120mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，经0.45um微孔滤膜过滤，即得。(5)总黄酮的测定包括以下步骤分别制备供试品溶液和对照品溶液，500～520nm波长处测定吸收度。其中对照品溶液的制备方法为取金丝桃苷对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含金丝桃苷165～215μg的溶液，摇匀。分别精密吸取对照品液3.0ml，完全转移至25ml容量瓶中，再加水3.0ml；然后加入0.3～0.7％亚硝酸钠溶液1ml，放置6分钟；再加入8～12％硝酸铝1ml，放置5～10分钟；加入9～11％氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置10～20分钟。其中供试品溶液的制备方法为取越橘提取物粉末0.3～0.8g，精密称定，以少量蒸馏水溶解，加入到预先处理好的聚酰胺柱(内径1.9cm，柱高36cm，上柱量为柱高的一半)，用蒸馏水400～600ml冲洗至流出液无色，再用乙醇400～600ml冲洗至流出液无色，将乙醇洗脱液浓缩，用乙醇定容至250ml容量瓶中。精密吸取4ml，置25ml容量瓶中，加2ml蒸馏水，然后加入0.3～0.7％亚硝酸钠溶液1ml，放置6分钟；再加入8～12％硝酸铝1ml，放置5～10分钟；加入9～11％氢氧化钠10ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置10～20分钟，即得供试品溶液。(6)金丝桃苷含量测定包括以下步骤分别制备供试品溶液和对照品溶液，用高效液相色谱法测定，其特征是色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.09～0.18％磷酸水溶液(12～18∶88～82)；检测波长为320～375nm。理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于2000。其中对照品溶液的制备方法为精密称取金丝桃苷对照品适量，加50％乙醇制成每1ml含3～6μg的溶液，即得。其中供试品溶液的制备方法为精密称取越橘提取物180～220mg，置50ml容量瓶中，加50％乙醇溶解并稀释至刻度，经0.45um微孔滤膜过滤，即得。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(2)中，供试品溶液、对照品 溶液点样体积均为2ul，点于同一硅胶G薄层板上，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(5)中，供试品溶液和对照品 溶液的最大吸收波长相差不超过2nm。
4.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于步骤(4、6)中，高效液相色谱的进 样量为20ul。
5.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于可以作为越橘提取物制剂的质量 控制方法。
全文摘要
本发明涉及天然药物质量检测领域，具体来说为一种越橘活性提取物的质量控制方法。本发明建立了越橘的活性提取物的质量控制方法，包括性状，鉴别，水分、炽灼残渣、重金属、砷盐、有机溶媒残留、熊果苷含量测定，总黄酮含量测定，金丝桃苷含量测定。本方法具有良好的重现性和可靠性，可全面控制续越橘提取物以及其制剂的质量。
文档编号G01N30/02GK101843650SQ201010171090
公开日2010年9月29日 申请日期2010年5月13日 优先权日2010年5月13日
发明者吴修红, 孙晖, 王喜军, 陈曦 申请人:王喜军;陈曦;吴修红