专利名称：Hplc波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法
技术领域：
本发明涉及一种HPLC同时测定白芍及炮制品中9种成分的含量的方法，特别涉及一种波长切换技术。
背景技术：
同时测定白芍及炮制品中9种成分的含量，是建立白芍及炮制品质量标准的重要组成部分，为全面评价中药质量提供依据。目前《中国药典》(2010版)仅采用HPLC固定波长法对白芍中芍药苷一种含量较大的成分进行了测定。但白芍中有效物质并不是单一的成分，而且每种成分的最大吸收波长是不一样的。通过测定中药的某一个成分含量的高低对该中药进行质量控制，不够全面。因此，本发明建立一种方法，可同时测定白芍中9种成分，并且利用同一种检测条件和波长切换的方法，这样既可以达到增加质量覆盖面的目的， 又可以保证每种成分在最大吸收波长处被检测，提高检测灵敏度。
发明内容
本发明的目的，是提供一种HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量的方法，该方法较其他含量检测方法，如单一成分含量检测、非切波长检测等方法，可以做到更全面，准确的控制白芍质量的效果。采用的技术方案是
HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，包括下述工艺步骤 1、制备供试品溶液，分别盛装备用，其制备方法如下取白芍及炮制品0. 5-1. 5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加50%-70%乙醇7-15倍量，回流提取2-3次，每次2_3小时，滤过，合并滤液，置于量瓶中，加50%-70%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得。2、制备对照品储备液，其制备方法如下精密称取没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、 芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1，2.，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚对照品适量，分别以甲醇配成每1 ml含没食子酸3-8 mg、氧化芍药苷2-7 mg、儿茶素0. 03-0. 08 mg、芍药内酯苷3-8 mg、芍药苷8-14 mg、苯甲酸0. 007-0. 013 mg、1，2.，3，4，6-五没食子酰葡萄糖1-4 mg、苯甲酰芍药苷0.6-1. 2 mg、丹皮酚0. 1-0.5 mg，该溶液即得。3、白芍及炮制品中9种成分的含量测定采用高效液相色普法，应用波长切换及梯度洗脱技术取上述制备的一份供试品溶液，上ODS色谱柱 (150-250X4. 6-6. Omm, 2_5μπι)，梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈5 —10% 磷酸水95— 90%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈10—15% 磷酸水 90—85%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈15—30% 磷酸水85—70%的混合液；洗脱液流速为0. 8-1. 2ml/min ；检测波长第一梯度洗脱时间段为267nm，第二梯度洗脱时间段为 230nm，第三梯度洗脱时间段为258nm，第四梯度洗脱时间段为275nm，第五梯度洗脱时间段为230nm，可依次测定并计算出样品中白芍及炮制品中9种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以芍药苷计不低于3000，分离度> 1. 5。
4、方法学考察
线性范围的考察精密吸取各对照品储备液适量，置量瓶中，加甲醇稀释至各对照品浓度均在0.1-200 μ 1范围内，摇勻，制得混合对照品溶液。分别精密吸取混合对照品溶液适量，在上述色谱条件下分别进样进行测定。以进样量(X，μ g)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。精密度考察精密吸取供试品溶液10 μ 1，连续进样5次，测得没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、 丹皮酚峰面积的RSD均应小于3。稳定性考察取供试品溶液，分别在12h内进样10 μ 1，测得没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1，2，3，4，6_五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚峰面积的RSD均应小于3。重复性考察取白芍及炮制品5份，每份0.5-1. 5 g，精密称定，按步骤一方法平行制备5份供试品溶液，分别进样10 μ 1进行测定。结果没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、 芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚的RSD 均应小于3。加样回收率考察取已知含量的白芍及炮制品，5份，每份0.5-1.5 g，精密称定， 分别置圆底烧瓶中，精密加入没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、 1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、苯甲酰芍药苷、丹皮酚对照品储备液适量。按“步骤3的方法操作，在上述色谱条件下进行测定后计算回收率均应在95%-105%。
具体实施例方式实施例一
HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，其特征在于采用波长切换和梯度洗脱同时测定9种成分，包括下述工艺步骤
(1)、制备供试品溶液，分别盛装备用，其制备方法如下取白芍及炮制品1.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇15倍量回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，置于量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；
(2)、取上述制备的供试品溶液，上ODS色谱柱进行梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈5% 磷酸水95%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈10% 磷酸水90%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈30% 磷酸水70%的混合液；洗脱液流速为 1. 2ml/min ；检测波长第一梯度洗脱时间段为267nm，第二梯度洗脱时间段为230nm，第三梯度洗脱时间段为258nm，第四梯度洗脱时间段为275nm，第五梯度洗脱时间段为230nm，可测定出白芍及炮制品中9种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以芍药苷计不低于3000，分离度> 1.5，上述百分比为体积百分比。实施例二
HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，其特征在于采用波长切换和梯度洗脱同时测定9种成分，包括下述工艺步骤
(1)、制备供试品溶液，分别盛装备用，其制备方法如下取白芍0. 5g，精密称定，置圆底烧瓶中，加70%乙醇7倍量回流提取3次，每次3小时，滤过，合并滤液，置于量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；
(2)、取上述制备的供试品溶液，上ODS色谱柱进行梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈5% 磷酸水95%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈15% 磷酸水85%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈15% 磷酸水85%的混合液；洗脱液流速为
0.8ml/min ；检测波长第一梯度洗脱时间段为267nm，第二梯度洗脱时间段为230nm，第三梯度洗脱时间段为258nm，第四梯度洗脱时间段为275nm，第五梯度洗脱时间段为230nm，可测定出白芍及炮制品中9种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以芍药苷计不低于3000，分离度> 1.5，上述百分比为体积百分比。 实施例三
HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，其特征在于采用波长切换和梯度洗脱同时测定9种成分，包括下述工艺步骤
(1)、制备供试品溶液，分别盛装备用，其制备方法如下取白芍0.9g，精密称定，置圆底烧瓶中，加60%乙醇8倍量回流提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液，置于量瓶中，加 60%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；
(2)、取上述制备的供试品溶液，上ODS色谱柱进行梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈8% 磷酸水92%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈13% 磷酸水87%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈20% 磷酸水80%的混合液；洗脱液流速为
1.Oml/min ；检测波长第一梯度洗脱时间段为267nm，第二梯度洗脱时间段为230nm，第三梯度洗脱时间段为258nm，第四梯度洗脱时间段为275nm，第五梯度洗脱时间段为230nm，可测定出白芍及炮制品中9种成分的含量，在上述色谱条件下，理论塔板数以芍药苷计不低于3000，分离度> 1.5，上述百分比为体积百分比。
权利要求
1. HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，其特征在于采用波长切换和梯度洗脱同时测定9种成分，包括下述工艺步骤(1)、制备供试品溶液取白芍及炮制品0.5-1.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加 50%-70%乙醇7-15倍量回流提取2-3次，每次2_3小时，滤过，合并滤液，置于量瓶中，加 509Γ70%乙醇稀释至刻度，摇勻，即得；(2)、取上述制备的供试品溶液，上ODS色谱柱进行梯度洗脱；洗脱液为乙腈与磷酸水混合液；第一梯度洗脱采用乙腈5—10% 磷酸水95—90%的混合液，第二梯度洗脱采用乙腈 10—15% 磷酸水90— 85%的混合液，第三梯度洗脱采用乙腈15 — 30% 磷酸水85— 70%的混合液；洗脱液流速为0. 8-1. 2ml/min ；检测波长第一梯度洗脱时间段为267nm，第二梯度洗脱时间段为230nm，第三梯度洗脱时间段为258nm，第四梯度洗脱时间段为275nm，第五梯度洗脱时间段为230nm，可测定出白芍及炮制品中9种成分的含量，在上述色谱条件下， 理论塔板数以芍药苷计不低于3000，分离度> 1. 5，上述百分比为体积百分比。
全文摘要
HPLC波长切换同时测定白芍及炮制品中9种成分含量方法，是取白芍0.5-1.5g加70%乙醇7倍量，回流提取2-3次，滤液加70%乙醇稀释至刻度，然后上ODS色谱柱进行三次梯度洗脱，洗脱液为乙腈与磷酸水混合液，三次洗脱液配比分别为5-10%95-90%，10-15%90-85%，15-30%85-70%，流速为0.8-1.2ml/min；检测波长在五个时间段分别为267nm、230nm、258nm、275nm和230nm。本发明能做到更全面，准确的控制白芍质量。
文档编号G01N30/36GK102297918SQ20111003146
公开日2011年12月28日 申请日期2011年1月29日 优先权日2011年1月29日
发明者刘威, 刘玉强, 刘瑞, 庄丽, 张振秋, 李伟铭, 李可强, 李峰, 王飞, 米宝丽, 訾慧 申请人:辽宁中医药大学