专利名称：输血相容性检测室内质控品试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于输血相容性检测领域，具体涉及一种输血相容性检测室内质控品试剂
品.O
背景技术：
目前国内尚无具有SFDA批准文号的商品化输血相容性检测室内质控品，已知的国外同类产品中只有ABO、IihD血型鉴定及不规则抗体筛查室内质控品，没有交叉配血试验室内质控品。国内只有少数输血相容性检测实验室开展了部分室内质控工作，使用过的质控品包括西班牙Diagnostic Grifol公司生产的DG Gel Control试剂盒和美国Immucor 公司生产的WB corQC试剂盒(均未在国内注册)。两种试剂盒均设计由4支质控品组合可实现ABO、IihD血型鉴定及不规则抗体筛查室内质控，但无交叉配血试验室内质控。DG Gel Control试剂盒限定在其指定的DG Gel凝胶卡上使用，其它方法不适用；WB corQC试剂盒限定在felileo Echo全自动仪器上使用，其质控品中的抗-C在微柱凝胶抗人球法中无法检测出来。综上，国内目前尚无生产制备输血相容性检测室内质控品的成熟技术，而国外生产的同类产品适用范围狭窄，多为专用仪器配套设计，不具备其他方法学或检测体系的兼容性。同时，在输血相容性检测试验过程中，血型鉴定和不规则抗体筛查试验不能替代交叉配血试验，交叉配血试验是确保输血安全的最后一道关口，血型鉴定和不规则抗体的室内质控无法确保交叉配血试验结果的准确性和可靠性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种输血相容性检测室内质控品试剂盒。该试剂盒一方面是解决质控品的兼容性问题，就是研制出能够同时在常用的多种方法或检测体系中使用的输血相容性检测质控品，且确保其结果的稳定性和可比性；另一方面就是设计开发出交叉配血试验质控品配伍方案及质控品，解决交叉配血试验无质控的问题。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是
一种输血相容性检测室内质控品试剂盒，该试剂盒是由下述8支改良全血质控品组
成
管1 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 管2 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品； 管3 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品； 管4 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管5 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管6 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管7 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 管8 :0型IihD阳性，血浆中包含抗-A，B的全血质控品。
其中，所述A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品通过下述方法制备
a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的A型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次制备成压积红细胞备用；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。所述B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品通过下述方法制备
a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；
c)IgG抗-D血清的标化使用1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的 B型MiD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的血浆作为倍比稀释介质对商品化IgG型抗-D血清进行效价滴定，选择出现2+凝集的最高稀释倍数作为标准；
所述IgG型抗-D血清进行效价滴定采用微柱凝胶抗人球法。d)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，按照上步得到的稀释倍数标准添加IgG 型抗-D血清，再添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分装，离心，密封，4°C保存待用。所述B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品通过下述方法制备
a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次制备成压积红细胞备用；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。所述B型IihD阴性，血浆中包含抗A的全血质控品通过下述方法制备
a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，再添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分装，离心，密封，4°C保存待用。所述O型IihD阳性，血浆中包含抗-A，B的全血质控品通过下述方法制备
a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的O型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次制备成压积红细胞备用；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。上述质控品的制备方法中，所述红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液 II，所述离心条件为1500-2000g，离心3-5min。根据本发明所述试剂盒的组合方式，通过DCcEe抗原及相应抗体差异至少还可以得到下列质控品组合方案，这些组合方案均可以达到本发明所要解决的技术问题。方案1管1A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ；管2B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D ；管3A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D管4A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ；管5A型IihD阴性，血浆中包含抗-B ；管6B型IihD阳性，血浆中包含抗A ；管7A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ；管8O型RhD阳性，血浆中包含抗-A, B。
方案2管1A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D管2B型IihD阳性，血浆中包含抗A ；管3A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D管4A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ；管5A型IihD阴性，血浆中包含抗-B ；管6B型IihD阳性，血浆中包含抗A ；管7A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ；管8O型RhD阳性，血浆中包含抗-A, B。
方案3
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D ； 管4:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管5:B型IihD阴性，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案4
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A和IgG抗_c ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案5
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C+c-E-e+,血浆中包含抗B和IgG抗_c ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗B ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案6
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:B型RhD+C+c-E-e+,血浆中包含抗A和IgG抗_c ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案7
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ；管3:A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗B和IgG抗_c ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗B ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案8
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C+c-E-e+,血浆中包含抗A和IgG抗-E ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案9
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C+c-E-e+,血浆中包含抗B和IgG抗-E ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗B ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案10
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:B型RhD+C+c-E-e+,血浆中包含抗A和IgG抗-E ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案11
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:A型RhD+C+c-E-e+,血浆中包含抗B和IgG抗-E ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗B ；管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案12
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗-C ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案13
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗-C ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案14
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗-C ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案I5
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗-C ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。
方案I6
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗_e ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案17
管1:A型IihD阳性，血浆中包含抗-B； 管2:B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗_e ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案18
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗_e ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。方案19
管1 A型RhD阴性，血浆中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A和IgG抗_e ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血浆中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血浆中包含抗A ； 管6:B型RhD阳性，血浆中包含抗A ； 管7:A型RhD阳性，血浆中包含抗-B ； 管8:0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B。本发明的优点在于
1.本发明设计的由8支质控品组成的试剂盒，其中2支组合用于ABOjhD血型鉴定及不规则抗体筛查室内质控，3支组合用于交叉配血试验IgG类抗体室内质控，另2支组合用于用于交叉配血试验IgM类抗体室内质控，可以实现常规输血相容性检测全部5项试验的室内质控，特别是对于交叉配血试验的室内质控包含两个组成部分，其中IgG类抗体室内质控是确保交叉配血试验能够检测出有IgG类不规则抗体，而IgM类抗体室内质控一方面是要能够确保检测体系及时发现37°C条件下有临床意义的IgM类抗体，特别是要确保ABO 血型差错能够被及时、准确地发现，防止各类不规则抗体和ABO血型差错漏检导致急性溶血性输血反应。2.本发明设计的质控品试剂盒适用范围更为广泛，其ABOjhD血型鉴定室内质控品适用于试管法、玻片法、微量板法、微柱凝胶法、微柱玻璃珠法等；不规则抗体筛查室内质控品适用于试管抗人球蛋白法、凝聚胺法、微柱凝胶抗人球蛋白法、CAPTURE捕获法等 ’交叉配血试验室内质控品适用于盐水法、凝聚胺法、酶法、试管抗人球蛋白法、微柱凝胶抗人球蛋白法等。具体实施例方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。实施例中涉及的主要试剂单克隆抗-A (批号102065A，美国IMMUC0R公司产品)、抗-B (批号204026，美国IMMUC0R公司产品)；IgG抗-D (批号20090729，上海血液生物医药有限公司产品);MAP红细胞保存液(批号090801-11，上海康德莱企业发展集团药业有限公司产品)；血液保存液II (批号85DL17AC004，费森尤斯卡比广州医疗用品有限公司)；PBS (0. lmol/L, ρΗ7· 4，自制)硫酸庆大霉素(批号:09020222，天津药业焦作有限公司产品)；氯霉素(批号DY00910231，东北制药集团公司)色原缓冲液(苯酚9. 5g/L、42氨基安替比林 1. Og/L、PBS 0. lmol/L ρΗ7· 4)、FHb 标准工作液(100 mg/L)(本室自制)。实施例1试剂盒的组成
该试剂盒是由8支改良全血质控品组成，规格6ml/支，保存条件为2-8°C 管1 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 管2 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品； 管3 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品； 管4 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管5 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管6 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管7 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 管8 :0型IihD阳性，血浆中包含抗-A，B的全血质控品。实施例2试剂盒的制备
①ABO及IihD血型联合不规则抗体筛查质控品包括管1和管2 管1 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品
a)全血质控品原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的A型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理全血或红细胞悬液经过1500-2000g，离心3-5min弃上清得到压积红细胞，将同型压积红细胞汇集混勻后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液，洗涤三次，每次洗涤后均进行离心处理，弃去上清，最后制备成压积红细胞，所述离心条件为1500-2000g，离心3-5min ；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装在硬质塑料试管中，1500_2000g，离心 3-5min，用试管塞封口后4°C保存待用，有效期为45天；
d)质控品靶值的确定从制备好的全血质控品中随机抽取2个标本，使用实验室指定的比对参照或使用频率最高的仪器(或反应体系)进行ABO、RhD血型鉴定及不规则抗体筛查试验，重复两次后确定为A型IihD阳性，血浆中包含抗-B。上述方法中红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液II。管2 :B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品
a)全血质控品原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理全血或红细胞悬液经过1500-2000g，离心5min弃上清得到压积红细胞，将同型压积红细胞汇集混勻后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或 PBS缓冲液，洗涤三次，每次洗涤后均进行离心处理，弃去上清，最后制备成压积红细胞，所述离心条件为1500-2000g，离心3-5min ；
c)IgG抗-D血清的标化使用1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的 B型MiD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的血浆作为倍比稀释介质对商品化IgG型抗-D血清进行效价滴定(采用微柱凝胶抗人球法)，选择出现2+凝集的最高稀释倍数作为标准；
d)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，按照上步得到的稀释倍数标准添加IgG型抗-D血清，再添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分装在硬质塑料试管中，1500-2000g，离心3-5min，用试管塞封口后4°C保存待用， 有效期为45d ；
e)质控品靶值的确定从制备好的全血质控品中随机抽取2个标本，使用实验室指定的比对参照或使用频率最高的仪器(或反应体系)进行ABO、RhD血型鉴定及不规则抗体筛查试验，重复两次后确定质控品为B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D。 上述方法中红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液II。②交叉配血IgG类抗体组包括管3、管4和管5。管3 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品 制备方法同管2。管4 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品
a)全血质控品原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理全血或红细胞悬液经过1500-2000g，离心5min弃上清得到压积红细胞，将同型压积红细胞汇集混勻后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液，洗涤三次，每次洗涤后均进行离心处理，弃去上清，最后制备成压积红细胞，所述离心条件为1500-2000g，离心3-5min ；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同 型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装在硬质塑料试管中，1500_2000g，离心 3-5min，用试管塞封口后4°C保存待用，有效期为45d ；
上述方法中红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液II。管5 :B型RhD阴性，血浆中包含抗A的全血质控品
a)全血质控品原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型RhD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理全血或红细胞悬液经过1500-2000g，离心3-5min弃上清得到压积红细胞，将同型压积红细胞汇集混勻后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液，洗涤三次每次洗涤后均进行离心处理，弃去上清，最后制备成压积红细胞， 所述离心条件为1500-2000g，离心3-5min ；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后同型的新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，再添加终浓度为0.01-0. 10mg/ml的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分装在硬质塑料试管中，1500_2000g，离心 5min，用试管塞封口后4°C保存待用，有效期为45d ；
上述方法中红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液II。交叉配血反应靶值的确定
管3作为受者，管4作为不相合供者(IgG抗体阳性对照)，管5作为相合供者(阴性对照)，进行交叉配血试验，结果为管3与管4主侧不相合，次侧相合；结果为管3与管5主次侧均相合。③交叉配血IgM类抗体组包括管6、管7和管8。管6 :B型RhD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 制备方法同管4。管7 :A型RhD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 制备方法同管1。管8 :0型RhD阳性，血浆中包含抗-A，B的全血质控品
a)全血质控品原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的O型RhD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；
b)原料标本的处理全血或红细胞悬液经过1500-2000g，离心3-5min弃上清得到压积红细胞，将同型压积红细胞汇集混勻后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液，洗涤三次每次洗涤后均进行离心处理，弃去上清，最后制备成压积红细胞， 所述离心条件为1500-2000g，离心3-5min ；
c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装在硬质塑料试管中，1500_2000g，离心
3-5min,用试管塞封口后4°C保存待用，有效期为45d。 上述方法中红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液II。交叉配血反应靶值的确定
管6或管7作为受者，管7或管6作为主侧不相合供者(IgM抗体阳性对照)，管8作为主侧相合供者(阴性对照)，进行交叉配血试验，结果为管6与管7之间主次侧均不相合，管 6或管7与管8之间主侧相合，次侧不相合。实施例3试剂盒的使用
①ABO、RhD血型、不规则抗体筛查单独或联合室内质控
可以选择管1和管2质控品。其中A抗原、B抗原、D抗原、IgG抗-D互为阴阳性对照。 常规检测前将质控品恢复至室温后使用，所用质控标本类型应与实验项目要求相一致，检测操作人员必须具备上岗资质，仪器设备及室内温度、环境均应符合要求。②交叉配血IgG类抗体组包括管3、管4和管5。管3作为受者，管4作为不相合供者(IgG抗体阳性对照)，管5作为相合供者(阴性对照)。常规检测前将质控品恢复至室温后使用，所用质控标本类型应与实验项目要求相一致，检测操作人员必须具备上岗资质，仪器设备及室内温度、环境均应符合要求。③交叉配血IgM类抗体组包括管6、管7和管8。管6或管7作为受者，管7或管6作为主侧不相合供者(IgM抗体阳性对照)，管8 作为主侧相合供者(阴性对照)。常规检测前将质控品恢复至室温后使用，所用质控标本类型应与实验项目要求相一致，检测操作人员必须具备上岗资质，仪器设备及室内温度、环境均应符合要求。实施例4试剂盒的性能评价试验主要性能指标评价
以实施例2中制备的管2质控品为例进行性能评价试验，抽取10例连续进行观察，得到了 0、35、42、49天B抗原强度、IgM抗-A抗体、IgG抗-D抗体、质控品上清游离血红蛋白 (FHb)含量等指标(结果见表1)，证明使用该制备技术得到质控品，主要性能参数稳定，符合输血相容性检测室内质控的相关要求；
权利要求
1.一种输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，该试剂盒是由下述8支改良全血质控品组成管1 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 管2 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品； 管3 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品； 管4 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管5 :B型IihD阴性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管6 :B型IihD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品； 管7 :A型IihD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品； 管8 :0型IihD阳性，血浆中包含抗-A，B的全血质控品。
2.根据权利要求1所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述A型 RhD阳性，血浆中包含抗-B的全血质控品通过下述方法制备a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的A型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。
3.根据权利要求1所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述B型 RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D的全血质控品通过下述方法制备a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；c)IgG抗-D血清的标化使用1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的 B型MiD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的血浆作为倍比稀释介质对商品化IgG型抗-D血清进行效价滴定，选择出现2+凝集的最高稀释倍数作为标准；d)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，按照上步得到的稀释倍数标准添加IgG型抗-D血清，再添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分装，离心，密封，4°C保存待用。
4.根据权利要求1所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述B型 RhD阳性，血浆中包含抗A的全血质控品通过下述方法制备a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。
5.根据权利要求1所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述B型 RhD阴性，血浆中包含抗A的全血质控品通过下述方法制备a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的B型IihD阴性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。
6.根据权利要求1所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述O型 RhD阳性，血浆中包含抗-A，B的全血质控品通过下述方法制备a)原料的选择选择1名或多名健康献血者捐献的保存时间在10天以内的O型IihD阳性、不规则抗体筛查试验和直接抗人球蛋白试验均为阴性的全血或红细胞悬液，及同型新鲜冰冻血浆；b)原料标本的处理所述全血或红细胞悬液经过离心，弃上清得到压积红细胞，然后使用其3-6倍体积的0. 9%生理盐水或红细胞保存液或PBS缓冲液离心洗涤三次，制备成压积红细胞备用；c)质控品的配置将洗涤后压积红细胞、红细胞保存液、解冻后的同型新鲜血浆按 1-10:5-20:10-30的体积比配置成全血质控品，在质控品中添加终浓度为0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸庆大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分装，离心，密封，4°C保存待用。
7.根据权利要求2-6任一权利要求所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述红细胞保存液为MAP红细胞保存液或血液保存液II。
8.根据权利要求2-6任一权利要求所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述质控品制备方法中离心条件为1500-2000g，离心3-5min。
9.根据权利要求3所述的输血相容性检测室内质控品试剂盒，其特征在于，所述IgG型抗-D血清进行效价滴定采用微柱凝胶抗人球法。
全文摘要
本发明公开了一种输血相容性检测室内质控品试剂盒。该试剂盒是由8支改良全血质控品组成管1A型RhD阳性，血浆中包含抗-B；管2B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D；管3B型RhD阴性，血浆中包含抗A和IgG抗-D；管4B型RhD阳性，血浆中包含抗A；管5B型RhD阴性，血浆中包含抗A；管6B型RhD阳性，血浆中包含抗A；管7A型RhD阳性，血浆中包含抗-B；管8O型RhD阳性，血浆中包含抗-A,B。该试剂盒中的质控品能够同时在常用的多种方法或检测体系中使用，且确保其结果的稳定性和可比性；而且可以实现常规输血相容性检测全部5项试验的室内质控。
文档编号G01N33/49GK102183631SQ20111004308
公开日2011年9月14日 申请日期2011年2月23日 优先权日2011年2月23日
发明者于洋, 关晓珍, 冯倩, 张晓娟, 汪德清, 陈麟凤, 马春娅 申请人:中国人民解放军总医院