专利名称：用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于医学检验测定技术领域，具体涉及一种用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒。
背景技术：
酮体是脂肪代谢的产物，正常人体内的每个细胞均含有脂肪酸，当体内需要更多的能量，如超出摄入食物产生的葡萄糖能提供的能量时，就要求脂肪细胞释放脂肪酸进入血液，然后脂肪酸被运输到肝脏转化为酮体。该酮体包括丙酮、乙酰乙酸和β-羟丁酸，这三者处于动态平衡之中。其中羟丁酸含量最多，可占酮体总量的75%。酮体和血糖一样，是检测代谢控制的一项重要的标记物。I型糖尿病病人的最重要的特征之一就是易发展成为酮症酸中毒，酮症酸中毒是一种威胁生命的疾病，因此及时准确地检测酮体水平是十分关键的预知酮症酸中毒的重要手段。此外，酮体还是监测糖尿病控制和诊断酮症酸中毒以及监测治疗的重要标志物。特别是糖尿病孕妇易发展成为高酮体水平，这可能极大的影响胎儿的生长发育。 在糖尿病控制不良的孕妇中，母体酮血症与死胎率增高相关，并且会削弱婴儿的神经生理功能的发展。另外监测血酮体对控制酮源性饮食也十分必要。目前，酮体试验普遍采用的是以硝普盐反应为基础的定性或半定量检测，并且只检测乙酰乙酸或丙酮；其中乙酰乙酸只占酮体23%且不稳定，丙酮占酮体2%。而且，该方法采用的是化学法，因此造成灵敏度低、特异性差，有较高的假阳性或假阴性结果。此外，在糖尿病酮症发生早期，β-羟丁酸有明显升高，而乙酰乙酸尚无明显反应；在酮症酸中毒恢复期，β-羟丁酸迅速下降时，乙酰乙酸在一定时间内仍然保持下降缓慢。因此，羟丁酸测定在糖尿病控制好坏的预告中比乙酰乙酸更敏感、可靠。同样，在糖尿病酮症及其他碳水化合物代谢障碍的诊断、监测与治疗中，也是一个很好的指标。羟丁酸检测方法有高效液相色谱法、化学方法和酶法，其中酶法测定血清 β-羟丁酸因具有准确、简便、快速、灵敏和特异的特点，受到临床的广泛重视。目前有2种方法，其一是酶动力学法，在辅酶I(NAD+)存在的条件下，羟丁酸在羟丁酸脱氢酶的作用下生成乙酰乙酸、还原型辅酶I (NADH)及氢离子，反应生成的还原型辅酶I (NADH)在 340nm吸光度的变化可以间接反映病人血清中的β-羟丁酸的浓度。其反应过程如下
β -羟丁酸脱氢酶
羟丁酸+辅酶I _ 乙酰乙酸+还原型辅酶I +氢离子另一方法为循环酶比色法，是在羟丁酸脱氢酶反应基础上偶联黄递酶，使色原(硝基四氮唑蓝，氧化型INT)生成红色色素(还原型ΙΝΤ)，在505nm处测定吸光度的变
化，计算样品中羟丁酸的含量。其反应过程如下
权利要求
1. 一种用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中试剂1的各组分及其浓度范围为缓冲液(ρΗ 7. 0-9. 0) 50-500 mmol/L(3-羟丁酸脱氢酶1- 5 KU/L 1- 5 KU/L 0.1-100 g/L 1-100 mmol/L 0.1-100 g/L 0.1-100 g/L 0.1-100 ml/L；1-20 mmol/L 0.1-10 mmol/L 1-100 mmol/L 0.1-100 ml/L。黄递酶表面活性剂稳定剂抗干扰剂I 抗干扰剂II 防腐剂试剂2的各组分及其浓度范围为缓冲液(ρΗ 3. 0-6. 0) 50-500 mmol/L辅酶I硝基四氮唑蓝稳定剂防腐剂
2.根据权利要求1所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述述试剂1中的缓冲液为Tris缓冲液、GOOD’ S缓冲液、三乙醇胺缓冲液中的一种。
3.根据权利要求2所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述述试剂1中的缓冲液为三乙醇胺缓冲液。
4.根据权利要求1所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述试剂2中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、甘氨酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液中的一种。
5.根据权利要求4所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述试剂2中的缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液。
6.根据权利要求1所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述的表面活性剂为Tween 20、Tween 80、Brij 35、Triton X-100中的一种。
7.根据权利要求1所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述的稳定剂是多元醇、BSA、β-环糊精、甘露醇中的一种。
8.根据权利要求1所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述的抗干扰剂I和抗干扰剂II均为选自草酸盐、草酸、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、维生素C氧化酶、谷胱甘肽中的一种。
9.根据权利要求1所述用循环酶法测定羟丁酸的液体稳定试剂盒，其特征在于 所述的防腐剂为NaN3或proclin系列防腐剂。
全文摘要
本发明公开一种用循环酶法测定β-羟丁酸的液体稳定试剂盒，由试剂1和2组成，试剂1缓冲液50-500mmol/L，β-羟丁酸脱氢酶1-5KU/L，黄递酶1-5KU/L，表面活性剂0.1-100g/L，稳定剂1-100mmol/L，抗干扰剂I 0.1-100g/L，抗干扰剂II 0.1-100g/L，防腐剂0.1-100ml/L；试剂2缓冲液50-500mmol/L，辅酶I 1-20mmol/L，硝基四氮唑蓝0.1-10mmol/L，稳定剂1-100mmol/L，防腐剂0.1-100ml/L。本发明具有稳定、线性范围大、测量准确度和精密度高、抗干扰能力强、成本较低的优点。
文档编号G01N33/64GK102435749SQ201110267888
公开日2012年5月2日 申请日期2011年9月2日 优先权日2011年9月2日
发明者沃燕波, 邹炳德 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司