一种苦参苍术口服液质量检测方法
【专利摘要】本发明提供了一种苦参苍术口服液质量检测方法，所述质量检测方法包括鉴别和含量测定方法，利用薄层色谱法定性鉴别该口服液中一种或几种有效成分，以及使用高效液相色谱法测定该口服液中苦参含量，通过建立专属性强的鉴别方法、有效的检查方法及重复性、准确性好的含量测定方法，能够有效控制该产品的质量，保证其临床使用安全、有效、稳定。
【专利说明】一种苦参苍术口服液质量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种口服液的质量检测方法，具体地说，涉及一种中药口服液的质量检测方法。
【背景技术】
[0002]自20世纪40年代青霉素发现以来，抗生素的发展突飞猛进，为控制和治疗细菌引起的感染提供了有力的工具。但是由于抗生素的不合理使用，导致产生日趋严重的耐药性问题。耐药菌不仅使抗生素的疗效减弱，治疗费用增加，而且还会引起并发症，甚至使抗生素失去疗效，导致病人、患畜死亡率升高。特别是近年来，临床上出现了多重、超强耐药菌株，使得抗菌药失去了原有的疗效，从而使得大肠杆菌耐药性问题的解决变得更加棘手。致病性大肠杆菌可引起禽败血性大肠杆菌病、肠炎、脐炎、心包炎等，甚至还导致胚胎和幼雏的死亡，因此如何消除或降低大肠杆菌的耐药性，使其重新恢复对抗菌药物的敏感性，以及在开发特效的新药之前，延缓抗菌药物耐药性的产生速度，减少抗菌药物的用量和毒性，对于解决耐药性问题具有重要的意义。中药作用靶点多，恰好针对细菌耐药机制复杂的特点，以恢复细菌对抗生素的敏感性，现有研究亦提示开发中药细菌耐药逆转剂有较好的前景。
[0003]复方苍术口服液是通过对苍术等多种中药筛选出的中药复方制剂，由苍术和苦参经一定的制备工艺制得的口服液，具有清热解毒、燥湿利水、杀虫去积、祛风散寒、健脾明目等功效，对大肠杆菌感染的疾病具有很好的治疗作用。
[0004]苦参苍术口服液是基于临床经验处方开发的中药口服溶液制剂，尚无质量标准，不利于控制其质量，为保证临床使用安全、有效、稳定，有必要建立一个完善的质量标准及其检测方法。
【发明内容】
[0005]为解决现有技术的不足，本发明的主要目的在于提供一个苦参苍术口服液的质量标准及其检测方法，通过确定其质量标准和检测方法，可增强该药的有效性、质量可控性和稳定性。
[0006]本发明提供了一种苦参苍术口服液质量检测方法，所述质量检测方法包括鉴别和/或含量测定方法:
[0007]所述鉴别方法包括:
[0008](I)将所述苦参苍术口服液待测样品和苍术对照溶液分别点于同一薄层板，利用薄层色谱法分离成分，所述待测样品色谱中，在与所述苍术对照溶液色谱相应的位置上，应显相同颜色的主斑点；
[0009](2)将所述待测样品和苦参碱对照溶液分别点于同一薄层板，利用薄层色谱法分离成分，所述待测样品色谱中，在与所述苦参碱对照溶液色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；
[0010]所述苦参苍术口服液待测样品中苦参含量测定方法包括:[0011]使用高效液相色谱法测定所述待测样品中苦参含量，其中，色谱条件为以氨基键合硅胶为填充剂；以80:10:10的乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液为流动相；系统适用性条件为检测波长220nm，理论塔板数按苦参碱峰计算应不低于1500 ；
[0012]分别精密吸取对照品溶液与待测样品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪进行测定。
[0013]优选地，所述鉴别方法(1)中，所述薄层板为硅胶G薄层板，展开剂为比例为20:1的石油醚^(T90°C )-乙酸乙酯，所述分离步骤结束后使用5%对二甲基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液显色；
[0014]所述鉴别方法⑵中，所述薄层板为硅胶G薄层板，展开剂为比例为16:6:1的甲苯-丙酮-甲醇混合溶液，所述分离步骤结束后使用改良碘化铋钾试液显色。
[0015]优选地，所述质量检测方法还包括溶剂残留测定法，所述溶剂残留测定法包括:精密称取三氯甲烷对照品适量，用DMF配制60μ g/ml的三氯甲烷溶液，作为对照品溶液；直接取供试品做为供试品溶液；分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各I μ 1，注入气相色谱仪，记录色谱图；所述供试品溶液色谱图中如有三氯甲烷峰，所述三氯甲烷峰峰面积不得大于所述对照品溶液主峰面积。
[0016]优选地，所述苦参苍术口服液待测样品中苦参含量测定方法包括:
[0017]制备苦参含量对照溶液，使用80:20的乙腈-无水乙醇溶解苦参碱，配制成每Iml含50 μ g的所述苦参对照溶液；
[0018]制备待测含量样品溶液，采用系列稀释法，以80:20的乙腈-无水乙醇为溶剂稀释所述苦参苍术口服液待测样品。
[0019]优选地，所述苦参苍术口服液待测样品按下述方法制备:
[0020]苍术1160g，苦参2500g。制法:苍术加水蒸馏，收集蒸馏液，4°C冷藏，分离油层，得苍术挥发油；苦参加水煎煮二次，每次2小时，合并所述煎液，过滤，所述滤液浓缩至70°C时相对密度为1.l(Tl.20，所述滤液用75%乙醇沉淀，并在4°C静置过夜，过滤，回收乙醇，加水至每Iml含生药约1.5g，用20%氢氧化钠溶液调pH值至fl I，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷提取液，过滤，回收溶剂至无三氯甲烷气味，得浸膏；
[0021]所述苍术挥发油加入30g吐温-80，搅拌均匀，加30%乙醇200ml溶解，所述苦参浸膏加30%乙醇200ml溶解，所述两种溶液混合均匀，调节pH值至5.0-7.5，加入苯甲酸钠2g，加水至 1000mlo
[0022]更优选地，所述苦参苍术口服液待测样品中每Iml含苦参以苦参碱(C15H24N2O)计，不得少于4.0mg0
[0023]本发明提供了苦参苍术口服液的质量标准及其检验方法，与之前的经验处方相t匕，通过建立专属性强的鉴别方法、有效的检查方法及重复性、准确性好的含量测定方法，能够有效控制该产品的质量，保证其临床使用安全、有效、稳定。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1为苍术鉴别薄层色谱图；
[0025]图2为苦参鉴别薄层色谱图；
[0026]图3a_3c分别为供试品，苦参碱对照品，缺苦参阴性对照高效液相色谱图。
【具体实施方式】[0027]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0028]苦参苍术口服液的药物配方为:苍术1160g，苦参2500g。制法:苍术加水蒸馏，收集蒸馏液，4°C冷藏，分离油层，得苍术挥发油，备用。苦参加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，浓缩至相对密度1.l(Tl.20 (70°C )，用75%乙醇沉淀，4°C静置过夜，滤过，回收乙醇，加水至每Iml含生药约1.5g，用20%氢氧化钠溶液调pH值至9~11，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷液，滤过，回收溶剂至无三氯甲烷气味，得浸膏，备用。苍术挥发油加入30g吐温-80，搅拌均匀，加30%乙醇200ml溶解，苦参浸膏加30%乙醇200ml溶解，以上溶液混合均匀，调pH值至5.0-7.5，加入苯甲酸钠2g，加水至1000ml。
[0029]质量控制方法如下:
[0030]鉴别:
[0031 ] (I)取本品Iml,加水9ml,用正己烧提取二次,每次IOml,合并正己烧液,挥干,残渣加正己烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取苍术对照药材0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2飞μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(6(T90°C)-乙酸乙酯(20:1)为展开剂，取出，晾干，喷以5%对二甲基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，应显相同的乌绿色主斑点(苍术素)。
[0032](2)取本品1ml，加水9ml混匀，加浓氨试液调节pH至11，用三氯甲烷提取三次，每次10ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷IOml使溶解，作为供试品溶液。另取苦参碱对照品，加三 氯甲烷制成每Iml含0.2g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2~4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲醇(16:6:1)为展开剂，置氨蒸汽预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
[0033]检查:
[0034]pH值应为5.5~7.5 (《中国兽药典》2005年版一部附录51页)。
[0035]相对密度应为0.90~1.05 (《中国兽药典》2005年版一部附录43页)。
[0036]该苦参苍术口服液待测样品相对密度的检测方法按照《中国兽药典》2005年版一部附录43页所述方法进行，优选地，该检测方法为比重瓶法，详情如下:
[0037]A取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品(温度应低于20°C或各品种项下规定的温度)后，装上温度计(瓶中应无气泡)，置20°C (或各品种项下规定的温度)的水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20°C (或各品种项下规定的温度)，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量，按下式计算，即得。
[0038]
【权利要求】
1.一种苦参苍术口服液质量检测方法，所述质量检测方法包括鉴别和/或含量测定方法: 所述鉴别方法包括: (1)将所述苦参苍术口服液待测样品和苍术对照溶液分别点于同一薄层板，利用薄层色谱法分离成分，所述待测样品色谱中，在与所述苍术对照溶液色谱相应的位置上，应显相同颜色的主斑点； (2)将所述待测样品和苦参碱对照溶液分别点于同一薄层板，利用薄层色谱法分离成分，所述待测样品色谱中，在与所述苦参碱对照溶液色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑占.所述苦参苍术口服液待测样品中苦参含量测定方法包括: 使用高效液相色谱法测定所述待测样品中苦参含量，其中， 色谱条件为以氨基键合硅胶为填充剂；以80:10:10的乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液为流动相；系统适用性条件为检测波长220nm，理论塔板数按苦参碱峰计算应不低于1500 ； 分别精密吸取对照品溶液与待测样品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪进行测定。
2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其中，所述鉴别方法(I)中，所述薄层板为硅胶G薄层板，展开剂为比例为20:1的6(T90°C级石油醚-乙酸乙酯，所述分离步骤结束后使用5%对二甲基苯甲醒的10%硫酸乙醇溶液显色； 所述鉴别方法(2)中，所述薄层板为硅胶G薄层板，展开剂为比例为16:6:1的甲苯-丙酮-甲醇混合溶液，所述·分离步骤结束后使用改良碘化铋钾试液显色。
3.根据权利要求1所述的质量检测方法，所述质量检测方法还包括溶剂残留测定法，所述溶剂残留测定法包括:精密称取三氯甲烷对照品适量，用DMF配制60 μ g/ml的三氯甲烷溶液，作为对照品溶液；直接取供试品作为供试品溶液；分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各1μ 1，注入气相色谱仪，记录色谱图；所述供试品溶液色谱图中如有三氯甲烷峰，所述三氯甲烷峰峰面积不得大于所述对照品溶液主峰面积。
4.根据权利要求1所述的质量检测方法，其中，所述苦参苍术口服液待测样品中苦参含量测定方法包括: 制备苦参含量对照溶液，使用80:20的乙腈-无水乙醇溶解苦参碱，配制成每Iml含50 Ug的所述苦参对照溶液； 制备待测含量样品溶液，采用系列稀释法，以80:20的乙腈-无水乙醇为溶剂稀释所述苦参苍术口服液待测样品。
5.根据权利要求1所述的质量检测方法，其中，所述苦参苍术口服液待测样品按下述方法制备: 苍术1160g，苦参2500g。制法:苍术加水蒸馏，收集蒸馏液，4°C冷藏，分离油层，得苍术挥发油；苦参加水煎煮二次，每次2小时，合并所述煎液，过滤，所述滤液浓缩至70°C时相对密度为1.l(Tl.20，所述滤液用75%乙醇沉淀，并在4°C静置过夜，过滤，回收乙醇，加水至每Iml含生药约1.5g，用20%氢氧化钠溶液调pH值至fl I，用三氯甲烷提取三次，合并三氯甲烷提取液，过滤，回收溶剂至无三氯甲烷气味，得浸膏； 所述苍术挥发油加入30g吐温-80，搅拌均匀，加30%乙醇200ml溶解，所述苦参浸膏加30%乙醇200ml溶解，所述两种溶液混合均匀，调节pH值至5.0-7.5，加入苯甲酸钠2g，加水至1000ml0
6.根据权利要求6所述的质量检测方法，其中，所述苦参苍术口服液待测样品每Iml含苦参以苦参碱C15H24N2·O计，不得少于4.0mg。
【文档编号】G01N30/02GK103852553SQ201210495546
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年11月28日 优先权日:2012年11月28日
【发明者】张许科, 刘兴金, 张晓会 申请人:洛阳惠中兽药有限公司