专利名称：淫益增蛋超微粉成分补骨脂素及异补骨脂素的鉴别方法
技术领域：
本发明涉及两种超微粉成分的鉴别，特别涉及一种能鉴别淫益增蛋超微粉中补骨脂素及异补骨脂素的试验方法。
背景技术：
目前在国家各类中兽药制剂质量标准中，其成分药的薄层鉴别平均约为处方中药材总量的30%，无法全方位监控制剂质量。尤其是超微粉制剂，药材的显微特征已不复存在，显微鉴别对其束手无策，用薄层鉴别定性控制制剂中特征性标示成分，可控制制剂质量，使得药物制剂符合质量标准达到其治疗效果。对药材补骨脂的薄层鉴别方法，中国兽药典2010年版对其有详细描述，但对含补骨脂的复方制剂使用此方法鉴别补骨脂成分补骨脂素与异补骨脂素时，干扰较大，斑点不清晰，难以达到中国兽药典的要求。现公开的薄层鉴别方法测定含补骨脂的复方中兽药中补骨脂素与异补骨脂素时，斑点清晰，结果易于观察。
发明内容
本发明的目的在于公开一种能鉴别淫益增蛋超微粉中补骨脂素及异补骨脂素的试验方法，通过多次重复试验证实该方法对于淫益增蛋超微粉中补骨脂素及异补骨脂素的鉴别操作简单、结果易于观察。本发明一种能鉴别淫益增蛋超微粉中补骨脂素及异补骨脂素的试验方法，该方法包括以下步骤:第一步:取淫益增蛋超微粉2.7g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的混合溶液。第三步:吸取供试品及对照品各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。本发明方法的建立过程如下:仪器与试剂仪器:AUW220D1/1万电子天平JCX-400GZ超声波清洗器。薄层自动点样仪，全自动薄层色谱成像系统。试剂:补骨脂素与异补骨脂素对照品；薄层层析硅胶G板；乙酸乙酯、甲醇、氢氧化钾均为市售分析纯。薄层鉴别方法的建立对照品溶液制备:按2010年版中国兽药典要求取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。样品溶液的制备:取本品粉末约2.7g,加乙酸乙酯20ml,超声处理15min,滤过,滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。阴性样品的制备:按照淫益增蛋超微粉的处方制备不含补骨脂的阴性对照样品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。薄层色谱试验:吸取供试品及对照品各5μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以正己烷-乙酸乙酯(4:1)和环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，置紫外灯(365nm)下检视，结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，可检出补骨脂素、异补骨脂素；使用环己烷-乙酸乙酯4:1与正己烷-乙酸乙酯4:1作为展开剂相t匕，结果显示使用环己烷-乙酸乙酯4:1作为展开剂，供试品色谱斑点更清晰，也无拖尾，背景无干扰，经无补骨脂阴性样品对照，色谱无干扰。重复3次，结果相同。结论本发明优于已公开的技术，方法简单，又能达到中国兽药典的要求。尤其适用于含补骨脂的复方淫益增蛋超微粉。
图1是药材补骨脂的薄层色谱图，A是采用中国兽药典2010年版所述方法做出的补骨脂薄层色谱图是采用本发明所述方法做出的补骨脂薄层色谱图，斑点从左到右第一个为补骨脂素及异补骨脂素对照品，第二至第四为补骨脂样品。图2是采用本发明所述方法做出的淫益增蛋超微粉的薄层色谱图，斑点从左到右第一个为空白对照，第二个为无补骨脂淫益增蛋超微粉阴性对照样品，第三个为补骨脂素及异补骨脂素对照品，最后两个为淫益增蛋超微粉样品。图3是淫益增蛋超微粉的薄层色谱图，A是采用中国兽药典2010年版所述方法做出的淫益增蛋超微粉的薄层色谱图；B是采用本发明所述方法所做不同批次淫益增蛋超微粉的薄层色谱图，斑点从左到右第一个为补骨脂素及异补骨脂素对照品，第二至第五为淫益增蛋超微粉样品，最后一个为异补骨脂素对照品。图4是采用本发明所述方法所做补肾壮阳散的薄层色谱图，斑点从左到右第一个为补骨脂素及异补骨脂素对照品，第二至第四为补肾壮阳散样品。
具体实施方案以下结合实施例，举例说明本发明方法的具体实施方式
，详述如下:实施例1中华人民共和国兽药典二 O — O年版二部补骨脂药材的薄层鉴别。第一步:取补骨脂粉末0.5g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每ml各含2mg的混合溶液。
第三步:吸取供试品及对照品各2-4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。实施例2采用本发明所述方法对补骨脂药材进行薄层鉴别。第一步:取补骨脂粉末0.5g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每ml各含2mg的混合溶液。第三步:吸取供试品及对照品各2-4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。实施例3采用中华人民共和国兽药典二 O — O年版二部补骨脂的薄层鉴别，鉴别淫益增蛋超微粉中补骨脂素及异补骨脂素的试验方法，第一步:取淫益增蛋超微粉2.7g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的混合溶液。第三步:吸取供试品及对照品各2-4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液。第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。实施例4无补骨脂淫益增蛋超微粉阴性对照的阴性干扰试验的试验方法。第一步:取淫益增蛋超微粉2.7g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取不含补骨脂的淫益增蛋超微粉阴性样品2.7g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为阴性对照品溶液。第三步:取乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为空白对照品溶液。第四步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的混合溶液。第五步:吸取供试品及对照品各2-4 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，第六步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点，空白对照及阴性对照样品均无相应斑点。
表明本方法对鉴别淫益增蛋散中的补骨脂素及异补骨脂素专属性较强。实施例5采用本发明所述方法对淫益增蛋超微粉中补骨脂素及异补骨脂素的薄层鉴别。第一步:取淫益增蛋超微粉2.7g,加乙酸乙酯20ml,超声处理15min,滤过,滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的混合溶液。第三步:吸取供试品及对照品各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。实施例6采用本发明所述方法对补肾壮阳散中补骨脂素及异补骨脂素的薄层鉴别。第一步:取补肾壮阳散15g，加乙酸乙酯30ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的混合溶液。第三步:吸取供试品及对照品各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。表明本方法同样适用于检验含补骨脂复方中的补骨脂素及异补骨脂素。
权利要求
1.一种具有鉴别淫益增蛋超微粉成分补骨脂素及异补骨脂素的试验方法，其特征在于该试验方法包括下述步骤: 第一步:取淫益增蛋超微粉2.7g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液； 第二步:取补骨脂素、异补骨脂素对照品，加甲醇制成每ml各含0.2mg的混合溶液； 第三步:吸取供试品及对照品各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液； 第四步:置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的两个荧光斑点。
2.如权利要求1所述，淫益增蛋超微粉的成分补骨脂素及异补骨脂素的鉴别方法特征在于:此方法用于鉴别淫益增蛋超微粉复方中的补骨脂素及异补骨脂素。
3.如权利要求1所述的对照品混合溶液，其特征在于:将补骨脂素及异补骨脂素共同溶于甲醇溶液中。
4.如权利要求1所述，此试验方法所用展开剂为体积比4:1的环己烷-乙酸乙酯。
全文摘要
本发明公开了一种用于淫益增蛋超微粉中成分的鉴别方法，可用于补骨脂素及异补骨脂素的定性分析，该方法在中药材补骨脂普通薄层鉴别的基础上改进了展开剂用于中兽药复方中的成分鉴别，通过对无补骨脂药材的阴性对照进行鉴别表明此方法对于中兽药复方淫益增蛋超微粉的鉴别斑点清晰，结果理想，大大拓宽薄层鉴别检测途径，有效提高了中兽药成方制剂中的薄层鉴别增订率。
文档编号G01N30/90GK103185767SQ201210528730
公开日2013年7月3日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者郭振环, 马霞, 张国祖, 马仲彬, 刘琴, 智艳霞, 董从刚 申请人:河南省康星药业股份有限公司