脱落细胞芯片的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种制备高通量脱落细胞芯片的技术和方法。利用宫颈刷收集26例宫颈病变患者的宫颈脱落细胞，立即放入细胞保存液中；离心、弃上清，加入细胞固定液固定细胞沉淀；脱水透明、浸蜡。利用组织芯片仪制备脱落细胞石蜡芯、脱落细胞石蜡块阵列，石蜡切片制备脱落细胞芯片。克服了常规脱落细胞学检查的缺陷，所制备的脱落细胞芯片可用于病理诊断、IHC、原位杂交等分子医学研究。
【专利说明】脱落细胞芯片
【技术领域】
[0001]本发明属于生物芯片领域，涉及一种用于制备微阵列脱落芯片的生物芯片及制备方法。
【背景技术】
[0002]生物芯片是指包被在硅片、尼龙膜等固相支持物上的高密度组织、细胞、蛋白质、核酸、糖类以及其他生物组分的高通量微阵列。利用高通量生物芯片，通过特异性分子杂交及染色技术，对受检样本进行检测，可准确、快速获取大量的分子检测信息。目前已广泛应用于生命科学研究、临床医学分子诊断、以及生物抗体靶向药物筛查和验证等领域。
[0003]脱落细胞学检查是早期诊断癌症的重要手段之一，其基本操作程序是:离心收集脱落细胞、将细胞沉淀缓慢滴于载玻片上、制备细胞涂片、染色阅片病理诊断。其不足在于:1.所制备的细胞涂片上极容易出现细胞重叠的现象，导致肿瘤细胞难以辨认；2.肿瘤细胞有可能被其他碎片组织或组织团块掩盖，导致检测结果假阴性；3.脱落肿瘤细胞团块不能有效分散，导致病理诊断分型困难；4.在染色过程中，没有被载玻片有效吸附的肿瘤细胞，即有可能被洗脱掉，导致假阴性结果；5.由于是采用针对细胞的细胞学染色，难以对肿瘤细胞进行明确的病理分期和分型。6.所制备的一张或数张细胞涂片用于病理染色诊断后，没有脱落细胞样本用于更进一步的检测及其他研究实验。
【发明内容】
[0004]本发明旨在提供一种制备高通量脱落细胞芯片的技术和方法。克服了上述脱落细胞学检查的缺陷，所制备的脱落细胞芯片可用于病理诊断、IHC、原位杂交等分子医学研究。
[0005]本发明通过以下技术方案实现发明目的。利用宫颈刷收集26例宫颈病变患者的宫颈脱落细胞，立即放入细胞保存液中；离心、弃上清，加入细胞固定液固定细胞沉淀；脱水透明、浸蜡。利用组织芯片仪制备脱落细胞石蜡芯、脱落细胞石蜡块阵列，连续石蜡切片制备脱落细胞芯片。所制备的脱落细胞芯片病理染色效果显著优于常规细胞涂片染色效果。由于脱落细胞高度密集，石蜡切片较薄(4um)，且可以连续切片，约1.7mm3的细胞沉淀块理论上可以制作切片250张，极大提高了脱落细胞的使用效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0006]图1是阵列空心石腊块腊I旲的不意图:所有孔径为1.5mm,孔间距为2mm。
[0007]图2是脱落细胞阵列石蜡块的示意图:脱落细胞石蜡芯柱直径为1.5mm,脱落细胞石蜡芯柱间距为2_。
[0008]图3是脱落细胞芯片的示意图:脱落细胞石蜡芯片点直径为1.5_，脱落细胞石蜡芯片点间距为2mm。标记1:为脱落细胞芯片固相载体(粘附载玻片)上的磨沙标记区域。
【具体实施方式】[0009]实施例:在充分知情同意的基础上，收集42例宫颈病变患者的宫颈脱落细胞，制备脱落细胞芯片。
[0010]1.1脱落细胞收集:利用宫颈刷收集42例宫颈病变患者的宫颈脱落细胞，立即放入细胞保存液中充分洗脱宫颈刷上的细胞。离心、去上清液，收集脱落细胞沉淀。
[0011]1.2脱落细胞固定:向脱落细胞沉淀中加入Iml细胞固定液，充分混匀，室温固定I小时。
[0012]1.3脱水包埋:离心收集脱落细胞，中性PBS缓冲液洗涤脱落细胞2次。酒精梯度脱水后，脱脂透明，离心收集处理好的脱落细胞。将脱落细胞加入50ul预热融化的石蜡中，混匀。冷却固定成脱落细胞石蜡块。
[0013]1.4脱落细胞蜡芯:利用组织芯片制备仪石蜡芯取样器，钻取直径为1.5mm的脱落细胞蜡芯。
[0014]1.5受体蜡模:制备空白石蜡块，利用组织芯片制备仪定位钻取孔径为1.5ml的空心受体蜡模，如附图1。孔间距为2mm。
[0015]1.6脱落细胞阵列:依照脱落细胞芯片的设计，将总共26例精子石蜡芯逐一安放到空心受体蜡模中相应的空白孔位点，以阵列表面齐平为基准，如附图2。
[0016]1.7阵列融合:将精子阵列置于干燥箱中，调节干燥箱温度与时间，确保所有脱落细胞石蜡芯与受体蜡模充分融合且脱落细胞石蜡芯不移位变形。
[0017]1.8石蜡切片:利用石蜡切片机切片连续切片，片厚4um。将石蜡切片平铺与粘附载玻片上，如附图3。在载玻片标记区域作好标记。
[0018]1.9脱落细胞芯片制作完毕。所制备的脱落细胞芯片可用于常规HE染色、免疫组化、分子原位杂交等病理诊断以及其他分子医学实验研究。
【权利要求】
1.一种脱落细胞芯片的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: 第一步，脱落细胞收集:利用宫颈刷收集42例宫颈病变患者的宫颈脱落细胞，立即放入细胞保存液中充分洗脱宫颈刷上的细胞。离心、去上清液，收集脱落细胞沉淀。 第二步，脱落细胞固定:向脱落细胞沉淀中加入1ml细胞固定液，充分混匀，室温固定I小时。 第三步，脱水包埋:离心收集脱落细胞，中性PBS缓冲液洗涤脱落细胞2次。酒精梯度脱水后，脱脂透明，离心收集处理好的脱落细胞。将脱落细胞加入50ul预热融化的石蜡中，混匀。冷却固定成脱落细胞石蜡块。 第四步，脱落细胞蜡芯:利用组织芯片制备仪石蜡芯取样器，钻取直径为1.5mm的脱落细胞蜡芯。 第五步，受体蜡模:制备空白石蜡块，利用组织芯片制备仪定位钻取孔径为1.5ml的空心受体蜡模，如附图1。孔间距为2mm。 第六步，脱落细胞阵列:依照脱落细胞芯片的设计，将总共26例精子石蜡芯逐一安放到空心受体蜡模中相应的空白孔位点，以阵列表面齐平为基准，如附图2。 第七步，阵列融合:将精子阵列置于干燥箱中，调节干燥箱温度与时间，确保所有脱落细胞石蜡芯与受体蜡模充分融合且脱落细胞石蜡芯不移位变形。 第八步，石蜡切片:利用石蜡切片机切片制作石蜡切片，片厚4um。将石蜡切片平铺与粘附载玻片上，如附图3。在载玻片标记区域作好标记。
2.根据权利要求1所述的一种脱落细胞芯片的制备方法，其特征在于:脱落细胞是指包括宫颈脱落细胞、气管/支气管脱落细胞、阴道脱落细胞、以及腹水/胸水等各种体腔积液中的脱落细胞。
3.根据权利要求1所述的一种脱落细胞芯片的制备方法，其特征在于:脱落细胞经过脱水包埋处理后，直接用于脱落细胞石蜡芯的制备。
4.根据权利要求1所述的一种脱落细胞芯片的制备方法，其特征在于:脱落细胞芯片为矩形阵列组成，精子石蜡芯片点直径为(但不限于)1.5mm，脱落细胞石蜡芯片点间距为(但不限于)2mm。
【文档编号】G01N1/28GK103900864SQ201210570306
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2012年12月25日 优先权日:2012年12月25日
【发明者】郜恒骏, 张可浩, 张新, 朱华玉, 张宇, 马小慧 申请人:泰州医药城博奥邦科生物科技有限公司